本文選題：12H23 + CH12　； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,已經(jīng)成為腫瘤重要的治療靶標(biāo)。我們?cè)谇捌谘芯恐?通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備了一個(gè)針對(duì)EGFRvⅢ的單克隆抗體12H23,研究表明它可以顯著抑制表達(dá)EGFRvⅢ的肝癌的生長(zhǎng),我們隨后對(duì)12H23進(jìn)行了人鼠嵌合改造,獲得了嵌合型單克隆抗體CHl2,初步研究表明,它基本保留了親本抗體的結(jié)合活性。本研究將進(jìn)一步對(duì)該抗體的生物學(xué)活性進(jìn)行鑒定。 同時(shí),由于被動(dòng)的抗體免疫治療應(yīng)用于臨床仍舊存在著一些限制,比如大規(guī)模生產(chǎn)的瓶頸,不夠理想的療效,多次免疫才能產(chǎn)生足夠的效價(jià)等等。為了克服這些困難,我們研究并得到了能夠結(jié)合CH12的模擬表位肽,并檢測(cè)其免疫小鼠后是否能刺激小鼠產(chǎn)生類似抗體的活性。 第一部分12H23單抗的嵌合型抗體的生物學(xué)活性分析 【目的】：研究12H23單抗的嵌合抗體CH12的生物學(xué)活性�！痉椒ā浚�125I標(biāo)記法測(cè)定CH12單抗的親和力和生物分布。通過(guò)體外的抗體依賴性細(xì)胞毒性試驗(yàn)(ADCC)分析12H23抗體對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷作用。用體內(nèi)肝癌種植瘤模型,分析嵌合抗體CH12抗體的抑瘤作用�！窘Y(jié)果】：CH12抗體與Huh7-EGFRvⅢ的親和力為1.346 nm。CH12抗體在體內(nèi)能富集到Huh7-EGFRvⅢ種植瘤中。12H23抗體在抗體依賴性細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中能有效的殺傷Huh7-EGFRvⅢ、U87-EGFRvⅢ細(xì)胞系。CH12抗體可顯著抑制Huh7-EGFRvⅢ(外源性表達(dá)EGFRvⅢ)、SMMC-7721(內(nèi)源性表達(dá)EGFRvⅢ)細(xì)胞種植瘤的生長(zhǎng),其抑瘤作用顯著優(yōu)于C225(西妥昔單抗)。【結(jié)論】：CH12是一個(gè)高親和力抗體,它能有效抑制EGFRvⅢ陽(yáng)性的肝癌種植瘤的生長(zhǎng),具有良好的臨床應(yīng)用潛力。 第二部分12H23單抗的模擬表位肽的篩選 【目的】：尋求能夠結(jié)合12H23(或CH12)單抗的模擬表位肽。[方法]：我們使用了PH.D-12噬菌體展示文庫(kù)技術(shù)來(lái)篩選12H23抗體的模擬表位肽。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法及噬菌體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)鑒定模擬表位肽是否能夠有效的結(jié)合12H23單抗。[結(jié)果]：成功篩選到了兩個(gè)模擬表位肽(其氨基酸序列分別為WHTEILKSYPHE和LPAFFVTNQTQD)。這兩個(gè)多肽能與12H23單抗及CH806單抗較好地結(jié)合。在競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中,模擬表位肽(WHTEILKSYPHE和LPAFFVTNQTQD)進(jìn)一步證明了它們能夠模擬12H23和CH806的天然表位。 【結(jié)論】：我們成功篩選得到了12H23的模擬表位肽。 第三部分12H23單抗模擬表位肽的免疫學(xué)活性分析 【目的】：檢測(cè)12H23單抗模擬表位肽免疫機(jī)體后是否能夠刺激機(jī)體主動(dòng)免疫產(chǎn)生針對(duì)其天然表位的抗體。[方法]：我們將模擬表位肽偶聯(lián)上鑰孔P堆嫉鞍，

本文編號(hào)：2001964