本文選題：人 + 骨髓��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的 心肌細(xì)胞丟失、瘢痕形成及心室重構(gòu)是造成心臟功能惡化的主要因素,也是最終導(dǎo)致慢性充血性心力衰竭的主要病理基礎(chǔ)。細(xì)胞移植治療是治療心臟疾病的一種新策略。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)目前被認(rèn)為是細(xì)胞移植治療最理想的種子細(xì)胞。研究BMSCs體外定向分化為心肌樣細(xì)胞對細(xì)胞移植治療心臟疾病具有重要的理論和臨床意義。 本課題旨在通過血管緊張素Ⅱ化學(xué)誘導(dǎo)等方法體外誘導(dǎo)BMSCs定向分化,檢測BMSCs是否可分化為心肌樣細(xì)胞,觀察血管緊張素Ⅱ?qū)MSCs生長增殖的影響,對BMSCs分化的可能機(jī)制作一探討。本研究以人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為研究對象,實驗分為兩部分,第一、體外分離、純化、傳代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(HBMMSc)。第二、血管緊張素Ⅱ體外對HBMMSc向心肌樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化的研究。 方法 1 HBMMSc的分離,培養(yǎng)和傳代及鑒定 標(biāo)本來源于正常人的骨髓。采用淋巴細(xì)胞分離液行密度梯度離心法分離骨髓單個核細(xì)胞,再利用貼壁篩選法純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后,進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng),并對其進(jìn)行細(xì)胞生長和形態(tài)學(xué)的觀察、表面抗原的鑒定。 2 HBMMScs在血管緊張素Ⅱ的誘導(dǎo)下向心肌細(xì)胞的培養(yǎng)分化及心肌細(xì)胞的鑒定。 收集第8代hBMMSCs,分4組為實驗組3組和空白對照組。用0.1μmol/L AngⅡ誘導(dǎo)孵育hBMMSCs 24h。通過倒置顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察、半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法鑒定誘導(dǎo)細(xì)胞是否具備心肌樣細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特點及是否表達(dá)心肌特異性蛋白cTnI,GATA-4,Nkx2. 5。 結(jié)果 1 hBMMScs原代培養(yǎng)接種24h貼壁完成,2-3天細(xì)胞呈梭形,第9天形成多個克隆,第14-16天細(xì)胞融合成單層,梭形突起變長,排列有明顯方向性,細(xì)胞排列成漩渦狀。傳代細(xì)胞24h內(nèi)完全貼壁,伸展成梭形,開始迅速增殖,7天即鋪滿培養(yǎng)瓶底,傳代細(xì)胞保持原代細(xì)胞的形態(tài)特征。隨代數(shù)增加,細(xì)胞得到純化,梭形細(xì)胞達(dá)95%以上。連續(xù)傳代至P8,細(xì)胞由梭形變?yōu)槠教�、寬�?分裂相減少,細(xì)胞質(zhì)疏松,可見空泡。傳至P10,部分細(xì)胞變成圓形,折光增強(qiáng),脫壁死亡。隨著傳代次數(shù)的增加,克隆形成率逐漸下降,10代后無明顯克隆出現(xiàn)。流式細(xì)胞測定分離提純后的hBMMScs表達(dá)CD29和CD44,不表達(dá)CD34和CD45。2 AngⅡ誘導(dǎo)的細(xì)胞第8-l0d即呈棒狀,第18-21d細(xì)胞為長桿狀,走向便趨一致。電泳檢測證實AngⅡ誘導(dǎo)的細(xì)胞第2、3、4、5周已經(jīng)表達(dá)cTnI,NkKX2.5,GATA-4,并且隨時間推移,蛋白表達(dá)增強(qiáng)�？瞻讓φ战MhBMMSCs無形態(tài)變化,不表達(dá)心肌特異蛋白。 結(jié)論 1利用淋巴細(xì)胞液進(jìn)行密度梯度離心法和貼壁篩選法,可分離純化hBMMSCs,細(xì)胞的均一性高,是一種簡單,經(jīng)濟(jì)有效的分離提純hBMMSCs方法。并且擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)量足夠,遺傳背景穩(wěn)定,可滿足組織工成要求。體外分離、培養(yǎng)hBMMSCs具有很好的成功率及成活率。 2 AngⅡ在體外可誘導(dǎo)第8代hBMMSCs分化為心肌樣細(xì)胞。
[Abstract]:Purpose Cardiac myocyte loss, scar formation and ventricular remodeling are the main factors leading to the deterioration of cardiac function and the main pathological basis of chronic congestive heart failure. Cell transplantation is a new strategy for the treatment of heart disease. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are currently considered to be the most ideal seed cells for cell transplantation. It is of great theoretical and clinical significance to study the directional differentiation of BMSCs into cardiomyoid cells in vitro for the treatment of heart disease by cell transplantation. The aim of this study was to induce the directional differentiation of BMSCs in vitro by chemical induction of angiotensin 鈪，

本文編號：1830960