本文選題：單核細(xì)胞增生李斯特菌 + vero細(xì)胞�。� 參考：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2010年博士后論文

【摘要】：病原體單核細(xì)胞增生李斯特菌能夠誘導(dǎo)自身侵入非吞噬細(xì)胞,侵入過(guò)程受到宿主細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的緊密調(diào)控。我們?cè)诒狙芯恐袌?bào)道了這一侵入過(guò)程的一個(gè)新的調(diào)節(jié)因子,磷脂酶D (phospholipase D, PLD)。PLD可以特異性地催化水解細(xì)胞膜的重要組成成份-磷脂酰膽堿生成磷脂酸和膽堿,是細(xì)胞內(nèi)的重要信號(hào)效應(yīng)蛋白,參與調(diào)控許多重要細(xì)胞生理過(guò)程,尤其與細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架重排關(guān)系密切。我們發(fā)現(xiàn)李斯特菌在內(nèi)化侵入vero上皮細(xì)胞過(guò)程中能夠刺激宿主PLD的激活。兩種PLD的化學(xué)抑制劑(1-丁醇,2,3-DPG)預(yù)處理細(xì)胞能夠抑制李斯特菌誘導(dǎo)的PLD激活及李斯特菌的內(nèi)化侵入。過(guò)表達(dá)酯酶缺陷型PLD蛋白或沉默內(nèi)源PLD表達(dá)都能抑制李斯特菌的內(nèi)化侵入。在一系列能夠影響侵入能力的缺陷型李斯特菌中,只有內(nèi)化素B (InlB)缺陷的菌株不能激活宿主細(xì)胞的PLD,而純化的InlB蛋白能夠直接通過(guò)其細(xì)胞表面受體Met來(lái)激活宿主細(xì)胞PLD活性并能挽救缺陷株對(duì)宿主細(xì)胞的侵染能力以及激活宿主PLD的能力。進(jìn)一步,我們發(fā)現(xiàn),李斯特菌和InlB都能誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)cofilin蛋白的短暫磷酸化。在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)不能磷酸化的cofilin S3A,或是表達(dá)cofilin的特異性磷酸水解酶slingshot 1L,不但顯著抑制了李斯特菌的內(nèi)化侵入,而且能夠抑制InlB誘導(dǎo)的PLD激活。相反,在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)類磷酸化的cofilin (cofilin S3D)可顯著抑制李斯特菌的內(nèi)化侵入,并能挽救cofilin基因沉默細(xì)胞中的InlB誘導(dǎo)的PLD激活。最后,在vero細(xì)胞中表達(dá)能夠與cofilin特異性結(jié)合的PLD的F-3片段,可抑制InlB誘導(dǎo)的PLD激活和李斯特菌的內(nèi)化侵入。因此,我們的研究結(jié)果顯示李斯特菌的InlB可能是一種新的PLD信號(hào)激動(dòng)劑,其可通過(guò)cofilin-PLD信號(hào)級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)李斯特菌的內(nèi)化侵入。
[Abstract]:Listeria monocytogenes can induce self-invasion of non-phagocytes and the invasion process is closely regulated by the actin cytoskeleton of host cells. In this study, we report a new regulatory factor for the invasion process. Phospholipase D (phospholipase D, PLD). PLD can specifically catalyze the hydrolysis of phosphatidylcholine into phosphatidic acid and choline, an important component of cell membrane. It is an important signal effector protein in cells, which is involved in many important cellular physiological processes, especially the cytoskeleton rearrangement of actin. We found that Listeria can stimulate host vero activation during the process of internalization and invasion of vero epithelial cells. Pretreatment with two chemical inhibitors of PLD (1-butanol 2-butanol 3-DPG) could inhibit the PLD activation induced by Listeria sp. And the invasion of Listeria. Overexpression of esterase deficient PLD protein or silencing of endogenous PLD protein could inhibit the invasion of Listeria. In a series of defective Listeria that can affect invasiveness, The purified InlB protein can activate the PLD activity of the host cell directly through its cell surface receptor Met and can save the invading ability of the defective strain to the host cell. And the ability to activate the host PLD. Furthermore, we found that both Listeria and InlB could induce transient phosphorylation of cofilin protein in cells. The expression of cofilin S3A, which can not be phosphorylated in cells, or slingshot 1L, a specific phosphohydrolase expressing cofilin, not only inhibited the invasion of Listeria, but also inhibited the InlB-induced activation of cofilin. On the contrary, the expression of phosphorylated cofilin (cofilin S3D in cells significantly inhibited the invasion of Listeria and saved the InlB-induced activation of cofilin gene in cells. Finally, the expression of F-3 fragment of PLD specifically binding to cofilin in vero cells inhibited the InlB-induced activation of PLD and the internalization of Listeria sp. Therefore, our results suggest that Listeria sp. InlB may be a new PLD signal agonist, which can regulate the invasion of Listeria by cofilin-PLD signal cascade.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士后
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2105565