本文選題：胎盤 + 間充質(zhì)干細(xì)胞　； 參考：《軍事醫(yī)學(xué)》2015年05期

【摘要】：目的建立間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)衰老模型,探討其衰老的相關(guān)生物學(xué)改變,從而為衰老相關(guān)研究提供有效的細(xì)胞模型工具。方法取新生胎盤組織利用酶消化法分離純化獲得人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。將第3代細(xì)胞接種到培養(yǎng)皿。在完全培養(yǎng)基基礎(chǔ)上分別加入終濃度100、200、300μmol/L的過(guò)氧化氫(H2O2)培養(yǎng)2 h,處理結(jié)束后更換為完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h。進(jìn)行MTT、細(xì)胞周期分析、分化誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)和β-半乳糖苷酶染色驗(yàn)證衰老MSCs模型的建立,應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)衰老相關(guān)基因p16、p21、p53 mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果與對(duì)照組比較,200μmol/L H2O2作用2 h,倒置顯微鏡下見(jiàn)MSCs形態(tài)較為寬大扁平;MTT光密度值顯著下降,流式檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞周期處于G0/G1期細(xì)胞比例增加;成脂、成骨和成軟骨分化能力減弱;β-半乳糖苷酶陽(yáng)性細(xì)胞百分比顯著升高;p16、p21、p53 mRNA表達(dá)水平顯著升高。結(jié)論 200μmol/L H2O2作用2 h可建立MSCs體外衰老模型,該模型細(xì)胞的生物學(xué)變化可能是由p16、p21、p53細(xì)胞周期蛋白的活性調(diào)節(jié)引起的。
[Abstract]:Objective to establish an aging model of mesenchymal stem cells (MSCs) and to explore the biological changes related to its senescence, so as to provide an effective tool for the study of aging. Methods Human placental mesenchymal stem cells (MSCs) were isolated and purified by enzyme digestion. The third passage cells were inoculated into a petri dish. Hydrogen peroxide (H _ 2O _ 2) with final concentration of 100200300 渭 mol / L was added to the complete culture medium for 2 h, and then replaced with the complete medium for 24 h. MTT, cell cycle analysis, differentiation induction test and 尾 -galactosidase staining were used to verify the establishment of aging MSCs model. RT-PCR was used to detect the expression of p16p21 p21 p53 mRNA. Results compared with the control group, 200 渭 mol / L H _ 2O _ 2 treatment for 2 h resulted in a significant decrease in MTT optical density of MSCs under inverted microscope. Flow cytometry showed that the proportion of cells in G _ 0 / G _ 1 phase was increased. The percentage of 尾 -galactosidase positive cells increased significantly, and the expression of p16 p21 and p53 mRNA increased significantly. Conclusion 200 渭 mol / L H _ 2O _ 2 for 2 h can induce the senescence model of MSCs in vitro, and the biological changes of the model cells may be caused by the regulation of cyclin activity in p16 p21 ~ (-1) p53 cells.
【作者單位】： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2106864