本文選題：FK506 + 丙烯酰胺�。� 參考：《山東大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的丙烯酰胺(acrylamide, ACR)是一種用途廣泛的有機(jī)化工原料,對(duì)人群和動(dòng)物具有明顯的神經(jīng)毒性,表現(xiàn)為四肢末端感覺和運(yùn)動(dòng)對(duì)稱性障礙的多發(fā)性神經(jīng)病,但其損傷機(jī)制還不十分清楚。FK506 (tacrolimus,譯名他克莫司)是目前臨床上用于控制器官移植排斥反應(yīng)的一線藥物,FK506對(duì)ACR引起中毒性神經(jīng)病的保護(hù)作用已受到廣泛關(guān)注,但其保護(hù)機(jī)制尚未完全明了。本實(shí)驗(yàn)通過建立丙烯酰胺亞急性中毒大鼠模型,測(cè)定給予FK506后大鼠神經(jīng)行為學(xué)變化以及神經(jīng)組織中鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin, CaN),熱休克蛋白70 (Heat Shock Protein, HSP70)及凋亡蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)水平,以闡明FK506通過誘導(dǎo)熱休克蛋白和抑制凋亡從而發(fā)揮對(duì)ACR所致中毒性神經(jīng)病的保護(hù)作用,為探討ACR引起的中毒性神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制以及預(yù)防治療提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。 方法 一、動(dòng)物模型及動(dòng)物行為觀察 健康雄性Wistar大鼠(200±20 g)60只適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、FK506低劑量組和高劑量組共4組,每組15只。模型組和FK506低劑量組和高劑量組均先給予ACR 30 mg／kg.bw腹腔注射；正常對(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水；間隔1 h后,FK506低劑量組和高劑量組分別給予FK5060.5和1 mg／kg.bw皮下注射；各組給藥5次／W,連續(xù)4周。大鼠給藥4周后斷頭處死,留取大腦、小腦、脊髓和坐骨神經(jīng)組織,備用。每周測(cè)體重及神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo)一次。 二、指標(biāo)測(cè)定 給藥期間測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變：步態(tài)評(píng)分、甩尾指數(shù)、壓痛指數(shù)、平衡指數(shù)和后肢撐力指數(shù)；蛋白免疫印跡(Western blotting)測(cè)定實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)各組大鼠大腦、小腦、脊髓和坐骨神經(jīng)組織中的CaN,HSP70及凋亡蛋白Bcl-2,Bax等蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果 一、體重與癥狀分級(jí) 對(duì)照組大鼠體重在4周內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定增長(zhǎng)；模型組體重增長(zhǎng)速度小于對(duì)照組,兩者體重于第2周出現(xiàn)顯著性差異(P0.01)；FK506低劑量組和高劑量組大鼠1周后體重即明顯低于模型組大鼠(P0.01)。 二、大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變 1.步態(tài)評(píng)分：模型組大鼠1周后出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、蹣跚、足外撇等異常步態(tài),以后癥狀逐漸加重；與模型組相比,FK506低、高劑量組分別從第2周和第1周起步態(tài)評(píng)分明顯改善,至第4周結(jié)束時(shí),改善幅度分別達(dá)19.1%和43.4%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2.甩尾指數(shù)：與對(duì)照組相比,模型組第2周開始甩尾時(shí)間降低20.4%(P＜0.01),隨時(shí)間推移有明顯縮短趨勢(shì)；FK506低、高劑量組大鼠甩尾時(shí)間與對(duì)照相比有減少趨勢(shì),但與模型組相比,低劑量組大鼠第4周甩尾時(shí)間延長(zhǎng)了20.4%(P＜0.01),高劑量組從第3周開始有明顯差異(P＜0.05),到第4周甩尾時(shí)間延長(zhǎng)23.3%。 3.痛覺閾值：除對(duì)照組外,各組大鼠痛覺閾值隨時(shí)間變化均有降低趨勢(shì)。模型組從第1周開始痛覺閾值與對(duì)照組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；FK506低、高劑量組大鼠分別在給藥第3周和第1周痛覺閾值比模型組升高23.1%和11.1%,試驗(yàn)結(jié)束時(shí),分別升高33.3%和38.5%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 4.轉(zhuǎn)棒指數(shù)：除對(duì)照組外,其余各組停留時(shí)間均有明顯降低趨勢(shì)；與對(duì)照組相比,模型組大鼠因后肢癱瘓停留時(shí)間從第3周開始無(wú)法測(cè)量；從第2周開始,FK506低、高劑量組大鼠停留時(shí)間與對(duì)照組相比明顯下降,但與模型組相比明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 5.后肢撐力指數(shù)：除對(duì)照組外,各組大鼠后肢展開間距隨時(shí)間變化均有增大趨勢(shì)；從第1周開始,模型組大鼠后肢間距比對(duì)照組明顯增寬(P0.01),FK506低、高劑量組大鼠后肢間距明顯比模型組降低,到第4周,低、高劑量組大鼠后肢間距比模型組分別降低8.6%和31.3%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 三、Western blotting分析結(jié)果顯示 1.大鼠神經(jīng)組織上清中CaN蛋白含量的變化：與正常對(duì)照組相比,模型組脊髓上清中CaN相對(duì)含量表達(dá)沒有變化,而大腦和小腦組織中分別升高了24%和32%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比,FK506低、高劑量組CaN含量在脊髓中表達(dá)降低,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。FK506低劑量組大腦和小腦組織中CaN相對(duì)含量分別降低了3.2%和9.8%,后者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),而在FK506高劑量組中其含量表達(dá)分別降低了13.7%和26.5%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；在坐骨神經(jīng)組織中沒有檢測(cè)到CaN蛋白含量。2.大鼠大腦組織上清中HSP70、Bcl-2 and Bax蛋白含量的變化：與正常對(duì)照組相比,模型組大腦組織上清中HSP70和Bax蛋白相對(duì)含量表達(dá)沒有變化,而Bcl-2含量表達(dá)增加了34%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比,FK506低劑量組中Bcl-2 and Bax蛋白含量表達(dá)不明顯,而HSP70含量表達(dá)增加了11.6%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；在FK506高劑量組中HSP70、Bcl-2 and Bax蛋白含量表達(dá)分別增加了33.3%、16.3%和16.4%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.大鼠小腦組織上清中HSP70、Bcl-2 and Bax蛋白含量的變化：與對(duì)照組相比,模型組小腦組織上清中Bcl-2 and Bax蛋白相對(duì)含量表達(dá)沒有變化,而HSP70含量表達(dá)增加了15%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組相比,FK506低劑量組中Bax蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,而HSP70和Bcl-2含量表達(dá)增加了29.4%和68.8%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；在FK506高劑量組中HSP70、Bcl-2 and Bax蛋白含量表達(dá)分別增加了41.2%、174.2%和47.8%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 4.大鼠脊髓組織上清中HSP70、Bcl-2 and Bax蛋白含量的變化：與對(duì)照組相比,模型組脊髓組織上清中HSP70和Bcl-2蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,而Bax含量表達(dá)增加了22.3%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與模型組相比,FK506低劑量組HSP70和Bcl-2蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,而Bax含量表達(dá)增加了46.8%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；在FK506高劑量組中HSP70蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,Bcl-2含量表達(dá)增加了14.8%,Bax含量表達(dá)降低了40.2%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 5.大鼠坐骨神經(jīng)組織上清中HSP70、Bcl-2 and Bax蛋白含量變化：與對(duì)照組相比,模型組坐骨神經(jīng)組織上清中Bcl-2蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,而HSP70和Bax含量表達(dá)分別增加了41%和29%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與模型組相比,FK506低劑量組Bax蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,而HSP70,Bcl-2蛋白含量表達(dá)增加了56.3%和39.1%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；在FK506高劑量組中Bax蛋白含量表達(dá)無(wú)明顯變化,HSP70和Bcl-2蛋白含量表達(dá)增加了58.5%和56%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論 1.FK506既能改善痛覺指數(shù)和甩尾指數(shù)等感覺神經(jīng)功能異常,又能明顯改善步態(tài)評(píng)分、轉(zhuǎn)棒指數(shù)和后肢撐力指數(shù)等運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能異常,且FK506低、高劑量組間顯示有劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。FK506具有保護(hù)ACR導(dǎo)致的大鼠周圍運(yùn)動(dòng)和感覺神經(jīng)損傷的作用。 2.FK506抑制神經(jīng)組織中CaN蛋白含量的表達(dá),提示FK506可能通過抑制CaN介導(dǎo)的T細(xì)胞的增殖、神經(jīng)元凋亡和鈣離子升高等機(jī)制來發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。 3.FK506能誘導(dǎo)神經(jīng)組織中HSP70、Bcl-2表達(dá)上調(diào)和Bax表達(dá)下調(diào),提示FK506對(duì)丙烯酰胺染毒大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用可能與其誘導(dǎo)的高表達(dá)HSP70的抗凋亡作用有關(guān)。
[Abstract]:鐩殑涓欑儻閰拌兒(acrylamide, ACR)鏄竴縐嶇敤閫斿箍娉涚殑鏈夋満鍖栧伐鍘熸枡,瀵逛漢緹ゅ拰鍔ㄧ墿鍏鋒湁鏄庢樉鐨勭緇忔瘨鎬，

本文編號(hào)：1920567