本文選題：葉酸 + 神經(jīng)干細(xì)胞�。� 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的 研究葉酸對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)增殖、分化、凋亡作用的影響及加入U(xiǎn)0126作用下葉酸對(duì)NSCs增殖、分化作用的影響,并探討其機(jī)制。1.建立體外神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)模型。2.通過(guò)鏡下初步觀察、MTT法檢測(cè)葉酸對(duì)NSCs增殖的影響。3.通過(guò)共聚焦激光掃描熒光雙重染色,計(jì)數(shù)雙陽(yáng)性細(xì)胞比例檢測(cè)NSCs分化情況。4.通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)葉酸對(duì)NSCs凋亡率影響。 方法 1.NSCs原代培養(yǎng)方法建立:通過(guò)機(jī)械吹打法獲得胚胎鼠、新生鼠大腦皮質(zhì)NSCs,利用含有bFGF和EGF因子的無(wú)血清培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞,獲得NSCs。 2.試驗(yàn)分組:選用孕鼠、新生鼠大腦皮質(zhì)NSCs。分為四組:①正常對(duì)照組(Control組);②葉酸低劑量組(Folate-L組);③葉酸高劑量組(Folate-H組);④葉酸缺乏組(MTX組)。U0126作用下,分組為:①正常對(duì)照組(Control組);②U0126組(U0126);③U0126+低劑量葉酸組(U0126+low folic acid,U0+LFA);④U0126+高劑量葉酸組(U0126+high folic acid,U0+HFA)。首先收集應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的增殖6 d的部分細(xì)胞,然后將剩余的NSCs細(xì)胞加血清使之分化,繼續(xù)培養(yǎng)6 d,收集分化的神經(jīng)細(xì)胞。 3.葉酸對(duì)NSCs增殖的研究:倒置顯微鏡下初步觀察葉酸對(duì)NSCs增殖影響,MTT法觀察葉酸對(duì)NSCs增殖的影響并繪制生長(zhǎng)曲線。 4.葉酸對(duì)NSCs分化的研究:倒置顯微鏡下初步觀察葉酸對(duì)NSCs分化影響,共聚焦激光掃描熒光雙重染色觀察葉酸對(duì)NSCs分化為神經(jīng)元和星型膠質(zhì)細(xì)胞比例的影響。 5.葉酸對(duì)胚胎鼠NSCs凋亡的影響:流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果 1.通過(guò)機(jī)械吹打法、含bFGF、EGF的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的NSCs表達(dá)Nestin抗原,BrdU標(biāo)記顯示有增殖能力,能分化為表達(dá)β-tubulin-Ⅲ的神經(jīng)元和GFAP的星型膠質(zhì)細(xì)胞,證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為NSCs。 2.葉酸對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎大鼠和新生鼠NSCs增殖作用的研究:MTT結(jié)果顯示:4μg/ml、40μg/ml濃度的葉酸均促進(jìn)NSCs增殖,40μg/ml作用明顯,MTX抑制胚胎大鼠和新生鼠NSCs的增殖;U0126作用下,對(duì)照組U0126組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),U0+LFA和U0+HFA與U0126比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3.葉酸對(duì)體外培養(yǎng)的胚胎大鼠和新生鼠NSCs分化作用的共聚焦激光掃描熒光雙重染色研究結(jié)果: ①葉酸對(duì)胚胎鼠NSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞分化的比例:Folate-H組與Control組比較,Folate-H組與Folate-L組比較,Folate-H組與MTX組比較,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。葉酸對(duì)新生鼠NSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞分化的比例:Folate-H組與Control組比較,MTX組與Folate-L組比較,MTX組與Folate-H組比較,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 ②U0126作用下,葉酸對(duì)胚胎鼠NSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞分化的比例:Control組與U0126組比較,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。葉酸對(duì)新生鼠NSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞分化的比例:Control組與U0126組比較,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其余各組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 ③葉酸對(duì)胚胎鼠NSCs向神經(jīng)元分化的比例:各組之間比較,差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。葉酸對(duì)新生鼠NSCs向神經(jīng)元分化的比例:各組之間比較,差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示胚胎鼠NSCs凋亡率:增值期,Folate-L和Folate-H與Control組比較,兩組凋亡率均低于Control組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),Folate-L和Folate-H與MTX組比較,兩組凋亡率均低于MTX組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。分化期,Control組與Folate-L組、Folate-H組和MTX組三組之間比較,Control組凋亡率高于Folate-L組、Folate-H組凋亡率,而低于MTX組凋亡率,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),Folate-L和Folate-H與MTX組比較,兩組凋亡率均低于MTX組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論 1.本試驗(yàn)成功的分離了胚胎鼠及新生鼠大腦NSCs,胚胎鼠和新生鼠均具有神經(jīng)干細(xì)胞的基本特征:表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白Nestin;具有分裂增殖能力;可以分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。 2.葉酸促進(jìn)體外培養(yǎng)的孕14-16 d胚胎大鼠和24 h內(nèi)新生鼠NSCs增殖,加入U(xiǎn)0126作用下,U0126抑制葉酸誘導(dǎo)NSCs增殖的作用,提示葉酸可能通過(guò)MAPK通路起到促進(jìn)NSCs增殖的作用。 3.葉酸促進(jìn)體外培養(yǎng)的孕14-16 d胚胎大鼠和24 h內(nèi)新生鼠NSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞方向分化,而向神經(jīng)元方向分化作用不明顯。葉酸可能通過(guò)MAPK信號(hào)通路促進(jìn)體外培養(yǎng)的E14-16 d胚胎大鼠和24 h內(nèi)新生鼠NSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞方向分化。 4.葉酸能夠抑制胚胎鼠增值期NSCs的凋亡率和分化期神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率。
[Abstract]:Purpose


The effects of folic acid on the proliferation , differentiation and apoptosis of neural stem cells and the effects of folic acid on the proliferation and differentiation of neural stem cells were investigated .


method


1 . The primary culture method was established : the embryonic rat and neonatal rat cerebral cortex were obtained by mechanical blow - beating method , and the cells were cultured with serum - free culture medium containing bFGF and EGF factors to obtain the neural stem cells .


2 . Test group : pregnant rats and neonatal rats were divided into four groups : 鈶，

本文編號(hào)：1813252