發(fā)布時(shí)間：2018-06-03 23:27

  本文選題：A類清道夫受體 + 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78��； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2008年博士論文

【摘要】： A類清道夫受體(Class A scavenger receptor,SR-A)是一種主要位于巨噬細(xì)胞表面的三聚體跨膜糖蛋白,能夠識(shí)別多種配體。SR-A介導(dǎo)的對(duì)化學(xué)修飾的低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)的內(nèi)吞可以導(dǎo)致巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的聚集,并引起動(dòng)脈粥樣硬化。SR-A的胞漿結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)受體介導(dǎo)的脂質(zhì)內(nèi)吞、細(xì)胞黏附以及受體在細(xì)胞表面的表達(dá)等過程。 我們先期的研究表明,利用GST pull-down的方法可以找到一種與SR-A胞漿域特異性結(jié)合的的葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(Glucose regulatedprotein 78,GRP78)。在本研究中,利用免疫共沉淀的方法驗(yàn)證了在細(xì)胞裂解液中GRP78和SR-A的特異性結(jié)合。利用RNA干擾技術(shù)抑制GRP78表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞SR-A表達(dá)水平?jīng)]有受到影響,GRP78與SR-A的結(jié)合能力沒有明顯的改變,但是SR-A對(duì)乙�；疞DL(acLDL)的攝取能力降低。建立SR-A受體穩(wěn)定表達(dá)的HEK293-SR-A細(xì)胞株,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在有acLDL存在時(shí),GRP78和SR-A在細(xì)胞內(nèi)的結(jié)合減少,同時(shí)細(xì)胞對(duì)acLDL的內(nèi)吞速率增加。利用免疫共沉淀結(jié)合二維電泳、質(zhì)譜分析的方法進(jìn)一步研究GRP78和SR-A的反應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)制,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)可能與GRP78和SR-A共同作用的蛋白質(zhì),提示它們可能在SR-A-GRP78反應(yīng)通路中起一定作用。增加GRP78的表達(dá)水平可以使SR-A介導(dǎo)的腫瘤壞死因子(TNF-α)分泌增加,這種調(diào)節(jié)作用可能與MAPK/ERK激酶(MAPK/ERKkinsase,MEK)-細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(Extracellular regulated proteinkinases,ERK)信號(hào)通路有關(guān)。本研究結(jié)果表明,GRP78可能在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞SR-A的功能活性中發(fā)揮重要的作用。
[Abstract]:Class A scavenger receptor Class A scavenger receptor SR-A-) is a trimer transmembrane glycoprotein mainly located on the surface of macrophages. Endocytosis of chemically modified low density lipoprotein (LDLs) mediated by various ligands. SR-A can lead to lipid aggregation in macrophages and to the regulation of receptor mediated lipid endocytosis by the cytoplasmic domain of atherosclerosis. SR-A. Cell adhesion and receptor expression on cell surface. Our previous studies have shown that the GST pull-down method can be used to find a glucose-regulated protein, 78(Glucose regulatedprotein 78, GRP78, which specifically binds to the cytoplasmic domain of SR-A. In this study, the specific binding of GRP78 and SR-A in cell lysate was verified by immunoprecipitation. RNA interference technique was used to inhibit the expression of GRP78. The results showed that the expression of SR-A was not affected by the binding ability of GRP78 to SR-A, but the uptake ability of SR-A to acetylated LDLL was decreased. A HEK293-SR-A cell line with stable expression of SR-A receptor was established. It was found that in the presence of acLDL, the binding of GRP 78 and SR-A was decreased, and the endocytosis rate of acLDL was increased. Immunoprecipitation combined with two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry were used to further study the regulatory mechanism of GRP78 and SR-A reaction. It was found that there were many proteins in cells that might interact with GRP78 and SR-A. These results suggest that they may play a role in the SR-A-GRP78 response pathway. Increasing the expression of GRP78 can increase the secretion of TNF- 偽 mediated by SR-A, which may be related to the MAPK / ERKkinsase- extracellular regulated protein kinese-ERK signaling pathway. Our results suggest that GRP78 may play an important role in regulating the functional activity of SR-A in macrophages.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R341

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1974712