【摘要】： 本研究的主要目的是表達(dá)足量的可溶性促衰變因子(DAF)蛋白用于動(dòng)物試驗(yàn),測(cè)定DAF在血清中的代謝規(guī)律和對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的抑制效果。在本研究中,充分采用了如PCR、載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化、蛋白誘導(dǎo)表達(dá)和液相色譜等技術(shù)得到了高度純化的蛋白質(zhì)。進(jìn)而采用單克隆抗體技術(shù),制備了20株抗-大鼠DAF(rDAF)的單克隆抗體,建立了檢測(cè)可溶性rDAF的ELISA系統(tǒng)(最低濃度下限可達(dá)10 ng/ml)和Western blot用單抗株(可檢出40 ng rDAF蛋白)。通過大鼠的在體試驗(yàn)證明rDAF在大鼠體內(nèi)代謝非常快且對(duì)大鼠血漿補(bǔ)體抑制程度很小,其本身并不適合作為一種補(bǔ)體抑制劑使用。除此以外,還完成了以下兩個(gè)工作:建立了新的高效折疊復(fù)性DAF蛋白的方案;探索了可溶性表達(dá)DAF的可能性并揭示了NusA-DAF融合蛋白形成可溶性包涵體的原因。
[Abstract]:The main purpose of this study was to express sufficient soluble decay factor (DAF) protein in animal experiments and to determine the metabolism of DAF in serum and its inhibitory effect on complement system. In this study, highly purified proteins were obtained by using techniques such as PCR, vector construction, transformation, protein induction and expression, and liquid chromatography. Furthermore, 20 strains of monoclonal antibodies against rat DAF (rDAF) were prepared by using monoclonal antibody technique. An Elisa system for detecting soluble rDAF (the minimum concentration was up to 10 ng/ml) and a monoclonal antibody strain for Western blot (40 ng rDAF protein could be detected) were established. In vivo experiments in rats showed that rDAF was metabolized very quickly and had little inhibition on plasma complement in rats, so it was not suitable for use as a complement inhibitor. In addition, the following two works were accomplished: a new highly folded and refolded DAF protein was established, and the possibility of soluble expression of DAF was explored and the cause of the formation of soluble inclusion body of NusA-DAF fusion protein was revealed.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392;R446.6

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2132682