本文選題：固有免疫 + NLRP3��； 參考：《中南大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：摘要：在哺乳動(dòng)物體內(nèi),存在多套免疫識(shí)別系統(tǒng),通過維持機(jī)體與共生菌群的正常互動(dòng)以及響應(yīng)外來病原和刺激的免疫反應(yīng),從而維持組織穩(wěn)態(tài)。與主要識(shí)別微生物來源病原相關(guān)分子模式的、存在于內(nèi)吞體和細(xì)胞膜上的Toll-like receptors (TLRs)不同,定位于胞內(nèi)的Nod-like receptors (NLRs)不僅識(shí)別胞內(nèi)病原相關(guān)分子模式,也識(shí)別宿主來源的損傷相關(guān)分子模式,比如機(jī)體因脅迫、組織損傷和細(xì)胞死亡而產(chǎn)生的內(nèi)源危險(xiǎn)信號(hào)。 NLRs是重要的胞質(zhì)內(nèi)模式識(shí)別受體,研究發(fā)現(xiàn)其大多數(shù)成員能構(gòu)成一個(gè)大的分子平臺(tái),如最初發(fā)現(xiàn)由NLRP1、ASC、caspase-1和caspase-5構(gòu)成,這個(gè)大的復(fù)合物被定義為"inflammasome",即炎癥小體,它被證明是促炎細(xì)胞因子IL-1β (Interleukin-1β)活化所必需的。之后,許多NLRs[2-5]家族和PYHINs家族的感受蛋白也相續(xù)被證明能在各種Damage-associated molecular patterns (DAMPs)和Pathogen-associated molecular patterns (PAMPs)刺激下形成功能性炎癥小體�，F(xiàn)在,炎癥小體的提出已被公認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)免疫監(jiān)視系統(tǒng)里程碑式的發(fā)現(xiàn)。機(jī)體內(nèi),炎癥小體廣泛參與了抗微生物感染的先天性免疫反應(yīng),其中研究得最廣泛、最深入的就是NLRP3(NLR family, pyrin domain containing3)炎癥小體�；贜LRP3炎癥小體的分子靶向治療目前也正在研究當(dāng)中。因此,深入發(fā)掘NLRP3信號(hào)通路分子調(diào)控機(jī)制,有可能為揭示炎癥、免疫及疾病之間的相互關(guān)系提供重要依據(jù),同時(shí)為某些疾病治療提供新的靶點(diǎn)。 近年來,通過對(duì)NLRP3炎癥小體及其相互作用蛋白質(zhì)的研究,增加了人們對(duì)NLRP3功能調(diào)控的認(rèn)識(shí)。因此,為進(jìn)一步探索關(guān)于炎癥小體的信號(hào)調(diào)控機(jī)制及其生物學(xué)功能提供基礎(chǔ),本項(xiàng)研究通過酵母雙雜交的技術(shù)手段篩選與NLRP3相互作用的蛋白質(zhì)。以NLRP3三個(gè)基本結(jié)構(gòu)域PYD、NACHT、LRR為誘餌,在人白細(xì)胞cDNA文庫(kù)中篩選其相互作用蛋白質(zhì)。經(jīng)過酵母細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證,我們從87個(gè)初步陽(yáng)性克隆中篩選出了4個(gè)與NLRP3相互作用的候選陽(yáng)性克隆,即ECHS1(enoyl CoA hydratase, shortchain,1)、 UBE2I(ubiquitinconjugating enzyme E2I)、RPL34(ribosomal protein L34)以及PXN(paxillin)。進(jìn)一步在真核細(xì)胞內(nèi)驗(yàn)證了這些候選蛋白質(zhì)與NLRP3的相互作用,免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)表明ECHS1能夠結(jié)合NLRP3。本項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)NLRP3和ECHS1的相互作用可能是一個(gè)新的NLRP3調(diào)控因素,進(jìn)一步深入研究有可能發(fā)現(xiàn)一個(gè)關(guān)于NLRP3功能調(diào)控的新機(jī)制。圖15幅,表3個(gè),參考文獻(xiàn)58篇
[Abstract]:Abstract: in mammals, there are many sets of immune recognition systems to maintain the tissue homeostasis by maintaining the normal interaction between organism and symbiotic flora and the immune response to exogenous pathogens and stimuli. Different from the molecular patterns related to the identification of pathogenic pathogens from microorganisms, Toll-like receptors TLRs, which exist in endocysts and cell membranes, not only recognize intracellular pathogen-related molecular patterns, but also Nod-like receptors nlRs, which are located in cells. Host-derived damage-related molecular patterns such as endogenous danger signals from stress tissue damage and cell death are also identified. NLRs is an important intracytoplasmic pattern recognition receptor, and studies have found that most of its members can form a large molecular platform, such as NLRP1ASCASCCaspase-1 and caspase-5, a large complex that is defined as "inflammasome", the inflammatory body. It has been proved to be necessary for the activation of the inflammatory cytokine IL-1 尾-Interleukin-1 尾. After that, many receptor proteins of NLRs [2-5] family and PYHINs family have been proved to be able to form functional inflammatory corpuscles stimulated by various Damage-associated molecular patterns dabs and Pathogen-associated molecular patterns pampps. Now, the presentation of inflammatory bodies has been recognized as a landmark discovery of the intracellular immune surveillance system. Inflammatory corpuscles are widely involved in the innate immune response against microbial infection, among which the most widely studied is NLRP3(NLR family, pyrin domain containing 3) inflammatory corpuscles. Molecular targeting therapy based on NLRP3 inflammatory bodies is also being studied. Therefore, exploring the molecular regulation mechanism of NLRP3 signaling pathway may provide an important basis for revealing the relationship between inflammation, immunity and disease, and provide new targets for the treatment of some diseases. In recent years, the study of NLRP3 inflammatory bodies and their interacting proteins has increased the understanding of the regulation of NLRP3 function. Therefore, in order to further explore the signal regulation mechanism and biological function of inflammatory bodies, this study screened proteins interacting with NLRP3 by yeast two-hybrid technique. The interaction proteins of NLRP3 were screened from human leukocyte cDNA library using three basic domains of NLRP3, PYDX NACHTLRR as bait. After further verification in yeast cells, we screened 4 candidate positive clones interacting with NLRP3 from 87 primary positive clones, namely, ECHS1(enoyl CoA hydratase, short chain1, UBE2I(ubiquitinconjugating enzyme E2IXRPL34 ribosomal protein L34) and PXNPAPAXLIN. The interaction of these candidate proteins with NLRP3 was further confirmed in eukaryotic cells. Co-IPP immunoprecipitation assay showed that ECHS1 could bind to NLRP3. This study found that the interaction between NLRP3 and ECHS1 may be a new regulatory factor for NLRP3, and it is possible to find a new mechanism for the regulation of NLRP3 function by further study. 15 figures, 3 tables, 58 references
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3411

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1967947