本文選題：人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 + 慢病毒質(zhì)粒��； 參考：《中國(guó)生物制品學(xué)雜志》2015年07期

【摘要】：目的構(gòu)建人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重組慢病毒質(zhì)粒,并進(jìn)行包裝和鑒定。方法 PCR擴(kuò)增人FGF21 ORF序列,經(jīng)Eco RⅠ和Bam HⅠ雙酶切后,連接至慢病毒載體PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21,經(jīng)293T細(xì)胞包裝為重組慢病毒顆粒,并感染KMB17靶細(xì)胞。熒光顯微鏡觀察293T細(xì)胞中報(bào)告基因EGFP的綠色熒光,判斷重組慢病毒的感染效率;RT-PCR法檢測(cè)KMB17靶細(xì)胞中h FGF21基因m RNA的轉(zhuǎn)錄;免疫熒光和Western blot法檢測(cè)KMB17靶細(xì)胞中h FGF21蛋白的表達(dá)。結(jié)果重組慢病毒質(zhì)粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,證明構(gòu)建正確,在包裝細(xì)胞中獲得較高的轉(zhuǎn)染效率,重組慢病毒感染KMB17靶細(xì)胞72 h后,熒光顯微鏡下可見(jiàn)EGFP綠色熒光。感染組KMB17靶細(xì)胞中存在h FGF21基因m RNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了重組慢病毒質(zhì)粒PLV-EF1aEGFP[2A]Puro-h FGF21,并于KMB17靶細(xì)胞中表達(dá),為FGF21功能與特性的相關(guān)研究及基因工程藥物的探索和研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant lentivirus plasmid of human fibroblast growth factor 21(human fibroblast growth factor 21 (h FGF21), and to package and identify the recombinant plasmid. Methods the sequence of human FGF21 ORF was amplified by PCR and digested by Ecor R 鈪，

本文編號(hào)：2037335