本文選題：乏氧 + 再氧合　； 參考：《山東大學(xué)》2009年博士論文

【摘要】： 第一篇乏氧及CD137通路對(duì)DC功能的影響 目的 乏氧是指局部組織器官處于一種遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于大氣氧壓的極低氧壓狀態(tài),主要見于許多生理及病理?xiàng)l件下,如遠(yuǎn)離毛細(xì)血管末端的組織,炎癥或腫瘤組織,以及器官移植、低血容量性休克、肝臟手術(shù)、心血管疾病等缺血情況。乏氧可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)放療和化療的抵抗,并可誘發(fā)其表型改變,從而促進(jìn)其轉(zhuǎn)移擴(kuò)散,因此治療后其預(yù)后往往較差。盡管乏氧對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性和行為的影響已有大量研究報(bào)道,但是在腫瘤、炎癥等乏氧微環(huán)境中,免疫細(xì)胞及免疫功能如何發(fā)生變化,尚不完全清楚。目前有限的研究主要集中于乏氧對(duì)巨噬細(xì)胞的影響,散在的體外實(shí)驗(yàn)顯示乏氧可抑制T細(xì)胞功能,如細(xì)胞活化增殖明顯減少,細(xì)胞因子表達(dá)顯著降低等,但具體的內(nèi)在機(jī)制并不清楚。 樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)作為連接固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的抗原遞呈細(xì)胞,其成熟狀態(tài)直接影響其抗原遞呈功能及刺激T細(xì)胞增殖的能力。未成熟DC主要位于外周非免疫器官或組織,攝取抗原之后向引流淋巴結(jié)遷移并逐漸分化為成熟DC,成熟DC高表達(dá)MHC-Ⅱ類分子及協(xié)同刺激分子CD80、CD86等,具有很強(qiáng)的抗原遞呈能力,從而誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的產(chǎn)生。DC的歸巢及遷徙往往需要經(jīng)過炎癥、腫瘤等病理組織,其中乏氧微環(huán)境對(duì)DC的狀態(tài)和功能影響如何?目前尚不明確。已有研究顯示乏氧條件下分化的人單核細(xì)胞來源的DC,其基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的表達(dá)明顯降低,遷移能力明顯下降,但是乏氧對(duì)小鼠DC的成熟及功能的影響,則鮮有報(bào)到。此外,缺血部位血液的再灌注可導(dǎo)致乏氧組織氧壓的迅速提升,而這種氧壓的急劇變化對(duì)DC及其所介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫的影響如何?目前尚無研究涉及。因此,本課題在研究乏氧條件下小鼠骨髓來源DC(bone marrow derived-DC,BM-DC)表型及功能變化的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探索了再氧合對(duì)乏氧DC表型及功能的影響,這對(duì)于解釋缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制,控制器官移植的排斥反應(yīng)以及腫瘤免疫治療等許多方面都具有重要的指導(dǎo)意義。 CD137-CD137L是繼CD28-B7之外的另一對(duì)重要的協(xié)同刺激分子。CD137屬于腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族,主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞,是一種可誘導(dǎo)的T細(xì)胞膜表面受體。CD137-CD137L通路可依賴或不依賴CD28-B7途徑提供協(xié)同刺激信號(hào),導(dǎo)致CD4~+、CD8~+T細(xì)胞的活化、增殖及分化,在適應(yīng)性免疫應(yīng)答中,尤其是初次應(yīng)答晚期以及再次應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。近年研究顯示CD137亦可表達(dá)于小鼠脾臟和骨髓來源的DC表面,刺激性抗CD137單抗可增強(qiáng)DC分泌IL-6和IL-12等細(xì)胞因子及其刺激T細(xì)胞增殖的能力,表明CD137通路在調(diào)節(jié)和增強(qiáng)DC功能方面具有不容忽視的作用。因此,本課題在研究乏氧、再氧合對(duì)小鼠DC功能影響的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討了CD137通路對(duì)乏氧DC功能的影響,以期通過CD137通路增強(qiáng)乏氧DC的功能,進(jìn)而增強(qiáng)固有免疫應(yīng)答或適應(yīng)性免疫應(yīng)答,從而為腫瘤以及移植排斥等的免疫治療提供新的思路和方法。 方法 一、常、乏氧條件下DC的表型及功能變化 1.分離C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞,分別在常、乏氧條件下利用GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)未成熟DC,LPS刺激DC成熟。 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測常、乏氧條件下分化DC表面的協(xié)同刺激分子CD80,CD86及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)差異。 3.RT-PCR和ELISA法分別檢測常、乏氧條件下分化DC所分泌細(xì)胞因子IL-1β,IL-6,TNF-α,TGF-β以及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9的表達(dá)差異。 4.CFSE法檢測常、乏氧條件下分化DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖能力的差異。 二、再氧合對(duì)乏氧條件下DC表型及功能的影響 1.對(duì)乏氧條件下分化的DC進(jìn)行不同時(shí)間的再氧合。 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測再氧合DC的表型變化(CD80,CD86及MHC-Ⅱ類分子)。 3.CFSE方法檢測再氧合DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖能力的變化。 5.流式細(xì)胞術(shù)檢測再氧合DC刺激CD4~+T細(xì)胞向IFN-γ~+Th1,IL-4~+Th2細(xì)胞的分化。 5.ELISA方法檢測再氧合DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖體系中細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)水平。 三、CD137通路對(duì)乏氧條件下分化DC表型及功能的影響 1.以抗CD137單克隆抗體刺激乏氧條件下分化的DC。 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測抗CD137單抗刺激DC的表型變化(CD80,CD86及MHC-Ⅱ類分子)。 3.RT-PCR法檢測抗CD137單抗刺激DC所分泌細(xì)胞因子以及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9的表達(dá)變化。 4.CFSE法檢測抗CD137單抗刺激DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖能力的變化。 結(jié)果 一、乏氧對(duì)DC表型及功能的影響 1.骨髓來源DC的誘導(dǎo)和純度 自C57BL/6小鼠分離骨髓細(xì)胞,在GM-CSF和IL-4存在的情況下,分別于常、乏氧條件下誘導(dǎo)分化未成熟DC,并于第6天用LPS刺激18-24小時(shí),以誘導(dǎo)DC的成熟。形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示,無論在常、乏氧條件下,至誘導(dǎo)第5-7天,光鏡下均可見具有典型樹突狀形態(tài)的DC。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,所收獲BM-DC表面CD11c的表達(dá)均在80%以上,達(dá)到所要求的DC純度。提示乏氧條件并不影響DC的誘導(dǎo)分化。 2.乏氧抑制DC的表型成熟 為了研究乏氧微環(huán)境是否影響DC的表型成熟,我們分別收集常、乏氧條件下以LPS刺激成熟的小鼠BM-DC,流式細(xì)胞術(shù)檢測其成熟相關(guān)表型。結(jié)果顯示,乏氧條件下誘導(dǎo)分化并以LPS刺激的DC仍保持未成熟或半成熟的表型特征,其表面CD80,CD86以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá),無論是百分比,還是平均熒光強(qiáng)度,均顯著低于LPS刺激的常氧成熟DC,其中MHC-Ⅱ類分子的平均熒光強(qiáng)度(MFI)降低尤為明顯(P＜0.01),表明LPS不能誘導(dǎo)乏氧條件下分化DC表面協(xié)同刺激分子以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)上調(diào),提示乏氧微環(huán)境可抑制DC的表型成熟。 3.乏氧抑制DC炎性細(xì)胞因子IL-1,IL-6和TNF-α的分泌以及MMP9的產(chǎn)生,上調(diào)免疫抑制因子TGF-β的分泌 為了研究乏氧微環(huán)境是否影響DC的細(xì)胞因子分泌及遷移等功能,我們分別收集常、乏氧條件下以LPS刺激成熟的小鼠BM-DC,采用RT-PCR和ELISA方法檢測評(píng)價(jià)相關(guān)細(xì)胞因子和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,乏氧條件下誘導(dǎo)分化的DC,其IL-1β,IL-6和TNF-α的mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯低于常氧成熟DC;而其TGF-β的mRNA和蛋白表達(dá)水平卻顯著高于常氧成熟DC,表明乏氧可抑制DC分泌炎性細(xì)胞因子IL-1,IL-6和TNF-α,但卻上調(diào)免疫抑制因子TGF-β的分泌。此外,我們發(fā)現(xiàn),較常氧成熟DC相比,乏氧條件分化并以LPS刺激的DC,其MMP9的mRNA水平明顯降低,提示乏氧可能通過抑制MMP9的表達(dá)而抑制DC的遷移功能。 4.乏氧抑制DC刺激同種異型CD4~+T細(xì)胞增殖的能力 為了探索乏氧微環(huán)境對(duì)DC致敏T細(xì)胞能力的影響,我們分別以常、乏氧條件下誘導(dǎo)產(chǎn)生的C57BL/6小鼠的DC刺激來自BALB/c小鼠的CD4~+T細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4~+T細(xì)胞增殖率的不同。結(jié)果顯示,以LPS刺激成熟的常氧DC,可誘導(dǎo)約40-50%左右的CD4~+T細(xì)胞的增殖;然而乏氧條件分化并以LPS刺激的DC,其誘導(dǎo)同種異型CD4~+T細(xì)胞增殖的能力很弱,只能誘導(dǎo)大約10%左右的CD4~+T細(xì)胞的增殖,甚至顯著低于常氧未成熟DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力(30%左右),可見LPS誘導(dǎo)的乏氧DC其刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力與常氧DC相比非常弱,說明乏氧微環(huán)境抑制LPS誘導(dǎo)的DC的功能成熟,尤其是其介導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的能力。 二、再氧合對(duì)乏氧DC表型及功能的影響 1.再氧合促進(jìn)乏氧DC的表型成熟 為了研究氧氣再給予對(duì)乏氧DC表型的影響,我們對(duì)乏氧條件下分化的DC進(jìn)行不同時(shí)間的再氧合,流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表面成熟相關(guān)表型的變化。結(jié)果顯示再氧合可已明顯上調(diào)乏氧DC表面協(xié)同刺激分子CD80,CD86以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá),且隨時(shí)間延長其表達(dá)強(qiáng)度逐漸增強(qiáng),再氧合6小時(shí)的DC其表面CD80,CD86以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)已明顯高于乏氧DC,至再氧合24到48小時(shí)達(dá)到高峰,甚至遠(yuǎn)高于LPS刺激的常氧成熟DC,呈現(xiàn)顯著成熟的表型。這些結(jié)果提示,當(dāng)給以充足的氧供,LPS刺激的乏氧DC具有完全甚至更強(qiáng)的向成熟DC分化的潛能。 2.再氧合增強(qiáng)DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力 由于再氧合可導(dǎo)致乏氧DC的表型成熟,我們進(jìn)一步研究了這些再氧合DC刺激CD4~+T活化增殖的能力。在同種異型增殖體系中,再氧合6小時(shí)的乏氧DC可強(qiáng)烈地刺激誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞的增殖,其刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力較乏氧DC顯著提高,可刺激約71.1%的CD4~+T細(xì)胞增殖,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過常氧成熟DC對(duì)CD4~+T細(xì)胞的刺激增殖(增殖率約為40.5%)(P＜0.01)。在抗CD3抗體存在的同種同型增殖體系中,同樣可以觀察到再氧合DC可強(qiáng)烈刺激CD4~+T細(xì)胞的增殖(增殖率92.0%),顯著高于常氧成熟DC對(duì)CD4~+T細(xì)胞的刺激增殖(增殖率約為71.7%)(P＜0.05)。提示再氧合可顯著增強(qiáng)乏氧DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力。 3.再氧合DC誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化 為了搞清再氧合DC對(duì)效應(yīng)性T細(xì)胞分化的影響,我們用流式細(xì)胞術(shù)檢測了混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系中CD4~+效應(yīng)T細(xì)胞的亞群。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與乏氧或常氧條件下分化的DC相比,再氧合DC可顯著誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞向IFN-γ~+Th1細(xì)胞分化(約為9.1%),明顯高于未成熟DC刺激產(chǎn)生的IFN-γ~+Th1細(xì)胞,甚至高于常氧成熟DC刺激產(chǎn)生的IFN-γ~+Th1細(xì)胞(約為6.8%);進(jìn)一步的ELISA結(jié)果證實(shí)再氧合DC刺激體系中存在高水平IFN-γ,顯著高于乏氧DC及常氧未成熟DC刺激體系(P＜0.05)。同時(shí),再氧合DC可刺激CD4~+T細(xì)胞向IL-4~+Th2細(xì)胞分化,但其比例較少(約為2.1%);ELISA結(jié)果亦顯示再氧合DC刺激體系中存在較高水平的IL-4。提示再氧合DC可誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞向Th1和Th2細(xì)胞分化,但更傾向于使其向Th1細(xì)胞分化。 三、CD137通路對(duì)乏氧DC表型及功能的影響 1.CD137單抗上調(diào)乏氧DC的成熟表型 為了研究CD137通路對(duì)乏氧DC的作用,我們分別檢測了常、乏氧條件下誘導(dǎo)分化并以LPS刺激的DC表面CD137分子的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者表面均有CD137分子的表達(dá),但總體表達(dá)強(qiáng)度并不太高;乏氧具有輕微下調(diào)DC表面CD137表達(dá)的趨勢,但未達(dá)到顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示乏氧微環(huán)境對(duì)DC表面CD137表達(dá)的影響并不大。 為了進(jìn)一步探討CD137分子的存在對(duì)乏氧DC的表型成熟的影響,我們用流式細(xì)胞術(shù)檢測了CD137單抗刺激的乏氧DC表面協(xié)同刺激分子CD80,CD86以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),乏氧條件下,刺激性CD137單抗可明顯上調(diào)DC表面CD80,CD86以及MHC-Ⅱ類分子的表達(dá),但無論是表達(dá)百分率還是表達(dá)強(qiáng)度均未達(dá)到常氧成熟DC表面的表達(dá)程度。這些結(jié)果表明CD137單抗可通過CD137分子促進(jìn)乏氧DC向接近成熟的表型方向轉(zhuǎn)變,但并不能促進(jìn)其表型的完全成熟。 2.CD137單抗可促進(jìn)乏氧DC炎性細(xì)胞因子及MMP9的產(chǎn)生 為了研究CD137通路對(duì)乏氧條件下分化DC遷移及炎性細(xì)胞因子分泌功能的影響,我們用RT-PCR法檢測了DC中MMP9以及細(xì)胞因子IL-1β,IL-6,IL-12p40和TNF-α等的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),CD137單抗刺激可上調(diào)乏氧DC中炎性細(xì)胞因子IL-1β,IL-6,IL-12p40和TNF-α的mRNA水平,但未達(dá)到常氧成熟DC中的水平;此外,CD137單抗刺激亦可在一定程度上增加乏氧DC中MMP9的表達(dá)。提示CD137單抗不僅可促進(jìn)乏氧DC炎性細(xì)胞因子的分泌;還可能通過MMP9的表達(dá)增加提高其遷移能力。 3.CD137單抗對(duì)乏氧DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖能力的影響 由于CD137單抗可在一定程度上刺激乏氧DC的表型成熟,我們進(jìn)一步研究了CD137單抗對(duì)乏氧DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖能力的影響。我們用來自C57BL/6小鼠的CD137單抗刺激的乏氧DC作為刺激細(xì)胞,用來自BALB/c小鼠的CD4~+T細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞,進(jìn)行T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示CD137單抗刺激的乏氧DC其誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞增殖率略高于無CD137單抗作用的乏氧DC,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示CD137通路對(duì)乏氧DC誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞增殖的能力無明顯影響。 結(jié)論 一、乏氧抑制LPS誘導(dǎo)的DC成熟及功能 1.乏氧可抑制LPS誘導(dǎo)的DC的成熟表型。 2.乏氧可降低DC分泌炎性細(xì)胞因子IL-1,IL-6和TNF-α,增高免疫抑制因子TGF-β的表達(dá)。 3.乏氧可抑制DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力。 二、再氧合促進(jìn)乏氧DC的成熟及功能 1.再氧合顯著促進(jìn)乏氧DC的表型成熟。 2.再氧合顯著增強(qiáng)乏氧DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力。 3.再氧合DC誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化。 三、CD137通路可促進(jìn)乏氧DC的成熟及其功能 1.CD137單抗可上調(diào)乏氧DC的成熟表型。 2.CD137單抗可促進(jìn)乏氧DC分泌炎性細(xì)胞因子IL-1,IL-6,IL-12和TNF-α。 3.CD137單抗對(duì)乏氧DC誘導(dǎo)CD4~+T細(xì)胞增殖的能力無明顯影響。 創(chuàng)新性 一、在國內(nèi)外率先證明乏氧可抑制小鼠LPS誘導(dǎo)的DC表型成熟,抑制其分泌炎性細(xì)胞因子及刺激CD4~+T增殖的能力,為研究乏氧微環(huán)境對(duì)免疫功能的影響提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 二、首先發(fā)現(xiàn)再氧合可明顯促進(jìn)DC的表型成熟,顯著增強(qiáng)DC刺激CD4~+T細(xì)胞增殖的能力,說明再氧合對(duì)乏氧抑制DC成熟及功能具有逆轉(zhuǎn)效應(yīng),這對(duì)于解釋缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制,控制器官移植的排斥反應(yīng)以及腫瘤的免疫治療等許多方面都具有重要的指導(dǎo)意義。 三、首先發(fā)現(xiàn)CD137單抗可促進(jìn)DC的表型成熟及炎性細(xì)胞因子的分泌。對(duì)于解釋CD137抗體體內(nèi)抗腫瘤的作用機(jī)制有一定價(jià)值。 局限性 一、再氧合促進(jìn)乏氧DC成熟及功能的作用機(jī)制尚需深入研究。 二、CD137單抗對(duì)乏氧DC的表型成熟及細(xì)胞因子分泌影響的機(jī)制和意義,以及CD137單抗刺激的乏氧DC刺激CD8~+T增殖的能力有待進(jìn)一步研究。 第二篇CD137和CD137L在人原發(fā)腫瘤組織中的表達(dá)及意義 目的 CD137作為腫瘤壞死因子超家族的一員,主要表達(dá)于活化的T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞表面;其配體CD137L主要表達(dá)于抗原遞呈細(xì)胞表面,如成熟的樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC),活化的B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。CD137-CD137L介導(dǎo)的共刺激信號(hào)可增強(qiáng)T細(xì)胞活化,促進(jìn)心臟同種異型移植物的排斥反應(yīng),清除實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的小鼠腫瘤。 然而,人類CD137和CD137L的表達(dá)并不局限于免疫細(xì)胞,人CD137-CD137L通路的功能也遠(yuǎn)比小鼠復(fù)雜。CD137蛋白已被證明可表達(dá)于原發(fā)惡性腫瘤的血管壁;CD137L亦被發(fā)現(xiàn)可表達(dá)于幾種不同的人類腫瘤細(xì)胞系,體外實(shí)驗(yàn)證明其是有功能的。迄今為止,關(guān)于CD137L在人類原發(fā)腫瘤中的表達(dá)尚無研究報(bào)道。因此,本研究的目的主要是分析CD137和CD137L在人類原發(fā)腫瘤中的表達(dá),并深入研究它們在腫瘤免疫中的潛在作用。 方法 一、病例收集:63例組織標(biāo)本來自山東大學(xué)齊魯醫(yī)院的手術(shù)病人,其中包括12例正常組織,15例上皮及間葉組織來源的良性腫瘤組織(腺瘤和平滑肌瘤),36例上皮來源的惡性腫瘤組織(鱗狀細(xì)胞癌和腺癌)。 二、免疫組織化學(xué)法分析CD137和CD137L在上述冰凍切片中的表達(dá)。 三、RT-PCR法分析CD137L在9株人類腫瘤細(xì)胞系中的mRNA表達(dá),其中包括3株肝癌細(xì)胞系,2株肺癌細(xì)胞系,2株結(jié)腸癌細(xì)胞系,1株淋巴瘤和1株白血病細(xì)胞系。 四、為了分析腫瘤細(xì)胞表面CD137L的作用,將表達(dá)CD137L的腫瘤細(xì)胞與表達(dá)CD137的活化T淋巴細(xì)胞或CHO細(xì)胞共培養(yǎng),ELISA法檢測細(xì)胞因子(IL-8,IFN-γ)的表達(dá)水平。 結(jié)果 一、人類原發(fā)腫瘤組織可表達(dá)CD137和CD137L,但其表達(dá)部位不同 CD137和CD137L僅表達(dá)于人類良性(2/15,3/15)或惡性(15/36,21/36)腫瘤組織中,但不表達(dá)于正常組織中(0/12,0/12)。CD137表達(dá)于腫瘤組織血管壁的上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,而CD137L表達(dá)于腫瘤細(xì)胞。盡管樣本來自于不同的組織類型,CD137和CD137L的表達(dá)更常見于惡性腫瘤組織,尤其是中度或低度分化的惡性腫瘤組織。 三、人類腫瘤細(xì)胞系表達(dá)高水平的CD137L 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示人類原發(fā)腫瘤組織中的腫瘤細(xì)胞可表達(dá)CD137L,我們進(jìn)一步用RT-PCR法檢測了來源于不同原發(fā)組織的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞系表面CD137L的表達(dá)。結(jié)果顯示,正常未刺激的外周血單個(gè)核細(xì)胞不表達(dá)CD137L mRNA,但所有檢測的腫瘤細(xì)胞系(HepG2.2.15,BEL7402,HLE,HT29,L78,A2,U937,HL60,H6)均顯示高水平的CD137L表達(dá)。出乎意料的是非腫瘤細(xì)胞系,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系ECV304也表達(dá)CD137L。這些結(jié)果顯示CD137L不僅表達(dá)于人類的原發(fā)腫瘤組織,也表達(dá)于腫瘤細(xì)胞系和一些非腫瘤細(xì)胞系,提示CD137L的表達(dá)可能與細(xì)胞的快速生長有關(guān)。 三、腫瘤細(xì)胞表達(dá)的CD137L是有功能的 為了研究腫瘤細(xì)胞表面CD137L的功能,我們將表達(dá)CD137L的腫瘤細(xì)胞與表達(dá)CD137的活化T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),ELISA法檢測IFN-γ的分泌。結(jié)果顯示,與不CD137的靜息T細(xì)胞相比,表達(dá)CD137的活化T淋巴細(xì)胞與L78細(xì)胞共培養(yǎng)可產(chǎn)生高水平的IFN-γ(P＜0.001),用抗CD137L單抗封閉CD137-CD137L通路,IFN-γ的分泌水平則明顯降低(P＜0.001)。 為了驗(yàn)證表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面的CD137L能否向腫瘤細(xì)胞傳遞信號(hào),我們將不同的腫瘤細(xì)胞與表達(dá)CD137的CD137-CHO細(xì)胞共培養(yǎng),ELISA法檢測IL-8的表達(dá)。結(jié)果顯示HepG2.2.15表面的CD137L與CD137-CHO表面的CD137交聯(lián)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞IL-8的分泌(P=0.038)。 結(jié)論 一、CD137和CD137L可表達(dá)于不同的人類原發(fā)腫瘤組織,但其表達(dá)部位不同。CD137表達(dá)于腫瘤組織血管壁的上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,而CD137L表達(dá)于腫瘤細(xì)胞。 二、腫瘤細(xì)胞表達(dá)的CD137L是有功能的,腫瘤細(xì)胞L78表面的CD137L與T細(xì)胞表面的CD137交聯(lián)可誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生高水平的IFN-γ,HepG2.2.15表面的CD137L與CD137的交聯(lián)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌IL-8,從而提示腫瘤組織中CD137和CD137L的表達(dá)可影響腫瘤的發(fā)展。 創(chuàng)新性 首次證明CD137和CD137L可表達(dá)于不同的人類原發(fā)腫瘤組織,腫瘤細(xì)胞表達(dá)的CD137L是有功能的,從而提示腫瘤組織中CD137和CD137L的表達(dá)可影響腫瘤的發(fā)展。 局限性 病例數(shù)有限,需擴(kuò)大病例數(shù)以進(jìn)行深入研究;對(duì)CD137和CD137L的表達(dá)分析,需進(jìn)一步收集相同組織來源的標(biāo)本進(jìn)行研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Role of adhesion molecules and dendritic cells in rat hepatic/renal ischemia-reperfusion injury and anti-adhesive intervention with anti-P-selectin lectin-EGF domain monoclonal antibody[J];World Journal of Gastroenterology;2005年07期

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本文編號(hào)：1989763