【摘要】：目的構(gòu)建表達(dá)大鼠促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1/EPO,并檢測(cè)其在體外的表達(dá)。方法從大鼠腎臟獲得EPO基因片段并用RT-PCR方法擴(kuò)增,將其連接于真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1,測(cè)序鑒定后,用脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs),采用免疫組化和RT-PCR檢測(cè)EPO的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定證實(shí)本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒正確,該質(zhì)粒在體外轉(zhuǎn)染大鼠MSCs細(xì)胞后可表達(dá)EPO蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建的pEGFP-N1/EPO重組質(zhì)粒能在體外表達(dá)EPO蛋白。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression plasmid pEGFP-N 1 / EPO expressing rat erythropoietin (EPO) and detect its expression in vitro. Methods EPO gene fragment was amplified from rat kidney by RT-PCR and ligated into eukaryotic expression plasmid pEGFP-N1.After sequencing, (mesenchymal stem cells were transfected into rat bone marrow mesenchymal stem cells by liposome. The expression of EPO was detected by immunohistochemistry and RT-PCR. Results the recombinant expression plasmid was confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. The recombinant plasmid could express EPO protein after transfection into MSCs cells in vitro. Conclusion the recombinant plasmid pEGFP-N _ 1 / EPO can express EPO protein in vitro.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院兒科;
【基金】：重慶市科委項(xiàng)目(2007BB5057) 重慶市計(jì)生委項(xiàng)目(2009C175)~~
【分類號(hào)】：R341

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2127043