發(fā)布時(shí)間：2018-06-10 04:22

  本文選題：流感病毒A型 + HN亞型　； 參考：《中國醫(yī)藥生物技術(shù)》2010年03期

【摘要】：目的研發(fā)一種具有良好免疫原性的H3N8型馬流感血凝素(hemagglutinin,HA)核酸疫苗。方法根據(jù)馬A型流感病毒A/Equine/Xinjiang/3/08(H3N8)的HA蛋白序列,經(jīng)密碼子優(yōu)化后化學(xué)合成能夠表達(dá)相應(yīng)蛋白的基因片段,并將該片段克隆到核酸疫苗載體pJW4303中,構(gòu)建帶有天然信號(hào)肽的H3HA核酸疫苗,命名為H3HA/XJ3-08-wt;進(jìn)一步對(duì)HA基因進(jìn)行修飾,以人組織纖維蛋白酶原激活劑(human tissue plasminogen activator,tPA)取代H3HA天然信號(hào)肽,命名為H3HA/XJ3-08-tPA,或切除部分HA的基因片段使之只表達(dá)HA蛋白的胞外域,命名為H3HA/XJ3-08-dTM。用這3種重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,蛋白表達(dá)經(jīng)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)得到確認(rèn)。采用電轉(zhuǎn)錄法免疫新西蘭白兔。ELISA方法檢測(cè)免疫后兔血清中抗H3HA抗體滴度,血凝抑制實(shí)驗(yàn)(hemagglutination inhibition,HI)檢測(cè)保護(hù)性抗體水平。結(jié)果 3種H3HA核酸疫苗均可在293T細(xì)胞中高效表達(dá),并能夠在新西蘭白兔體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗H3HA抗體,HI檢測(cè)到不同水平的保護(hù)性抗體。其中以H3HA/XJ3-08-tPA的免疫原性最強(qiáng)。結(jié)論新構(gòu)建的H3N8型馬流感血凝素核酸疫苗具有良好的免疫原性,為此類疫苗的進(jìn)一步研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to develop a nucleic acid vaccine for H 3N 8 hemagglutinin HA with good immunogenicity. Methods according to the HA protein sequence of Ma / Equine / Xinjiangr / 3 / 08H3N8, a codon optimized gene fragment was synthesized and cloned into the nucleic acid vaccine vector pJW4303 to construct H3HA nucleic acid vaccine with natural signal peptide. H3HA / XJ3-08-wt. the HA gene was further modified to replace the natural signal peptide of H3HA with human tissue fibrinogen activator (H3HAXJ3-08-tPA), or to express only the extracellular domain of HA protein by removing part of the HA gene fragment, named H3HAXXJ3-08-dTM. The three recombinant plasmids were transfected into 293T cells, and the protein expression was confirmed by Western blotting. The titers of anti-H3HA antibody in the serum of rabbits immunized with electrotranscription and hemagglutination inhibition assay (HI) were detected by Elisa. Results all three H3HA nucleic acid vaccines were highly expressed in 293T cells and could induce the production of specific anti-H3HA antibody HI in New Zealand white rabbits. The immunogenicity of H3HA / XJ3-08-tPA was the strongest. Conclusion the newly constructed H _ 3N _ 8 hemagglutinin nucleic acid vaccine has good immunogenicity, which lays a foundation for further research and development of this vaccine.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科;江蘇省人民醫(yī)院中美疫苗中心;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室大動(dòng)物病研究室;美國麻省大學(xué)醫(yī)學(xué)院內(nèi)科學(xué)系;
【基金】：黑龍江省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(ZD200812) 獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(NKLVBP200815) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK2006728)
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 熊成龍;居麗雯;施強(qiáng);蔣露芳;姜慶五;;H1N1流感病毒的遺傳進(jìn)化研究[J];中華疾病控制雜志;2009年03期

2 莊妍;莊麗;胡靜;閻巖;王定明;;貴州省A(H1N1)亞型流感病毒HA基因系列分析[J];貴州醫(yī)藥;2011年03期

3 徐翠玲;向妮娟;張燁;溫樂英;趙翔;李梓;郭俊峰;王敏;余宏杰;楊維中;郭元吉;舒躍龍;;2004—2005年中國A(H1N亞型流感病毒抗原性及基因特性研究[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2006年02期

4 舒躍龍;張燁;溫樂英;李梓;郭俊峰;王敏;余宏杰;楊維中;郭元吉;;2004年中國甲3亞型流感病毒(H3N2)抗原性及基因特性研究[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2005年04期

5 鄭麗舒;段招軍;彭夫望;謝志萍;高寒春;李武平;衣作安;侯云德;;跨膜區(qū)缺失的流感病毒M2蛋白表達(dá)純化及其抗原性檢測(cè)[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2006年04期

6 彭麗萍;趙大鵬;戚鳳春;汪春義;張雪梅;賈媛;匡科偉;陳云波;宋澤民;趙曉紅;徐建國;;甲型流感病毒DNA疫苗雙表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

7 張燁;趙翔;郭峻峰;隗合江;成艷輝;李鑫婉;徐翠玲;郭元吉;舒躍龍;;2006年中國流感病毒抗原性及基因特性研究[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2007年04期

8 白靚;金寧一;成巖;石毅;魯會(huì)軍;田明堯;南文龍;趙翠青;張金雙;關(guān)銘;;雙亞型(H5/H7)流感病毒DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫原性檢測(cè)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

9 于新芬;潘勁草;黃志成;葉榕;寇宇;;甲3型流感病毒M基因披甲R(shí)NA的研制[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2007年04期

10 陸家海,張欣,鄢新革,郭中敏,林錦炎,許銳恒,余新炳;A型流感病毒HA(H1N1)基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及序列分析[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2003年04期

，

本文編號(hào)：2001957