發(fā)布時(shí)間：2018-06-01 21:30

  本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + LDL��； 參考：《華中科技大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 背景動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis, As)是許多心腦血管疾病發(fā)生的前期病理基礎(chǔ)。在高脂等因素所致的As發(fā)生過(guò)程中,平滑肌細(xì)胞增生并合成細(xì)胞外基質(zhì)是其重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為,病變中的平滑肌細(xì)胞來(lái)源于病變部位的動(dòng)脈中膜。然而最近研究結(jié)果表明,病灶部位的平滑肌細(xì)胞并非完全來(lái)自于中膜,骨髓來(lái)源的細(xì)胞在一定的情況下可以定向分化為平滑肌細(xì)胞參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。 目的探討低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSC)向平滑肌樣細(xì)胞分化及myocardin在其分化過(guò)程中的作用。 方法用差異貼壁法分離純化原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,在不同濃度血清誘導(dǎo)BMSC分化條件下加以LDL刺激,檢測(cè)BMSC分化過(guò)程中myocardin及平滑肌細(xì)胞表面標(biāo)志平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),平滑肌肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain, SM-MHC)以及SM-22α的表達(dá)。細(xì)胞分為:①常規(guī)培養(yǎng)組(含低糖-DMEM培養(yǎng)基,10%胎牛血清,3%谷氨酰胺),②常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組(25mg/L),③2 0%FBS培養(yǎng)組,④20%FBS培養(yǎng)+LDL刺激組。②、④組分別在培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后加入LDL,各組細(xì)胞均培養(yǎng)96小時(shí)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)myocardin、α-SMA及SM-MHC的表達(dá),結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定BMSC向平滑肌樣細(xì)胞分化的情況;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測(cè)myocardin、α-SMA及SM-22αmRNA的表達(dá)。 結(jié)果光鏡顯示BMSC隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸由小圓形、多角形轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)梭形。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組、20%FBS培養(yǎng)組、20%FBS培養(yǎng)+LDL刺激組分別與常規(guī)培養(yǎng)組相比myocardin、α-SMA及SM-MHC蛋白的表達(dá)增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0. 05, n=9);同種濃度血清培養(yǎng),LDL作用48小時(shí)上述三種蛋白的表達(dá)最強(qiáng);相同LDL作用時(shí)間點(diǎn),20%FBS培養(yǎng)+LDL剌激組與常規(guī)培養(yǎng)+LDL剌激組相比上述三種蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0. 05, n=9);α-SMA、SM-MHC蛋白的表達(dá)與myocardin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0. 9018, P0.05; r=0. 7969,P0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組、20%FBS培養(yǎng)組、20%FBS培養(yǎng)+LDL刺激組分別與常規(guī)培養(yǎng)組相比myocardin、α-SMA及SM-22αmRNA表達(dá)增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0. 05, n=9);同種濃度血清培養(yǎng),LDL作用48小時(shí)myocardin、α-SMA及SM-22αmRNA的表達(dá)最強(qiáng);相同LDL作用時(shí)間點(diǎn),20% FBS培養(yǎng)+LDL刺激組與常規(guī)培養(yǎng)+LDL刺激組相比myocardin、α-SMA及SM-22αmRNA的表達(dá)均明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0. 05,n=9)。α-SMA、SM-22αmRNA表達(dá)與myocardin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0. 9295, P0.05; r=0. 8940,P0.05)。 結(jié)論LDL,20%FBS均可誘導(dǎo)BMSC向平滑肌樣細(xì)胞分化,LDL聯(lián)合20% FBS誘導(dǎo)BMSC向平滑肌樣細(xì)胞分化的作用最強(qiáng)。myocardin可能在此過(guò)程中起重要作用。
[Abstract]:Background Atherosclerotic atherosclerosis (as) is the early pathological basis of many cardiovascular and cerebrovascular diseases. Smooth muscle cells proliferate and synthesize extracellular matrix (ECM) in the process of as induced by hyperlipidemia and other factors. The traditional view is that the smooth muscle cells in the lesion originate from the medial membrane of the artery at the site of the lesion. However, recent studies have shown that the smooth muscle cells in the lesion are not completely derived from the mesenchyma, and that the cells derived from the bone marrow can be differentiated into smooth muscle cells to participate in the occurrence and development of atherosclerosis. Objective to investigate the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) into smooth muscle like cells (SMCs) induced by low density lipoprotein (LDL) and the role of myocardin in the differentiation process. Methods Primary bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and purified by differential adherent method, and stimulated with LDL under different concentration of serum to induce BMSC differentiation. The expression of myocardin and smooth muscle actinin (偽 -SMAA), smooth muscle myosin heavy chain smooth muscle myosin heavy chain, (SM-MHC) and SM-22 偽 were detected during BMSC differentiation. The cells were divided into two groups: 1: 1 conventional culture group (10% fetal bovine serum containing 10% fetal bovine serum and 3% Glutamine) in 10% low sugar DMEM culture group (LDL stimulation group) 25 mg / L / L ~ (32) S culture group ~ (42) S culture LDL stimulation group. Four groups were cultured for 24 hours, 48 hours and 72 hours, respectively. The cells in each group were cultured for 96 hours. The expression of myocardinin, 偽 -SMA and SM-MHC was detected by immunocytochemistry, and the differentiation of BMSC into smooth muscle cells was identified by morphology, and the expressions of myocardin, 偽 -SMA and SM-22 偽 mRNA were detected by reverse transcription-polymerase chain reactionation (RT-PCR) by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results the light microscope showed that BMSC gradually changed from small circle and polygonal to long fusiform with the prolongation of induction time. The results of immunocytochemistry showed that the expression of myocardinin, 偽 -SMA and SM-MHC protein in LDL group, 20s culture group and 20s cultured LDL group were significantly higher than those in conventional culture group. The expression of the above three proteins was the strongest in the same concentration of serum culture group at 48 hours, and the expression of the above three proteins in the 20s cultured LDL stimulation group was significantly higher than that in the conventional cultured LDL stimulation group at the same time point of time of LDL, and the expression of the above three proteins was significantly higher in the 20s cultured LDL stimulation group than in the conventional cultured LDL stimulation group. The difference was statistically significant (P0. The expression of 偽 -SMA-SM-MHC protein was positively correlated with the expression of myocardin. 9018, P0. 05; r0. 0. The results of RT-PCR showed that the expressions of myocardinin, 偽 -SMA and SM-22 偽 mRNA were significantly higher in LDL stimulation group, 20 S culture group and 20 S cultured LDL group than in normal culture group, respectively. The expression of myocardinin, 偽 -SMA and SM-22 偽 mRNA in the same concentration serum culture group was the highest at 48 hours, and the expression of myocardinin, 偽 -SMA and SM-22 偽 mRNA in the same LDL treated group was significantly higher than that in the control LDL group, and the difference was statistically significant (P0). The expression of 偽 -SMA-SM-22 偽 mRNA was positively correlated with the expression of myocardin. 9295, P0.05; r0. 0. 8940 (P0.05). Conclusion both LDL and 20s can induce BMSC to differentiate into smooth muscle cells. Myocardin may play an important role in this process.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1965694