本文選題：細(xì)粒棘球蚴 + 重組抗原EgP-29�。� 參考：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的利用已完成免疫學(xué)特性鑒定的細(xì)粒棘球蚴(Echinococcus granulosus, Eg)P-29重組蛋白免疫ICR小鼠后,用活的原頭蚴攻擊感染;動(dòng)態(tài)觀察免疫小鼠血清IgE、IgG及其亞類的變化規(guī)律;脾T細(xì)胞CD4+和CD8+亞群的變化;以及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ、IL-2、IL-4、TNF-α和IL-10的變化水平;觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的保護(hù)力;從而闡述其保護(hù)性免疫機(jī)制,為CE疫苗的開發(fā)利用提供依據(jù)。方法(1)制備抗原及定量:用已成功構(gòu)建的基因工程菌株EgP-29/pET-28a/BL21(DE3)plysS進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)、鑒定、純化、制備出重組抗原并定量;(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:選取雌性ICR小鼠隨機(jī)分為3組:實(shí)驗(yàn)組既抗原接種組、佐劑+PBS組和對(duì)照組即PBS組;(3)動(dòng)物免疫:實(shí)驗(yàn)組注射重組抗原+佐劑+PBS100μl,共三次,每次間隔兩周,后兩次將弗氏完全佐劑改為弗氏不完全佐劑;佐劑+PBS組采用如上注射方法,每次注射:PBS50μl+弗氏完全佐劑50μl,(后兩次亦改為弗氏不完全佐劑);PBS組則采用如上注射方法,每次注射:PBS100μl;(4)動(dòng)物攻擊感染:免疫后8周,各組均以2000個(gè)活的原頭蚴/每只小鼠攻擊感染;(5)脾細(xì)胞懸液的制備和血清的收集:小鼠接種疫苗后在0、2、4、6w及攻擊感染后在10w、18w、26w分別從眼球采血收集血清并分離脾細(xì)胞,每次每組5只;(6)通過(guò)ELISA及FCM:①觀察免疫后、攻擊感染后不同時(shí)間IgE、IgG及其亞類的變化規(guī)律;②用ConA刺激脾細(xì)胞培養(yǎng)后,檢測(cè)其上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4、TNF-α和IL-10的變化水平;③分離脾細(xì)胞后,應(yīng)用FCM檢測(cè)T細(xì)胞CD4+和CD8+亞群的百分比變化;(7)免疫保護(hù)力觀察:計(jì)算免疫保護(hù)力。結(jié)果(1)經(jīng)過(guò)酶切鑒定,純化的EgP-29重組蛋白在SDS-PAGE上分子量29KDa處見明顯表達(dá)條帶,抗原制備成功;(2)經(jīng)“SmartSpectTM3000”微量蛋白核酸分析定量重組蛋白EgP-29的濃度為8.3μg/μl ;(3)ICR小鼠接種原頭蚴26w后,切開腹腔發(fā)現(xiàn)數(shù)個(gè)大小不等的包囊,說(shuō)明棘球蚴模型制作成功;(4)實(shí)驗(yàn)組(rEgP-29)與對(duì)照組(PBS)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)比較:①rEgP-29組小鼠在抗原免疫后和攻擊感染后均產(chǎn)生高水平的IgG、IgG1、IgE、IgG3抗體(P0.01 ),提示IgG、IgG1、IgE、IgG3可能參與保護(hù)性的免疫應(yīng)答機(jī)制;②rEgP-29組小鼠在攻擊感染后不僅CD4+T細(xì)胞增加(P0.01 ),CD8+T細(xì)胞也有輕度增加(P0.05 ),提示rEgP-29的保護(hù)機(jī)制不僅有CD4+T細(xì)胞的參與,可能也有CD8+T細(xì)胞的作用;③rEgP-29組小鼠在攻擊感染后產(chǎn)生高水平的IL-2(P0.05 ),低水平的IL-4和IFN-γ(P0.05 ),提示該重組抗原以誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答為主的反應(yīng);(5)根據(jù)Dempster公式計(jì)算:rEgP-29抗原免疫ICR小鼠可獲得90%的免疫保護(hù)力,提示rEgP-29能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)力。結(jié)論rEgP-29能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)力,其保護(hù)性免疫機(jī)制主要通過(guò)誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答和Th1型免疫應(yīng)答,表明rEgP-29是具有發(fā)展?jié)摿Φ目拱x病候選疫苗。
[Abstract]:Objective To observe the changes of serum IgE , IgG and sub - groups of spleen cells , and to observe the changes of serum IgE , IL - 2 , IL - 4 , TNF - 偽 and IL - 10 in mice . The results showed that rP - 29 could induce high levels of IgG , IgG1 , IgE and IgG3 in mice after challenge infection ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1861278