本文選題：人低氧誘導因子1-α(HIF1-α) + 基因轉染　； 參考：《吉林大學》2008年碩士論文

【摘要】： 近來研究發(fā)現(xiàn),在人的外周血中存在血管內皮祖細胞,它來源于骨髓,在組織缺血的情況下,內皮祖細胞可以從骨髓中動員,遷移并結合到活躍的血管再生部位,增殖、分化為成熟內皮細胞,參與局部新生血管的形成這一過程稱為血管發(fā)生。目前,在成人的外周血、骨髓、胎兒臍血中都證實含有內皮祖細胞。HIF-1是低氧條件下廣泛存在于哺乳動物和人體內的一種轉錄因子,可調節(jié)多種靶基因如VEGF、紅細胞生長因子(EPO)等的表達。本實轉染HIF基因到內皮祖細胞驗,通過將基因與EPCs治療結合起來,一方面可以提高EPCs的“利用率”,另一方面,為基因進入體內找到合適“載體”,達到更強的治療效果。 本實驗采用密度梯度法分離人骨髓中的內皮祖細胞,RT-PCR法檢測內皮細胞特異性成分ecNOS,flk-1(KDR)的表達;采用硝酸酶還原法測定培養(yǎng)基中NOS活性的變化,間接證實內皮細胞的功能;用acLDL-Dil和FITC-UEA-1對細胞染色后,通過激光共聚焦顯微鏡鑒定,證實從人骨髓中成功分離出并誘導培養(yǎng)出內皮祖細胞。 采用LipofectamineTm2000介導PCDNA3.0-HIF1α質粒轉染內皮祖細胞,反向聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測HIF1α的轉錄;酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測VEGF表達,證實轉染HIF1α的內皮祖細胞上清中VEGF含量比未轉染HIF1α的內皮祖細胞上清中VEGF含量增加約5倍;免疫印跡法(Westem blot)檢測HIF1蛋白表達,最終確認PCDNA3.0-HIF1α質粒轉染內皮祖細胞成功。 下一步的研究中,我們將探討轉染HIF基因的內皮祖細胞對心肌梗塞心肌血管修復能力及血管再生能力修復,進而為修復病損心臟組織提供另一條方案,為在細胞水平促進缺血心肌組織血管新生尋找新的途徑,為心肌梗塞細胞生物治療開創(chuàng)一條新的方法。
[Abstract]:Recent studies have found that vascular endothelial progenitor cells exist in human peripheral blood, which are derived from bone marrow. In the case of tissue ischemia, endothelial progenitor cells can mobilize from bone marrow, migrate and combine with active vascular regeneration sites to proliferate. The process of differentiation into mature endothelial cells involved in the formation of local neovascularization is called angiogenesis. At present, in adult peripheral blood, bone marrow, fetal umbilical cord blood have confirmed that the endothelial progenitor cell. HIF-1 is a transcription factor widely existed in mammals and human body under hypoxia. It can regulate the expression of many target genes such as VEGF, erythrocyte growth factor (EPO), etc. HIF gene was transfected into endothelial progenitor cells (EPCs). The combination of HIF gene and EPCs therapy can improve the "utilization ratio" of EPCs on the one hand, on the other hand, find the appropriate "vector" for gene entry into the body to achieve a stronger therapeutic effect. In this experiment, endothelial progenitor cells from human bone marrow were isolated by density gradient method to detect the expression of ecNOSflk-1 (KDR), the activity of NOS in culture medium was determined by nitrate reduction method, and the function of endothelial cells was confirmed indirectly. After staining with acLDL-Dil and FITC-UEA-1, it was confirmed by laser confocal microscopy that endothelial progenitor cells were successfully isolated from human bone marrow and induced to culture endothelial progenitor cells. PCDNA3.0-HIF1 偽 plasmid was transfected into endothelial progenitor cells by Lipofectamine Tm2000, reverse polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect HIF1 偽 transcription, and VEGF expression was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa). It was confirmed that the VEGF content in the supernatant of endothelial progenitor cells transfected with HIF1 偽 was increased by about 5 times than that in the supernatant of endothelial progenitor cells without HIF1 偽 transfection, and the expression of HIF1 protein was detected by Western blotting, and it was confirmed that PCDNA3.0-HIF1 偽 plasmid was successfully transfected into endothelial progenitor cells. In our next study, we will explore the repair of vascular repair and vascular regeneration by endothelial progenitor cells transfected with HIF gene in myocardial infarction. To find a new way to promote angiogenesis in ischemic myocardial tissue at cell level and to open up a new method for biotherapy of myocardial infarction cells.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R329

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本文編號：2105552