本文選題：弓形蟲速殖子 + 原位雜交��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的本研究首先動(dòng)態(tài)觀察弓形蟲速殖子對小鼠小腸黏膜組織尤其是小腸上皮細(xì)胞的粘附和侵入;然后觀察弓形蟲速殖子經(jīng)口感染后在小鼠體內(nèi)各主要臟器的移行和組織內(nèi)分布。探討弓形蟲經(jīng)口感染穿越小腸黏膜屏障及體內(nèi)播散的機(jī)制,以期加深對弓形蟲致病機(jī)制的理解,為弓形蟲黏膜疫苗抗感染機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ),為預(yù)防和治療弓形蟲感染開拓新思路。 方法本研究分三部分:第一部分:7～8周齡BALB/c小鼠30只隨機(jī)分為感染組和對照組。感染組小鼠每只灌胃接種含2×10~4個(gè)弓形蟲速殖子的PBS 0.2 ml,對照組給予等量的PBS。分別于感染后15 min、30 min、1 h、2 h、4 h和8 h處死感染組小鼠4只和對照組小鼠1只,取十二指腸、空腸、回腸制備石蠟切片,RNA原位雜交。 第二部分:將弓形蟲速殖子和IEC-6于24孔培養(yǎng)板內(nèi)蓋玻片上共培養(yǎng),倒置顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察速殖子的黏附、侵入和增殖過程。分別于共培養(yǎng)5 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h后取出蓋玻片,姬-瑞氏染色,光鏡觀察侵入、增殖情況,并計(jì)數(shù)侵入率。 第三部分:7～8周齡BALB/c小鼠30只隨機(jī)分為感染組和對照組。感染組小鼠每只灌胃感染含2×104個(gè)弓形蟲速殖子的PBS 0.2 ml,對照組用等量的PBS灌胃。分別于灌胃后1 d、2 d、4 d、6 d和8 d處死感染組小鼠4只和對照組小鼠1只,取腸系膜淋巴結(jié)(MLN)、肝、脾、肺和腦組織,制備石蠟切片,采用地高辛標(biāo)記的弓形蟲速殖子SAG2 mRNA特異性寡核苷酸探針,進(jìn)行RNA原位雜交檢測速殖子在組織內(nèi)的分布。 結(jié)果經(jīng)口感染后15 min,速殖子到達(dá)小腸組織,速殖子可位于小腸上皮細(xì)胞(吸收細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞)的紋狀緣,吸收細(xì)胞胞漿內(nèi)或相鄰吸收細(xì)胞之間及固有層內(nèi)。感染后15 min～2 h,粘附于空腸的速殖子數(shù)顯著高于回腸(P0.05);感染后15和30 min,侵入空腸的速殖子數(shù)顯著高于十二指腸和回腸(P0.05)。隨著感染后時(shí)間的延長,速殖子粘附于各腸段的數(shù)量逐漸減少,侵入的數(shù)量逐漸X椂�。郊�(xì)腥競，

本文編號：2006726