本文選題：Graves’病 + 促甲狀腺素受體抗體��； 參考：《天津醫(yī)科大學》2008年碩士論文

【摘要】：Graves' disease (GD)是一種自身免疫性疾病,其發(fā)病原因和致病機理較為復雜,至今為止國內(nèi)外都沒有得出一個明確的結(jié)論。本文的目的旨在利用實驗動物探究GD可能的發(fā)病原因及其內(nèi)在的致病機理,以期為臨床研究提供一個可用實驗動物模型的建立方法。通常在未經(jīng)治療的GD患者血清中存在著一種促甲狀腺素受體抗體(TRAb),該抗體能與甲狀腺細胞膜上的促甲狀腺素受體(TSHR)結(jié)合并促進T3、T4的合成與分泌。獨特型-抗獨特型(id and anti-id)免疫網(wǎng)絡(luò)學說認為TRAb可能相當于TSHAb1誘生的TSHAb2,因TSHAb2含有與TSH相似的結(jié)構(gòu)成為其“內(nèi)影像”,從而模擬TSH與TSHR結(jié)合促使甲狀腺激素分泌增加。為驗證該理論,本文利用鼠抗人TSH單克隆抗體免疫家兔使其產(chǎn)生針對該抗體的多克隆抗體,也即TSHAb2c隨后通過測定免疫后試驗動物的T3、T4以及TRAb.甲狀腺刺激性抗體(TSAb),以觀察該二抗對實驗動物本身的影響。隨后進一步提取純化該多克隆抗體,注射健康家兔后,觀察不同時段家兔體內(nèi)T3、T4水平的變化。利用FRTL-5細胞系生長對TSH的絕對依賴性,使用MTT(四唑鹽)比色試驗法測定了提取純化后的多克隆抗體對其生長的維持作用,即該多克隆抗體的類TSH樣作用。為進一步觀察該多克隆抗體與TSHR結(jié)合后的信號傳遞途徑,測定了加入多克隆抗體后FRTL-5細胞中第二信使cAMP的產(chǎn)生情況。為驗證該二抗是否能與TSHR結(jié)合,利用125I標記的人TSH (125I-hTSH)測定了該多克隆抗體與TSH之間競爭結(jié)合TSHR的能力。結(jié)果顯示經(jīng)過多次免疫加強后實驗動物均能產(chǎn)生針對鼠抗人TSH單克隆抗體的多克隆抗體,伴隨抗體效價的不斷增高,實驗動物T3、T4水平均有不同程度升高,兩者呈現(xiàn)一致趨勢。在經(jīng)過4-5次加強免疫后所有實驗動物的TRAb和TSAb測定均呈陽性,而且TRAb和TSAb的升高趨勢同實驗動物抗體的產(chǎn)生趨勢相一致。該多克隆抗體同125I-hTSH競爭性結(jié)合實驗表明,在一定范圍內(nèi)兩者間存在著同TSHR競爭性結(jié)合的關(guān)系。純化后的多克隆抗體靜脈注射正常家兔后可促使其T3,T4升高。MTT比色試驗法測定的結(jié)果則顯示出該多克隆抗體具有類似于TSH樣的生物學活性,對于去除了TSH后其它組分不變的培養(yǎng)基中的FRTL-5細胞仍能維持其正常貼壁及生長。cAMP的測定則顯示出同加入了hTSH的正常對照組相比,單獨加入純化后的多克隆抗體可顯著增加FRTL-5細胞內(nèi)第二信使cAMP的產(chǎn)生。綜上可以看出由免疫鼠抗人TSH單克隆抗體得到的二抗確實模擬了最初的免疫原-hTSH的作用。該抗體不僅成功引起了免疫動物自身T3、T4水平的升高,而且還能促使正常家兔T3、T4水平的升高。進一步的細胞實驗證實了該多克隆抗體具有類似于TSH樣的活性。而該抗體與TSH之間也存在著同TSHR的競爭性結(jié)合。該實驗動物模型在部分特征上吻合了GD病人的臨床表現(xiàn),為進一步研究GD的發(fā)病原因和致病機理提供了重要的幫助。
[Abstract]:In order to study the effect of TSHAb2 ( TSHAb2 ) on the growth of TSHAb2 induced by TSHAb2 ( TSHAb2 ) , it is suggested that TSHAb2 may be equivalent to TSHAb2 induced by TSHAb2 .
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R-332;R581.1

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本文編號：2104069