本文選題：AngⅡ + VSMCs　； 參考：《蘇州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 探討線粒體ATP敏感性鉀通道和NADPH氧化酶在Ang Ⅱ(ANGⅡ)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）自噬中的作用。 方法： 以VSMCs為研究對(duì)象，設(shè)立組別分別為 1.空白組； 2.Ang Ⅱ組； 3.ARB（AngiotensinⅡ type1receptor blocker,AngⅡI型受體抑制劑）+AngⅡ組； 4.Apocycin（NADPH抑制劑，香莢蘭乙酮）+Ang Ⅱ組； 5.5-HD（線粒體ATP敏感性鉀離子通道抑制劑）+Ang Ⅱ組； 6.3-MA(自噬抑制劑)+Ang Ⅱ組； 7.Rapamycin（自噬促進(jìn)劑）+Ang Ⅱ組； 采用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞存活率，，用western blot方法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62表達(dá)量的變化,用免疫熒光的方法檢測(cè)自噬小體數(shù)目的變化；用DHE染色法測(cè)定ROS含量變化，通過(guò)轉(zhuǎn)染敲除自噬基因ATG-5后，用westernblot方法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62表達(dá)量的變化。 結(jié)果： MTT結(jié)果顯示，相比空白組，加入Ang Ⅱ及其他藥物作用72h時(shí)對(duì)細(xì)胞存活率影響不大,表明這些藥物作用72h時(shí)對(duì)細(xì)胞的生存活力沒(méi)有造成顯著的影響。 Western blot結(jié)果顯示加入Ang Ⅱ促進(jìn)VSMCs的LC3-Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低，且呈現(xiàn)時(shí)間依賴性和濃度依賴性，同時(shí)ROS表達(dá)量增多，表明Ang Ⅱ促進(jìn)VSMCs自噬的發(fā)生。 自噬抑制劑3-MA對(duì)Ang Ⅱ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低起到抑制作用，自噬促進(jìn)劑Rrapamycin對(duì)Ang Ⅱ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低起到增強(qiáng)作用；敲除自噬基因ATG-5后，可消除Ang Ⅱ所致的LC-3Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低；進(jìn)一步驗(yàn)證了Ang Ⅱ能夠誘導(dǎo)VSMCs自噬的發(fā)生。 ARB對(duì)Ang Ⅱ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低起到抑制作用,表明自噬是由Ang Ⅱ通過(guò)ATI受體引起的。 Apocycin對(duì)Ang Ⅱ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低起抑制作用,表明Ang Ⅱ通過(guò)NADPH氧化酶引起自噬。 5-HD對(duì)Ang Ⅱ（10-7mol/l，24h）引起的LC-3Ⅱ、Beclin-1表達(dá)量增多和P62表達(dá)量降低起到抑制作用,表明線粒體ATP敏感性鉀通道介導(dǎo)Ang Ⅱ引起的VSMCs的自噬。同時(shí)免疫熒光的結(jié)果也與western blot結(jié)果一致。 結(jié)論： Ang Ⅱ可通過(guò)AT1受體介導(dǎo)引起胞內(nèi)ROS增多，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞自噬，機(jī)制涉及線粒體ATP敏感性鉀通道和NADPH氧化酶的參與。
[Abstract]:Objective: To investigate the role of mitochondrial ATP sensitive potassium channel and NADPH oxidase in Ang 鈪

本文編號(hào)：1871533