發(fā)布時間：2018-05-15 11:04

  本文選題：單純皰疹病毒Ⅰ + 質(zhì)膜蛋白tetraspanin　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2008年博士論文

【摘要】：單純皰疹病毒工(HSV-1)是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的雙鏈DNA病毒,具有較強(qiáng)傳染性,在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過程中與宿主細(xì)胞之間表現(xiàn)有多種相互作用。HSV-1與細(xì)胞的相互作用是研究HSV-1感染不同細(xì)胞后會形成不同的感染過程及結(jié)果的基礎(chǔ)。以這個角度來看,對于病毒蛋白及其細(xì)胞作用蛋白在病毒感染周期中的功能分析,在探索細(xì)胞對病毒感染產(chǎn)生相應(yīng)反應(yīng)的機(jī)理,和由此機(jī)理所導(dǎo)致的各種可能的生物學(xué)意義,以及由此確定的臨床治療或診斷方法等領(lǐng)域內(nèi)的應(yīng)用都具有很大的意義。 HSV-1 VP26是核衣殼組成中最小的蛋白,其功能至今尚未闡明。本實驗的研究重點(diǎn)是分析在病毒感染周期中病毒核衣殼蛋白VP26的功能及尋找與其相互作用的細(xì)胞蛋白。首先構(gòu)建了UL35-EGFP重組病毒,利用該重組病毒與野毒株的生長曲線的差異分析,發(fā)現(xiàn)重組病毒出現(xiàn)了出胞膜阻滯的現(xiàn)象,提示VP26的功能可能與病毒感染周期中的出質(zhì)膜環(huán)節(jié)相關(guān)。隨后通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩查到VP26和細(xì)胞膜上的蛋白——CMTP-7有相互作用,免疫共沉淀和雙熒光細(xì)胞共定位分析驗證了二者在完整細(xì)胞中存在生理性相互作用。隨后采用siRNA技術(shù)和實時定量PCR方法進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,在敲除CMTP-7蛋白的細(xì)胞內(nèi),病毒復(fù)制裝配未受影響,但出現(xiàn)病毒出胞阻滯的現(xiàn)象,檢測病毒滴度發(fā)現(xiàn)病毒生長量低于正常細(xì)胞內(nèi)的所得數(shù)量,運(yùn)用透射電鏡也觀察到了在近細(xì)胞膜的胞質(zhì)外圍處出現(xiàn)了堆積成團(tuán)的病毒。而流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)在病毒出細(xì)胞時CMTP-7也隨之減少。這些結(jié)果表明CMTP-7的功能和HSV-1出質(zhì)膜這一過程相關(guān)。HSV-1在CMTP-7蛋白敲除的細(xì)胞內(nèi)和UL35-EGFP重組病毒在正常細(xì)胞內(nèi)所表現(xiàn)出的特性極為相似。 以上結(jié)果強(qiáng)烈提示二者通過相互作用在完成同一項功能。即VP26具有與病毒包膜化和有效出胞膜的相關(guān)功能,并且是通過CMTP-7相互作用來完成這一對病毒感染周期至關(guān)重要的過程。而在熒光顯微鏡下還觀察到,CMTP-7可以隨病毒再次感染其它細(xì)胞。并且在新生病毒粒上檢測出了CMTP-7蛋白。這些結(jié)果似乎表明CMTP-7和VP26作用后,對于病毒的意義遠(yuǎn)不止是體現(xiàn)在出胞釋放這一個過程中。 至此,我們據(jù)本實驗研究結(jié)果對VP26和CMTP-7的相互作用在HSV-1感染周期中所起的作用提出初步假設(shè)。核衣殼在細(xì)胞核內(nèi)裝配成熟后,經(jīng)過胞質(zhì)運(yùn)輸?shù)竭_(dá)質(zhì)膜,VP26蛋白通過和CMTP-7的相互作用,觸發(fā)了HSV-1包膜化的進(jìn)程,并且在完成HSV-1的包膜化的同時進(jìn)行有效出胞的過程。CMTP-7也結(jié)合在病毒粒核衣殼外層被膜中并且跟隨病毒參與新一輪細(xì)胞感染。
[Abstract]:Herpes simplex virus (HSV-1) is a complex double-stranded DNA virus with strong infectivity. The interaction between HSV-1 and host cells in the process of intracellular replication. The interaction between HSV-1 and cells is the basis for the study of different infection processes and results of HSV-1 infection with different cells. From this point of view, the functional analysis of viral proteins and their cell-acting proteins in the viral infection cycle is used to explore the mechanism of cell response to virus infection and the possible biological implications of the mechanism. And the clinical treatment or diagnostic methods are of great significance. HSV-1 VP26 is the smallest protein in the nucleocapsid composition, and its function has not been elucidated. The focus of this study was to analyze the function of viral nucleocapsid protein (VP26) in the viral infection cycle and to find the cell proteins interacting with it. Firstly, the UL35-EGFP recombinant virus was constructed. By analyzing the difference between the growth curve of the recombinant virus and that of the wild strain, it was found that the recombinant virus appeared the phenomenon of cell membrane block, which suggested that the function of VP26 might be related to the plasma membrane in the virus infection cycle. Then the interaction between VP26 and CMTP-7 was detected by yeast two-hybrid system. The results of immunoprecipitation and bifluorescence cell co-localization showed that there was physiological interaction between VP26 and CMTP-7 in intact cells. SiRNA technique and real-time quantitative PCR were used to further study. In the cells knockout CMTP-7 protein, the replication and assembly of the virus was not affected, but the phenomenon of virus exocytosis was found. Detection of virus titer showed that the virus growth was lower than that of normal cells, and a cluster of viruses was observed near the cytoplasm of the cell membrane by transmission electron microscopy (TEM). Flow cytometry showed that CMTP-7 also decreased when the virus came out of the cell. These results suggest that the function of CMTP-7 is closely related to the process of HSV-1 exudation. HSV-1 exhibits very similar characteristics in CMTP-7 protein knockout cells and UL35-EGFP recombinant virus in normal cells. The above results strongly suggest that the two perform the same function by interacting with each other. That is to say, VP26 has the function of virus encapsulation and effective exfoliation, and it is a very important process of virus infection cycle through CMTP-7 interaction. Under fluorescence microscope, CMTP-7 could reinfect other cells with the virus. CMTP-7 protein was detected on the neovascularization virus. These results suggest that the effect of CMTP-7 and VP26 on the virus is much more than the process of cell release. So far, we hypothesized the role of VP26 and CMTP-7 interaction in HSV-1 infection cycle. After the nucleocapsid was assembled and matured in the nucleus, the VP26 protein was transported to the plasma membrane through the cytoplasmic transport, which triggered the process of HSV-1 encapsulation through the interaction with CMTP-7. CMTP-7 also binds to the outer membrane of the nucleocapsid of the virus and follows the virus to participate in the new round of cell infection.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R373

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白海群;田澤華;楊明;劉子儀;;幾種植物提取液對感染TMV煙草葉片核酸及類黃酮含量的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年34期

2 趙月萍,馬明英,王建軍,謝東,任軍;一起爆發(fā)型柯薩奇病毒性腦炎的病原分離與鑒定[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年06期

3 趙月萍,周淑潔,唐繼海,羅光燾,潘福龍,夏志才,覃德芹;腮腺炎病毒抗體檢測在腮腺炎并發(fā)腦膜腦炎診斷中的應(yīng)用[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2003年06期

4 李國蘭;郭玲;李治悅;卜戈;于昌軍;張威;楊帆;李建國;王偉;;RT-PCR法在快速檢測腸道病毒71型(EV71)核酸中應(yīng)用[J];安徽醫(yī)學(xué);2008年04期

5 劉輝;潘家華;;EV71感染臨床特點(diǎn)及治療進(jìn)展[J];安徽醫(yī)學(xué);2008年04期

6 江楊帆;刁慧敏;周秀紅;何素冰;吳納新;盛曉蓉;;射岑含片體外抗腺病毒3型作用的實驗研究[J];安徽醫(yī)學(xué);2010年09期

7 顧建華;;百貝寧治療嬰幼兒輪狀病毒腸炎[J];安徽醫(yī)藥;2007年01期

8 張寶華;;重組人干擾素a2b治療流行性腮腺炎臨床觀察[J];安徽醫(yī)藥;2008年12期

9 夏仁飛;周迎春;黃海軍;;番石榴葉水煎液及其總黃酮抗輪狀病毒作用研究[J];安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年03期

10 陳曉琦,曹濤,王繼麟,徐葛林;單克隆抗體在呼吸道合胞病毒感染診斷和防治中的應(yīng)用[J];氨基酸和生物資源;2004年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 莊金秋;梅建國;沈志強(qiáng);;水貂細(xì)小病毒性腸炎實驗室診斷方法研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

2 韓金樂;賈繼宗;李川;楊亮;何德磊;李娟;葉祥忠;李益民;;腸道病毒71抗原ELISA定量檢測方法構(gòu)建及其應(yīng)用[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

3 方美玉;任瑞文;劉建偉;;我國甲病毒的研究進(jìn)展及其預(yù)防[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會論文集[C];2009年

4 戚鵬;韓金祥;魯艷芹;王傳璽;欒中華;卜范峰;;病毒編碼的miRNAs:基因表達(dá)新的調(diào)控因子[A];山東省藥學(xué)會2006年生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

5 劉悅越;劉艷;谷金蓮;于洋;國泰;;血清抗輪狀病毒IgA診斷試劑的研制[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

6 周伯平;劉威龍;謝靖婧;陳心春;徐六妹;譚艷;劉映霞;楊桂林;;腸道病毒71型重組VP1蛋白的表達(dá)和EV71型手足口病血清學(xué)診斷方法的建立[A];全國第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

7 劉兆梅;溫瑞興;馬洪濤;;中藥青龍爪抗HIV-1病毒的實驗研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會防治艾滋病學(xué)術(shù)研討會暨2006年年會論文集[C];2006年

8 袁斌;任現(xiàn)志;孫軼秋;鄒建東;趙長江;劉光陵;陳吉慶;趙德育;徐玲;;清肺口服液治療小兒呼吸道合胞病毒肺炎166例臨床研究[A];第25屆全國中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)研討會暨中醫(yī)藥高等教育兒科教學(xué)研究會會議學(xué)術(shù)論文集[C];2008年

9 傅燕;高紅;劉健毅;;寧波地區(qū)嬰幼兒輪狀病毒VP7序列分析[A];2007年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

10 張麗榮;;珠海市多起連續(xù)發(fā)生的乙型流感疫情的病毒HA1基因分析[A];新發(fā)傳染病研究熱點(diǎn)研討會論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜淑貞;玉米赤霉烯酮對斷奶仔豬的毒性初探及改性蒙脫石的脫毒效應(yīng)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 時景偉;麻疹疫苗減毒機(jī)制及疫苗接種后我國麻疹流行病學(xué)特點(diǎn)的研究[D];吉林大學(xué);2011年

3 楚鷹;中國HIV-1感染者中和抗體反應(yīng)以及靶位分析[D];南京大學(xué);2011年

4 李瑞芳;蛋白質(zhì)編碼序列對蛋白質(zhì)折疊速率的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2011年

5 茅凌翔;腸道病毒71型分子流行病學(xué)調(diào)查及miRNA抑制腸道病毒71型體外復(fù)制的研究[D];江蘇大學(xué);2011年

6 徐娟;腸道病毒EV71 VP1基因的優(yōu)化和免疫原性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

7 盧桂蘭;北京地區(qū)人偏肺病毒全基因組序列、血清流行率分析及B細(xì)胞表位研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

8 管瑩;與HSV-1 UL31相互作用的宿主蛋白TMEM140生物學(xué)功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 郭磊;HSV1 ICP22蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究及其與病毒蛋白VP16、ICP0對病毒基因轉(zhuǎn)錄的共調(diào)控作用分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

10 陳慧誠;腸道病毒71型滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）免疫后攻毒及未免疫攻毒恒河猴嬰猴丘腦組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄭毅;利用酵母雙雜交技術(shù)研究流感病毒NS2蛋白與宿主蛋白的相互作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 盧士強(qiáng);甲型H1N1流感病毒NS1蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)、抗體制備及在血清學(xué)檢測中的應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

3 張紹麗;河南省2008年手足口病病原體（EV71）分離株全基因組序列[D];鄭州大學(xué);2010年

4 于賀娟;腸道病毒71型熒光RT-PCR檢測方法的建立及評價[D];鄭州大學(xué);2010年

5 辛英豪;DHV-Ⅰ單克隆抗體的制備與膠體金試紙條的研制[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 殷堅;秦香顆粒對人輪狀病毒致感染乳鼠血清IFN-γ、IL-2的影響研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 雷紅娟;腸道病毒71型H6株在Vero細(xì)胞上的傳代適應(yīng)[D];河南師范大學(xué);2010年

8 費(fèi)永亮;新疆地區(qū)人群乙型肝炎病毒基因型的初步研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 岳鋒;豬瘟病毒感染靶細(xì)胞的配體表位研究[D];河南科技學(xué)院;2010年

10 郭延鋒;CSISV人工感染SPF雛雞和商品肉仔雞后免疫器官的細(xì)胞凋亡[D];河南科技學(xué)院;2010年

，

本文編號：1892192