本文選題：單純皰疹病毒Ⅰ + 質膜蛋白tetraspanin��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2008年博士論文

【摘要】：單純皰疹病毒工(HSV-1)是一種結構復雜的雙鏈DNA病毒,具有較強傳染性,在細胞內(nèi)的復制過程中與宿主細胞之間表現(xiàn)有多種相互作用。HSV-1與細胞的相互作用是研究HSV-1感染不同細胞后會形成不同的感染過程及結果的基礎。以這個角度來看,對于病毒蛋白及其細胞作用蛋白在病毒感染周期中的功能分析,在探索細胞對病毒感染產(chǎn)生相應反應的機理,和由此機理所導致的各種可能的生物學意義,以及由此確定的臨床治療或診斷方法等領域內(nèi)的應用都具有很大的意義。 HSV-1 VP26是核衣殼組成中最小的蛋白,其功能至今尚未闡明。本實驗的研究重點是分析在病毒感染周期中病毒核衣殼蛋白VP26的功能及尋找與其相互作用的細胞蛋白。首先構建了UL35-EGFP重組病毒,利用該重組病毒與野毒株的生長曲線的差異分析,發(fā)現(xiàn)重組病毒出現(xiàn)了出胞膜阻滯的現(xiàn)象,提示VP26的功能可能與病毒感染周期中的出質膜環(huán)節(jié)相關。隨后通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩查到VP26和細胞膜上的蛋白——CMTP-7有相互作用,免疫共沉淀和雙熒光細胞共定位分析驗證了二者在完整細胞中存在生理性相互作用。隨后采用siRNA技術和實時定量PCR方法進行了進一步的研究,在敲除CMTP-7蛋白的細胞內(nèi),病毒復制裝配未受影響,但出現(xiàn)病毒出胞阻滯的現(xiàn)象,檢測病毒滴度發(fā)現(xiàn)病毒生長量低于正常細胞內(nèi)的所得數(shù)量,運用透射電鏡也觀察到了在近細胞膜的胞質外圍處出現(xiàn)了堆積成團的病毒。而流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)在病毒出細胞時CMTP-7也隨之減少。這些結果表明CMTP-7的功能和HSV-1出質膜這一過程相關。HSV-1在CMTP-7蛋白敲除的細胞內(nèi)和UL35-EGFP重組病毒在正常細胞內(nèi)所表現(xiàn)出的特性極為相似。 以上結果強烈提示二者通過相互作用在完成同一項功能。即VP26具有與病毒包膜化和有效出胞膜的相關功能,并且是通過CMTP-7相互作用來完成這一對病毒感染周期至關重要的過程。而在熒光顯微鏡下還觀察到,CMTP-7可以隨病毒再次感染其它細胞。并且在新生病毒粒上檢測出了CMTP-7蛋白。這些結果似乎表明CMTP-7和VP26作用后,對于病毒的意義遠不止是體現(xiàn)在出胞釋放這一個過程中。 至此,我們據(jù)本實驗研究結果對VP26和CMTP-7的相互作用在HSV-1感染周期中所起的作用提出初步假設。核衣殼在細胞核內(nèi)裝配成熟后,經(jīng)過胞質運輸?shù)竭_質膜,VP26蛋白通過和CMTP-7的相互作用,觸發(fā)了HSV-1包膜化的進程,并且在完成HSV-1的包膜化的同時進行有效出胞的過程。CMTP-7也結合在病毒粒核衣殼外層被膜中并且跟隨病毒參與新一輪細胞感染。
[Abstract]:Herpes simplex virus (HSV-1) is a complex double-stranded DNA virus with strong infectivity. The interaction between HSV-1 and host cells in the process of intracellular replication. The interaction between HSV-1 and cells is the basis for the study of different infection processes and results of HSV-1 infection with different cells. From this point of view, the functional analysis of viral proteins and their cell-acting proteins in the viral infection cycle is used to explore the mechanism of cell response to virus infection and the possible biological implications of the mechanism. And the clinical treatment or diagnostic methods are of great significance. HSV-1 VP26 is the smallest protein in the nucleocapsid composition, and its function has not been elucidated. The focus of this study was to analyze the function of viral nucleocapsid protein (VP26) in the viral infection cycle and to find the cell proteins interacting with it. Firstly, the UL35-EGFP recombinant virus was constructed. By analyzing the difference between the growth curve of the recombinant virus and that of the wild strain, it was found that the recombinant virus appeared the phenomenon of cell membrane block, which suggested that the function of VP26 might be related to the plasma membrane in the virus infection cycle. Then the interaction between VP26 and CMTP-7 was detected by yeast two-hybrid system. The results of immunoprecipitation and bifluorescence cell co-localization showed that there was physiological interaction between VP26 and CMTP-7 in intact cells. SiRNA technique and real-time quantitative PCR were used to further study. In the cells knockout CMTP-7 protein, the replication and assembly of the virus was not affected, but the phenomenon of virus exocytosis was found. Detection of virus titer showed that the virus growth was lower than that of normal cells, and a cluster of viruses was observed near the cytoplasm of the cell membrane by transmission electron microscopy (TEM). Flow cytometry showed that CMTP-7 also decreased when the virus came out of the cell. These results suggest that the function of CMTP-7 is closely related to the process of HSV-1 exudation. HSV-1 exhibits very similar characteristics in CMTP-7 protein knockout cells and UL35-EGFP recombinant virus in normal cells. The above results strongly suggest that the two perform the same function by interacting with each other. That is to say, VP26 has the function of virus encapsulation and effective exfoliation, and it is a very important process of virus infection cycle through CMTP-7 interaction. Under fluorescence microscope, CMTP-7 could reinfect other cells with the virus. CMTP-7 protein was detected on the neovascularization virus. These results suggest that the effect of CMTP-7 and VP26 on the virus is much more than the process of cell release. So far, we hypothesized the role of VP26 and CMTP-7 interaction in HSV-1 infection cycle. After the nucleocapsid was assembled and matured in the nucleus, the VP26 protein was transported to the plasma membrane through the cytoplasmic transport, which triggered the process of HSV-1 encapsulation through the interaction with CMTP-7. CMTP-7 also binds to the outer membrane of the nucleocapsid of the virus and follows the virus to participate in the new round of cell infection.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R373

【共引文獻】

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