本文選題：SV大T抗原 + 慢病毒載體�。� 參考：《腫瘤基礎(chǔ)與臨床》2008年05期

【摘要】：目的構(gòu)建含有重組SV40大T抗原基因的慢病毒表達(dá)載體pLentiGFP-Tag,轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞Eca-9706并檢測SV40大T抗原基因在真核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。方法以PCR方法從含有SV40大T抗原基因的質(zhì)粒上擴(kuò)增出SV40大T抗原基因作為靶基因;將其連接至pGEM-TEasy載體上,并對靶基因進(jìn)行DNA測序確認(rèn);再將靶基因與慢病毒表達(dá)載體pLentiGFP重組構(gòu)建成為pLentiGFP-Tag;以脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞Eca-9706,觀察慢病毒表達(dá)載體所攜帶的GFP基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),使用RT-PCR檢測SV40大T抗原基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平。結(jié)果成功克隆SV40大T抗原基因,經(jīng)由DNA測序確認(rèn);成功篩選出含SV40大T抗原基因正插子的慢病毒表達(dá)載體pLentiGFP-Tag;轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞Eca-9706后48 h,觀察到綠色熒光的廣泛表達(dá)并檢測出宿主細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)的SV40大T抗原mRNA。結(jié)論成功構(gòu)建含SV40大T抗原基因的慢病毒表達(dá)載體pLentiGFP-Tag,并觀察到SV40大T抗原在真核細(xì)胞中的成功表達(dá)。
[Abstract]:Objective to construct a lentivirus expression vector pLentiGFP-Tagcontaining recombinant SV40 large T antigen gene, and to transfect Eca-9706 into eukaryotic cells and detect the expression of SV40 large T antigen gene in eukaryotic cells. Methods the large T antigen gene of SV40 was amplified from the plasmid containing large T antigen gene of SV40 by PCR and ligated to pGEM-TEasy vector, and the target gene was confirmed by DNA sequencing. The target gene and lentivirus expression vector pLentiGFP were recombined into pLentiGFP-Tag.Eca-9706 eukaryotic cells were transfected with liposome to observe the expression of GFP gene carried by lentivirus expression vector. The expression of large T antigen gene of SV40 was detected by RT-PCR. Results the large T antigen gene of SV40 was cloned successfully and confirmed by DNA sequencing. The lentivirus expression vector pLentiGFP-Tagcontaining the positive insertion of SV40 large T antigen gene was successfully screened, and the extensive expression of green fluorescence was observed at 48 h after transfection into eukaryotic cell Eca-9706, and the highly expressed SV40 large T antigen mRNA was detected in host cells. Conclusion the lentivirus expression vector pLentiGFP-Tagcontaining SV40 large T antigen gene was successfully constructed and the expression of SV40 large T antigen in eukaryotic cells was observed.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1864676