本文選題：人羊膜來源干細(xì)胞 + 多能干細(xì)胞��； 參考：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2008年博士論文

【摘要】： 背景基于干細(xì)胞研究的再生醫(yī)學(xué)有望修復(fù)心肌損傷,是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。人羊膜來源干細(xì)胞具有多向分化潛能,且因其易于獲得、不引起倫理學(xué)爭(zhēng)議、干細(xì)胞含量豐富、免疫原性低等特點(diǎn),有潛力成為未來再生醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用的重要種子細(xì)胞來源。 目的 1.了解人羊膜不同部位(層面)來源干細(xì)胞的性質(zhì)差異。 2.評(píng)價(jià)RCCS(旋轉(zhuǎn)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng))等培養(yǎng)方式在人羊膜來源干細(xì)胞培養(yǎng)中的價(jià)值。 3.比較不同方法誘導(dǎo)人羊膜來源干細(xì)胞向心肌細(xì)胞方向分化的效果。 方法與結(jié)果 1.羊膜上皮層來源的細(xì)胞表達(dá)各種干細(xì)胞標(biāo)記物的水平普遍高于羊膜間質(zhì)層來源的間充質(zhì)干細(xì)胞;前者僅CD73表達(dá)水平低于后者。而羊膜上皮層內(nèi),近基底部的上皮細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)記物的水平均高于近表層部(流式細(xì)胞學(xué)分析方法)。 2.RCCS培養(yǎng)較靜止培養(yǎng)更利于維持各種干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)水平(流式細(xì)胞學(xué)分析方法)。RCCS培養(yǎng)羊膜上皮細(xì)胞2周后,細(xì)胞傾向聚集生長(zhǎng),并有類胚體樣細(xì)胞團(tuán)形成,其中存在高表達(dá)胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物的細(xì)胞(免疫組化法、免疫熒光法)。 3.以心肌細(xì)胞裂解液、GDF-15、BMP2+FGF10分別對(duì)羊膜來源干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo),2周后各誘導(dǎo)組在蛋白水平及mRNA水平不同程度的表達(dá)心肌標(biāo)記物(免疫組化法,RT-PCR法)。GDF-15誘導(dǎo)組表達(dá)MEF2C及GATA-4水平較高,BMP2+FGF10組表達(dá)HCN2水平較高,僅心肌細(xì)胞裂解液組明確表達(dá)KIR2.1。 4.羊膜來源干細(xì)胞具有不對(duì)稱分裂的特點(diǎn),以體積較大、形態(tài)較圓、胞內(nèi)顆粒樣物質(zhì)較豐富明顯的細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)記物水平較高;而體積偏小、形態(tài)近圓或略不規(guī)則的細(xì)胞表達(dá)功能蛋白較強(qiáng)(免疫組化法、免疫熒光法)。 結(jié)論 1.羊膜來源干細(xì)胞的性質(zhì)及分布存在不均一性,這為進(jìn)一步篩選更具臨床應(yīng)用價(jià)值的細(xì)胞來源提供了依據(jù)。 2.RCCS培養(yǎng)有助于維持人羊膜來源干細(xì)胞的多向分化潛能。 3.誘導(dǎo)人羊膜來源干細(xì)胞向心肌細(xì)胞方向分化的過程中,GDF-15具有一定作用。干細(xì)胞向心肌細(xì)胞方向分化可能需要多種細(xì)胞因子的共同作用。
[Abstract]:Background Regenerative medicine based on stem cell research is a hot topic in recent years, which is expected to repair myocardial injury. Human amniotic membrane derived stem cells (HMSCs) have the potential to become an important source of seed cells for the clinical application of regenerative medicine because they are easy to obtain and do not cause ethical controversy, the content of stem cells is rich, and the immunogenicity is low. Objective 1. To understand the nature differences of stem cells derived from different parts of human amniotic membrane. 2. To evaluate the value of RCCS (rotating cell culture system) in the culture of human amniotic stem cells. To compare the effects of different methods on inducing human amniotic stem cells to differentiate into cardiomyocytes. Methods and results 1. The expression of various stem cell markers in the cells derived from the amniotic epithelium was generally higher than that in the mesenchymal stem cells derived from the amniotic mesenchymal layer, and the expression level of CD73 in the former was lower than that in the latter. In the epithelial layer of amniotic membrane, The expression levels of stem cell markers in epithelial cells near the base were higher than those in the proximal surface (flow cytometric analysis) 2.RCCS culture was more conducive to maintaining the expression of stem cell markers than static culture. RCCS culture of amniotic epithelial cells for 2 weeks, Cells tend to gather and grow, and there are embryoid cell clusters, in which there are cells that highly express the markers of embryonic stem cells (immunohistochemical method, immunofluorescence method). 3. Expression of Myocardial Marker at different levels of protein and mRNA in different groups (Immunohistochemical RT-PCR). GDF-15 induced expression of MEF2C and GATA-4 water in amniotic stem cells induced by GDF-15 BMP2FGF10 for 2 weeks The level of HCN2 expression was higher in BMP2FGF10 group. Only myocardial cell lysate group expressed KIR 2.1.4. Amniotic membrane derived stem cells have the characteristics of asymmetric division. The cells with larger size, more round shape, more abundant granular substances in the cell have higher expression level of stem cell markers, but the volume of stem cells is relatively small, while amniotic membrane derived stem cells have the characteristics of asymmetric division. Cells with near-round or slightly irregular morphology expressed strong functional proteins (immunohistochemical method, immunofluorescence method). Conclusion 1. The nature and distribution of amniotic stem cells were not uniform. 2. RCCS culture is helpful to maintain the multidirectional differentiation potential of human amniotic stem cells. 2. GDF-15 plays an important role in inducing human amniotic stem cells to differentiate into cardiomyocytes. Differentiation of stem cells into cardiomyocytes may require multiple cytokines.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2062874