本文選題：骨橋蛋白 + 骨髓基質(zhì)干細胞�。� 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的骨創(chuàng)傷后的再生能力提示有能夠自我復(fù)制并能多向分化的干細胞存在。一般認為,干細胞存在于骨、骨膜、骨髓及其他由中胚層發(fā)育來的組織中,在出生后仍然有少量干細胞繼續(xù)存在,在機體損傷時參與組織的修復(fù)。組織工程的基礎(chǔ)是有功能的細胞,骨組織工程需要大量的成骨細胞。十多年來,國內(nèi)外學(xué)者和臨床工作者對各種組織的細胞成骨能力進行了大量的研究,提出了定向性骨祖細胞、誘導(dǎo)性骨祖細胞和基質(zhì)干細胞的概念。目前,在研究中使用的作為種子細胞的成骨細胞來源有以下幾種骨、軟骨、骨外膜、骨髓和骨外組織。越來越多的證據(jù)表明,骨髓基質(zhì)干細胞有多分化潛能,移植人體內(nèi)后可分化為骨、軟骨、肌肉、脂肪、血管內(nèi)皮、肝臟、神經(jīng)等多種細胞。能夠作為組織工程中不同細胞的來源在體內(nèi)正常循環(huán)中能夠分布于多種組織和器官,可以用于細胞和基因治療。而且取材、分離培養(yǎng)、擴增以及導(dǎo)入外源基因也相對方便。通過抽取自體骨髓得到,對病人造成創(chuàng)傷較少,且無免疫排斥反應(yīng)。因此,在實際應(yīng)用時將具有潛在的優(yōu)勢。骨橋蛋白在骨形成與骨改建中扮演著重要角色,實驗觀察其是否能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓基質(zhì)干細胞向成骨細胞分化,探討其在骨折愈合過程中的作用機制,為其以后在骨折愈合方面的研究提供確切的理論依據(jù)。 方法沖洗法獲取Weistar大鼠骨髓,用貼壁法分離提純骨髓基質(zhì)干細胞,傳至第3代細胞后分組,體外培養(yǎng)的BMSCs分為實驗組和對照組,實驗組添加含0.2nmol/L骨橋蛋白的DMEM條件培養(yǎng)基；對照組為不含骨橋蛋白的DMEM培養(yǎng)基,于不同時間點收集細胞。通過光鏡觀察培養(yǎng)的細胞形態(tài),以細胞計數(shù)法測定生長曲線,應(yīng)用流式細胞儀分析細胞周期,堿性磷酸酶(ALP)染色和活性測定,骨鈣素(OCN)含量測定。 結(jié)果實驗組細胞具有成骨細胞的形態(tài)學(xué)特征；骨橋蛋白組引起細胞生長曲線右移,細胞Go／G。期比例平均增加13.17%(P0.01),S期比例減少74.93%(P0.01)；實驗組ALP染色呈陽性,且ALP活性,OCN含量均較對照組明顯提高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論1.貼壁篩選法是一種簡單有效的骨髓基質(zhì)細胞的分離純化方法。2.骨髓基質(zhì)細胞在體外可誘導(dǎo)分化為成骨細胞,可作為骨組織工程中種子細胞的來源。3.OPN對BMSCs有促進成骨分化的作用。
[Abstract]:Objective the ability of regeneration after bone trauma suggests the existence of self-replicating and multi-differentiated stem cells. It is generally believed that stem cells exist in bone, periosteum, bone marrow and other tissues developed from mesoderm. A small number of stem cells continue to exist after birth and participate in the repair of tissues when the body is damaged. Tissue engineering is based on functional cells, and bone tissue engineering requires a large number of osteoblasts. For more than ten years, scholars and clinicians at home and abroad have done a lot of research on the osteogenic ability of various tissues, and put forward the concepts of directional bone progenitor cells, inducible bone progenitor cells and stromal stem cells. At present, the osteoblasts used as seed cells in the study are the following kinds of bone, cartilage, periosteal, bone marrow and extraosseous tissue. More and more evidence shows that bone marrow stromal cells can differentiate into bone, cartilage, muscle, fat, vascular endothelium, liver, nerve and so on. It can be used as a source of different cells in tissue engineering and can be distributed in various tissues and organs in normal circulation in vivo, and can be used in cell and gene therapy. It is also relatively convenient to select materials, isolate, culture, amplify and import foreign genes. Through extraction of autologous bone marrow, there is less trauma and no immune rejection. Therefore, there will be potential advantages in practical application. Osteopontin plays an important role in bone formation and bone remodeling. Whether osteopontin can induce the differentiation of rat bone marrow stromal cells into osteoblasts in vitro was observed and the mechanism of osteopontin in the process of fracture healing was discussed. It provides a theoretical basis for further research on fracture healing. Methods the bone marrow of Weistar rats was obtained by washing method. Bone marrow stromal cells were isolated and purified by adherent method. BMSCs cultured in vitro were divided into two groups: experimental group and control group. The experimental group was supplemented with DMEM conditioned medium containing 0.2nmol / L osteopontin. The control group was cultured in DMEM medium without osteopontin and the cells were collected at different time points. The morphology of cultured cells was observed under light microscope. The growth curve was measured by cell count method. Cell cycle was analyzed by flow cytometry, alkaline phosphatase (ALP) staining and activity were determined. Osteocalcin (OCN) content was measured by osteocalcin (OCN) content. Results the cells in the experimental group had the morphological characteristics of osteoblasts, and the osteopontin group caused the cell growth curve to shift to the right and the cells to go / G. The proportion of ALP in the experimental group increased by 13.17% (P0.01) and decreased by 74.93% (P0.01), and the ALP activity and OCN content in the experimental group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). Conclusion 1. Adherent screening is a simple and effective method for the isolation and purification of bone marrow stromal cells. Bone marrow stromal cells can be induced to differentiate into osteoblasts in vitro and can be used as a source of seed cells in bone tissue engineering. 3. OPN can promote osteogenic differentiation of BMSCs.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329

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本文編號：2088379