本文選題：骨髓間充質干細胞 + 分化�。� 參考：《吉林大學》2008年碩士論文

【摘要】： 目前,關于肝臟組織損傷后,如何使肝細胞再生和肝功能恢復是人們一直非常關注的課題,也是臨床治療中遇到的難點。利用干細胞移植和干細胞工程肝細胞來治療肝組織損傷,促使肝細胞再生以及改善肝功能等日益受到人們重視。本研究主要采用具有多分化潛能的骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向肝細胞進行定向誘導分化,獲得肝樣細胞,為干細胞移植提供可靠的種子細胞來源;同時,通過細胞標記,研究移植后的細胞遷移及MRI活體示蹤,為MRI動態(tài)觀察建立一個良好的標記方法和技術平臺。 目的:用本實驗室建立的大鼠BMSCs培養(yǎng)方法,分離、培養(yǎng)和純化大鼠BMSCs,對BMSCs進行多分化潛能鑒定,檢測BMSCs表面抗原;體外誘導分化為肝樣細胞后進行免疫細胞化學和RT-PCR方法檢測,鑒定肝細胞特異性標志物;將標記的肝樣細胞經(jīng)門靜脈移植、肝內移植入CCl_4肝損傷大鼠肝臟,利用MR影像系統(tǒng)進行細胞移植后的動態(tài)觀察,探討細胞移植前后信號變化及變化規(guī)律,活體顯示標記肝樣細胞的特異性及敏感性,為細胞移植臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。 方法:采用全血培養(yǎng)法和密度梯度離心法,經(jīng)傳代和控制消化時間得到純度較高的BMSCs;傳代后用免疫化學法檢測其表面抗原;用成脂誘導和成骨誘導的方法鑒定多分化潛能,用損傷肝組織和血清作為誘導劑定向誘導分化BMSCs,利用免疫細胞化學和RT-PCR等方法對MSCs和誘導后肝樣細胞進行細胞特異性標志物的檢測;利用CCl_4肝損傷模型鼠,經(jīng)門靜脈、肝實質移植標記的肝樣細胞,采用MRI技術對大鼠肝臟進行活體掃描,然后進行統(tǒng)計學分析。 結果:利用本實驗室的方法獲得了高純度貼壁生長的BMSCs呈均勻分布的集落樣生長,呈梭形或紡錘形,細胞傳代穩(wěn)定,隨傳代次數(shù)增加純度提高。傳代培養(yǎng)第3代BMSCs經(jīng)免疫細胞化學檢測CD105呈陽性;傳代培養(yǎng)BMSCs誘導分化后,油紅O結合蘇木素染色結果顯示細胞核呈淺蘭色,胞漿內有橘紅色脂肪滴出現(xiàn),顯示為脂肪細胞;BMSCs誘導分化后,ALP染色顯示細胞內有致密顆粒形成,礦化結節(jié)染色結果顯示BMSCs經(jīng)誘導后有很好的成骨能力。誘導BMSCs向肝細胞分化實驗顯示:白蛋白呈陽性,糖原染色陽性,可表達肝臟特有的基因AFP、ALB。標記的肝樣細胞體外MRI成像顯示,在T1W,T2W序列均可見信號改變;標記的肝樣細胞移植入大鼠肝臟后,采用MRI技術對大鼠肝臟進行掃描:對照組在移植前肝臟均未見明顯的異常低信號區(qū);門靜脈組大鼠移植后24h內在肝右葉可見明顯信號改變;肝內注射組大鼠移植后24h內同樣出現(xiàn)信號改變。1W后MRI仍能檢測到信號改變。 結論: (1).利用本實驗室建立的方法,可獲得高純度貼壁生長的BMSCs。在體外可以實現(xiàn)大量擴增; (2).培養(yǎng)的BMSCs可表達表面抗原CD105,具有分化為脂肪細胞,成骨細胞的能力,證明BMSCs具有多分化潛能; (3).利用本實驗室建立的方法,可誘導BMSCs分化為肝樣細胞; (4).標記的肝樣細胞在體內、體外均可引起MRI信號的明顯改變,可進行較長時間的MRI動態(tài)觀察,有較好的特異性和靈敏度。
[Abstract]:At present , after liver tissue injury , how to regenerate liver cells and recover liver function is a problem that people have been very concerned about , and it is a difficult problem in clinical treatment . The research mainly adopts stem cell transplantation and stem cell engineering liver cells to induce differentiation of liver tissues , and to obtain liver - like cells , which can provide reliable source of seed cells for stem cell transplantation .


Objective : To isolate , culture and purify the bone marrow cells of rats by the method of culture and culture and to purify the bone marrow cells of the rats , and to detect the surface antigen of bone marrow cells . After the cells were transplanted into the liver , the specific markers of liver cells were identified . The changes of signal before and after the transplantation of the cells were investigated . The changes and the changes of the signal were observed before and after the transplantation of the cells . The specific and sensitivity of the cells were examined in vivo .


Methods : Using whole blood culture method and density gradient centrifugation method , the cells with high purity were obtained by means of immuno - chemical method .


Results : The results showed that the cells with high purity adherent growth had a uniform distribution of colony - like growth , spindle - shaped or spindle - shaped , and increased purity with the number of passages .


Conclusion :


( 1 ) By using the method established in this lab , the high - purity adherent growth can be obtained , and a large amount of amplification can be realized in vitro ;


( 2 ) The expressed surface antigen CD105 can be expressed by cultured bone marrow cells , which has the capability of differentiating into adipocytes and osteoblasts , and proves that the bone marrow cells have the multi - differentiation potential ;


( 3 ) By using the method established in this lab , the cells can be induced to differentiate into liver - like cells ;


( 4 ) In vivo and in vitro , the marked liver - like cells can cause obvious changes of MRI signal , and can be used for MRI dynamic observation for a long time , and has good specificity and sensitivity .

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 張本斯,陳紅,王松,鄧世山,王凡;大鼠骨髓間充質干細胞分離培養(yǎng)方法的實驗研究[J];四川解剖學雜志;2003年01期

2 丁為民,田嘉禾;核醫(yī)學顯像活體示蹤干細胞[J];同位素;2003年Z1期

3 胡耀鵬;馬根山;祁春梅;沈成興;陳忠;張曉黎;劉孝鈞;蘇亞民;李璇;居勝紅;孫軍輝;顧寧;張宇;;骨髓單個核細胞磁探針標記和自體移植后磁共振成像(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年20期

4 居勝紅,滕皋軍,毛曦,張愛鳳,張宇,馬明,顧寧;臍血間充質干細胞磁探針標記和MR成像研究[J];中華放射學雜志;2005年01期

5 滕皋軍;居勝紅;;開展干細胞標記和MR活體示蹤研究推進分子影像學發(fā)展[J];中華放射學雜志;2006年02期

6 居勝紅;滕皋軍;陸海華;張愛鳳;張宇;馬明;;大鼠間充質干細胞超順磁性氧化鐵標記和經(jīng)脾移植后的MR示蹤研究[J];中華放射學雜志;2006年02期

7 孫軍輝;滕皋軍;居勝紅;馬占龍;麥筱莉;張宇;馬明;;腎功能衰竭大鼠超順磁性氧化鐵標記骨髓間充質干細胞腎臟移植MR活體示蹤的研究[J];中華放射學雜志;2006年02期

8 趙運轉,魏來,韓梅,李凌松;胎肝來源間充質干細胞的分離、培養(yǎng)與多向分化[J];中華肝臟病雜志;2004年12期

9 周播江,鐘翠平,顧云娣,張新華,梁春敏,吳超群;肝再生大鼠血清誘導骨髓干細胞向肝細胞分化的實驗研究[J];中華肝臟病雜志;2004年12期

10 蔡云峰,閔軍,何勁松,魏菁,莫雋全,陳積圣;骨髓源性肝干細胞的確認及定向分化的實驗研究[J];中國普通外科雜志;2003年04期

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本文編號：1861428