本文選題：人Mirk基因 + 短發(fā)夾RNA��； 參考：《華中科技大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的：構(gòu)建人Mirk基因的短發(fā)夾RNA (shRNA)慢病毒Tet-on表達(dá)載體并在橫紋肌肉瘤RD細(xì)胞上鑒定其沉默效率。 方法：設(shè)計(jì)合成靶向人Mirk基因的shRNA序列，構(gòu)建于慢病毒pTRIPZ表達(dá)載體，克隆篩選出有效shRNA慢病毒載體，重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切和DNA測序。重組質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒在293T細(xì)胞中磷酸鈣共沉淀法包裝成病毒顆粒,，然后感染橫紋肌肉瘤RD細(xì)胞，DOX誘導(dǎo)RNA干擾，普通PCR方法檢測mRNA水平靶基因的沉默效率。 結(jié)果：構(gòu)建pTRIPZ-Mirk-shRNA的酶切鑒定和測序正確，包裝病毒后滴度達(dá)到5x106TU/ml。shRNA慢病毒顆粒感染橫紋肌肉瘤RD細(xì)胞后在DOX誘導(dǎo)下Mirk基因的mRNA表達(dá)量較陰性對(duì)照組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：成功構(gòu)建靶向人Mirk基因的shRNA慢病毒Tet-on表達(dá)載體，，DOX誘導(dǎo)下該載體能夠在核酸水平有效沉默靶基因。
[Abstract]:Aim: to construct human Mirk gene short hairpin RNA shRNA-lentivirus Tet-on expression vector and identify its silencing efficiency in rhabdomyosarcoma Rd cells. Methods: the shRNA sequence targeting human Mirk gene was synthesized and constructed into lentivirus pTRIPZ expression vector. The effective shRNA lentivirus vector was cloned and screened, and the recombinant plasmid was digested by double enzyme and DNA sequenced. Recombinant plasmids and packaging plasmids were packaged into viral particles by calcium phosphate coprecipitation in 293T cells, and then infected with rhabdomyosarcoma R D cells induced RNA interference. Results: pTRIPZ-Mirk-shRNA was identified correctly by restriction endonuclease digestion and sequencing. After packaging virus titer reached 5x106 TUP / ml. ShRNA lentivirus particles infected Rd cells of rhabdomyosarcoma, the mRNA expression of Mirk gene decreased significantly after DOX-induced infection compared with negative control group. Conclusion: the expression vector of shRNA lentivirus Tet-on targeting human Mirk gene can effectively silence the target gene at nucleic acid level.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3416

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2002905