本文選題：貝氏柯克斯體 + 樹突狀細胞�。� 參考：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2010年博士論文

【摘要】： 貝氏柯克斯體(Coxiella burnetii)為Q熱(Q fever)病原體,專性胞內(nèi)寄生的革蘭陰性嗜酸菌。該菌的高致病性和對環(huán)境、理化因素的強抵抗力使其成為重要的生物戰(zhàn)劑/生物恐怖劑。疫苗接種為預(yù)防貝氏柯克斯體感染的有效手段。雖然滅活貝氏柯克斯體全菌Q熱疫苗具有良好的免疫保護效果,但是較強的副作用限制了它的推廣應(yīng)用。為研發(fā)安全有效的分子Q熱疫苗,有必要研究貝氏柯克斯體主要抗原引發(fā)的機體免疫應(yīng)答機制。 樹突狀細胞(dendritic cells, DCs)作為吞噬細胞的一種,是體內(nèi)專職的抗原提呈細胞(antigen-presenting cells,APCs),在啟動和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。DCs分化成熟過程中具有未成熟(immature dendritic cells,iDCs)與成熟(mature dendritic cells,mDCs)兩個階段,iDCs負責攝取加工處理抗原,當受到抗原刺激時,iDCs迅速分化為mDCs,mDCs呈遞攝取的抗原給T細胞,刺激T細胞活化,因而DCs是一種理想的生物免疫佐劑和抗原載體。 本研究建立了從人外周血分離單核細胞誘導(dǎo)分化成DCs的培養(yǎng)體系,直接從濃縮白細胞中分離出單核細胞,加入IL-4與GM-CSF誘導(dǎo)后使其分化為人源DCs。以CD83表達量作為衡量DCs成熟度的指標,分析體外誘導(dǎo)培養(yǎng)DCs表面T細胞共刺激分子CD86、CD80、CD40、CD54、CD58、HLA-DR(MHC II)、HLA-ABC(MHC I)的表達。 用滅活貝氏柯克斯體I相強毒新橋株和II相弱毒Grita株分別刺激DCs,發(fā)現(xiàn)它們誘導(dǎo)人源DCs活化水平差異明顯。II相弱毒株刺激DCs各表面分子的表達量是I相強毒株刺激的1～2倍;貝氏柯克斯體強、弱毒株的差別主要是LPS的不同,I相強毒株LPS刺激DCs表面分子表達水平與I相強毒株相似,而去LPS強毒株刺激DCs表面分子表達水平與弱毒株相似,表明貝氏柯克斯體強毒株LPS不能有效激活人源DCs,無法使DCs由未成熟狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橥耆墒鞝顟B(tài);提示貝氏柯克斯體強毒株的LPS掩蓋了菌體外膜蛋白,致使DCs表面受體無法與貝氏柯克斯體表面蛋白相互識別,產(chǎn)生激活信號。 貝氏柯克斯體com1、icmO、enhA、secB、lo1A、hspB基因分別編碼外膜蛋白Com1、Ⅳ分泌系統(tǒng)蛋白IcmO、增強入侵蛋白EnhA、蛋白輸出蛋白SecB、外膜脂質(zhì)載體蛋白Lo1A以及熱休克蛋白HspB,其中Com1蛋白與HspB蛋白在免疫印跡中與貝氏柯克斯體感染血清反應(yīng)強。6種重組蛋白對人源DCs的激活能力有強有弱:Com1激活DCs能力最強,它所激活DCs的表面分子表達水平最高,甚至強于大腸桿菌LPS;SecB激活DCs能力僅次于Com1,其刺激作用與大腸桿菌LPS不相上下;而HspB激活DCs的能力最弱,除個別表面分子的表達量在其刺激下稍有增加外,大部分表面分子尤其是成熟標志分子CD83的表達量僅為基礎(chǔ)表達水平。Com1、SecB、HspB刺激人源DCs的表達的細胞因子也大不相同。Com1激活DCs和SecB激活DCs均表達相對高水平的細胞因子IL-12,而HspB刺激誘導(dǎo)出的不成熟DCs表達相對較高水平細胞因子IL-10。表型成熟度與表達細胞因子的不同表明Com1、SecB、HspB刺激的DCs處于不同活化狀態(tài),提示貝氏柯克斯體不同蛋白抗原刺激的DCs可以表現(xiàn)不同的免疫調(diào)節(jié)能力。 為觀察處于不同活化狀態(tài)的DCs對T細胞免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié),將Com1、SecB、HspB刺激DCs及其培養(yǎng)上清分別刺激同種同體T細胞。與DCs分子表型相應(yīng),HspB刺激DCs和培養(yǎng)上清對T細胞的活化也顯示出明顯惰性,T細胞表面早期活化標志物CD69的表達僅有限上調(diào),對T細胞的增殖毫無作用,表明HspB不具有啟動機體細胞免疫的功能。Com1激活DCs和SecB激活DCs及培養(yǎng)上清均顯著提高T細胞表面CD69表達,尤其Com1激活DCs培養(yǎng)上清誘導(dǎo)T細胞CD69表達量達80%以上;CD4+ T細胞與CD8+ T細胞CD69的高表達,證明兩種T細胞處于活化狀態(tài)。Com1激活DCs和SecB激活DCs均誘導(dǎo)T細胞表達I型細胞因子IFN-γ和炎性細胞因子TNF-α,表明T細胞的免疫應(yīng)答朝向Th1和Tc1分化。另外,T細胞增殖實驗揭示了Com1激活DCs和SecB激活DCs均能誘導(dǎo)T細胞高水平增殖,提示Com1和SecB具有誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細胞免疫應(yīng)答能力,為貝氏柯克斯體保護性抗原,可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細胞免疫應(yīng)答。
[Abstract]:Coxiella burnetii ( Coxiella burnetii ) is a pathogen of Q fever ( Q fever ) . It has high pathogenicity and strong resistance to environment and physical and chemical factors .



Dendritic cells ( DCs ) , as one of phagocytes , play a key role in the initiation and regulation of immune responses . DCs are responsible for the initiation and modulation of immune responses . DCs are responsible for the uptake of processed antigens . DCs are rapidly differentiated into mDCs and mDCs are rapidly differentiated into mDCs when stimulated by antigen . DCs are activated by T cells , so DCs are an ideal biological adjuvant and antigen carrier .



The expression of CD80 , CD40 , CD54 , CD58 , HLA - DR ( MHC II ) and HLA - ABC ( MHC I ) were analyzed in vitro .



It was found that the expression level of DCs in DCs stimulated DCs was 1 - 2 times higher than that of strong virulent strains . The expression levels of DCs were similar to those of weak strains .



The expression levels of Com1 , SecB , HspB stimulated DCs were higher than that of Com1 , SecB and HspB .



涓鴻瀵熷浜庝笉鍚屾椿鍖栫姸鎬佺殑DCs瀵筎緇嗚優(yōu)鍏嶇柅鍙嶅簲鐨勮皟鑺，

本文編號：2083965