發(fā)布時間：2018-06-30 03:09

  本文選題：星形膠質(zhì)細(xì)胞 + 雌激素�。� 參考：《中南大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的研究17-β雌二醇對大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞(AS)缺氧、缺糖損傷的影響,并對其可能的機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法原代培養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠大腦皮層AS,建立缺氧、缺糖損傷模型,以吉姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;以透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)尤其是凋亡小體的變化;以四甲基偶氮唑鹽(MTT)還原實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活力;以乳酸脫氫酶(LDH)漏出率作為細(xì)胞損傷指標(biāo);以流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,研究氧糖剝奪(OGD)對AS的影響。在此基礎(chǔ)上,通過鈣離子敏感的熒光探針Fura-2/AM負(fù)載細(xì)胞,熒光雙波長分光光度計檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化;以黃嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法檢測細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的變化;免疫細(xì)胞化學(xué)染色和RT-PCR方法觀測凋亡相關(guān)分子Caspase-3和Caspase-12在OGD前后的變化。 結(jié)果①17-β雌二醇增強(qiáng)細(xì)胞活力的效應(yīng)10nmol/L開始出現(xiàn),在20nmol/L達(dá)到最高峰;降低LDH漏出率和抗凋亡效應(yīng)均從1nmol/L開始,也是在20nmol/L達(dá)到最高峰。②缺氧缺糖處理即刻、缺氧缺糖處理前6h、12h、24h、36h,加入終濃度為20nmol/L的17-β雌二醇,均使缺氧缺糖損傷AS細(xì)胞活力增高,LDH漏出率降低,細(xì)胞凋亡率降低。其中缺氧缺糖處理前24h加入17-β雌二醇在上述5個時間點(diǎn)中,增強(qiáng)細(xì)胞活力的效應(yīng)最強(qiáng)。③缺氧缺糖損傷可使細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度顯著增高,17-β雌二醇預(yù)處理后可明顯降低鈣離子濃度,調(diào)節(jié)鈣穩(wěn)態(tài)失衡。④缺氧缺糖損傷可致AS內(nèi)SOD活性降低,MDA含量升高,17-β雌二醇預(yù)處理后可顯著升高SOD活性,降低MDA的含量。⑤RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,缺氧缺糖可使AS內(nèi)凋亡相關(guān)分子Caspase-3、Caspase-12的表達(dá)增加,17-β雌二醇預(yù)處理后可顯著抑制兩者的表達(dá)。 結(jié)論①17-β雌二醇對體外培養(yǎng)AS缺氧、缺糖損傷具有直接的保護(hù)作用,并呈一定的量效、時效關(guān)系。②17-β雌二醇可能通過調(diào)節(jié)鈣離子濃度、Caspase-3和Caspase-12的表達(dá)對缺氧、缺糖損傷AS發(fā)揮保護(hù)作用。③17-β雌二醇對缺氧、缺糖損傷皮層AS的保護(hù)作用可能與提高SOD活性或降低其消耗率,從而抑制缺氧、復(fù)氧過程中大量生成的氧自由基對DNA和細(xì)胞器膜等的損傷有關(guān);可能與降低脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。
[Abstract]:Objective to study the effects of 17- 尾 estradiol on cerebral cortical astrocyte (as) injury induced by hypoxia and glucose deficiency, and to explore its possible mechanism. Methods the primary cultured Sprague-Dawley rat cerebral cortex ASS was used to establish the model of hypoxia and glucose deficiency, and the morphological changes of the cells were observed by Gimsa staining, and the ultrastructure of the cells, especially the apoptotic corpuscles, was observed by transmission electron microscope (TEM). MTT assay was used to detect cell viability, lactate dehydrogenase (LDH) leakage rate was used as the index of cell damage, and apoptosis rate was detected by flow cytometry to study the effect of oxygen glucose deprivation (OGD) on as. On this basis, the changes of intracellular calcium concentration were detected by the calcium sensitive fluorescent probe Fura-2 / AM loaded cells, and the changes of intracellular calcium concentration were detected by xanthine oxidase method. The activity of superoxide dismutase (SOD) and the content of malondialdehyde (MDA) were measured by thiobarbituric acid method, and the changes of apoptosis related molecules Caspase-3 and Caspase-12 before and after OGD were observed by immunocytochemical staining and RT-PCR. Results the effect of 117- 尾 estradiol on enhancing cell viability began to appear at 10nmol / L and reached its peak at 20nmol / L, and the decrease of LDH leakage rate and anti-apoptotic effect began at 1nmol / L, and immediately after 20nmol / L hypoxia and glucose deprivation treatment. Before hypoxia and glucose deprivation treatment, the LDH leakage rate and apoptosis rate of as cells increased and apoptosis rate decreased 6 hours before hypoxia and glucose deprivation treatment, and 17- 尾 estradiol at the final concentration of 20 nmol / L increased the activity of as cells after hypoxia and glucose deprivation treatment for 24 hours and 36 hours before hypoxia and glucose deprivation treatment, and the final concentration of 17- 尾 estradiol was 20 nmol / L. Among them, 17- 尾 estradiol was added 24 hours before hypoxia and glucose deprivation treatment, and 17 尾 estradiol was added at the above 5 time points. The effect of enhancing cell viability was strongest. 3 hypoxia and glucose deprivation injury could significantly increase intracellular free calcium concentration and decrease calcium concentration after pretreatment with 17- 尾 estradiol. Regulation of calcium homeostasis. 4 hypoxia and glucose deficiency injury could reduce the activity of SOD and increase the content of MDA. After pretreatment with 17- 尾 estradiol, SOD activity could be significantly increased, and the content of MDA could be decreased by RT-PCR and immunocytochemical staining. Hypoxia and glucose deprivation could significantly inhibit the expression of apoptosis related molecule Caspase-3 and Caspase-12 after pretreatment with 17- 尾 estradiol. Conclusion 117- 尾 estradiol has direct protective effect on anoxia and glucose deficiency injury of as cultured in vitro, and has a dose-dependent effect. The aging relationship of estradiol. 217- 尾 estradiol may regulate the expression of Caspase-3 and Caspase-12 in Ca ~ (2 +) concentration. The protective effect of estradiol on hypoxia may be related to increasing SOD activity or decreasing consumption rate, thus inhibiting hypoxia. The large amount of oxygen free radicals produced during reoxygenation may be related to the damage of DNA and organelle membrane, and may be related to the reduction of lipid peroxidation.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R363

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本文編號：2084598