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  本文選題：SV大T抗原 + 慢病毒載體��； 參考：《腫瘤基礎與臨床》2008年05期

【摘要】：目的構建含有重組SV40大T抗原基因的慢病毒表達載體pLentiGFP-Tag,轉染真核細胞Eca-9706并檢測SV40大T抗原基因在真核細胞內(nèi)的表達。方法以PCR方法從含有SV40大T抗原基因的質粒上擴增出SV40大T抗原基因作為靶基因;將其連接至pGEM-TEasy載體上,并對靶基因進行DNA測序確認;再將靶基因與慢病毒表達載體pLentiGFP重組構建成為pLentiGFP-Tag;以脂質體介導轉染真核細胞Eca-9706,觀察慢病毒表達載體所攜帶的GFP基因在細胞內(nèi)的表達,使用RT-PCR檢測SV40大T抗原基因在細胞內(nèi)的表達水平。結果成功克隆SV40大T抗原基因,經(jīng)由DNA測序確認;成功篩選出含SV40大T抗原基因正插子的慢病毒表達載體pLentiGFP-Tag;轉染真核細胞Eca-9706后48 h,觀察到綠色熒光的廣泛表達并檢測出宿主細胞內(nèi)高效表達的SV40大T抗原mRNA。結論成功構建含SV40大T抗原基因的慢病毒表達載體pLentiGFP-Tag,并觀察到SV40大T抗原在真核細胞中的成功表達。
[Abstract]:Objective to construct a lentivirus expression vector pLentiGFP-Tagcontaining recombinant SV40 large T antigen gene, and to transfect Eca-9706 into eukaryotic cells and detect the expression of SV40 large T antigen gene in eukaryotic cells. Methods the large T antigen gene of SV40 was amplified from the plasmid containing large T antigen gene of SV40 by PCR and ligated to pGEM-TEasy vector, and the target gene was confirmed by DNA sequencing. The target gene and lentivirus expression vector pLentiGFP were recombined into pLentiGFP-Tag.Eca-9706 eukaryotic cells were transfected with liposome to observe the expression of GFP gene carried by lentivirus expression vector. The expression of large T antigen gene of SV40 was detected by RT-PCR. Results the large T antigen gene of SV40 was cloned successfully and confirmed by DNA sequencing. The lentivirus expression vector pLentiGFP-Tagcontaining the positive insertion of SV40 large T antigen gene was successfully screened, and the extensive expression of green fluorescence was observed at 48 h after transfection into eukaryotic cell Eca-9706, and the highly expressed SV40 large T antigen mRNA was detected in host cells. Conclusion the lentivirus expression vector pLentiGFP-Tagcontaining SV40 large T antigen gene was successfully constructed and the expression of SV40 large T antigen in eukaryotic cells was observed.
【作者單位】： 鄭州大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;鄭州大學基礎醫(yī)學院微生物學與免疫學教研室;
【分類號】：R392

【共引文獻】

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