本文選題：格林—巴利綜合征 + 空腸彎曲菌��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的:空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni, C. jejuni)是世界范圍內(nèi)導(dǎo)致細菌性腹瀉的主要病原菌之一,部分格林—巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)是發(fā)生于C. jejuni感染后的周圍神經(jīng)疾病。根據(jù)不同的神經(jīng)生理學(xué)和病理學(xué)特點,GBS被分為急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(AIDP)、急性運動軸索性神經(jīng)病(AMAN)、和Miller-Fisher綜合征(MFS)等幾種亞型。自2000年C.jejuni NCTC11168菌株的全基因序列完成以來,現(xiàn)已有5株C.jejuni的全基因組序列發(fā)表在GeneBank中。現(xiàn)有大量研究表明空彎表面的脂寡糖(LOS)成分和周圍神經(jīng)的神經(jīng)節(jié)苷脂之間的分子模擬導(dǎo)致免疫損傷是空彎感染后GBS的主要發(fā)病機制。galE及Cj1136、Cj1138、Cj1139基因編碼的多種蛋白參與了細菌表面LOS的生物合成。 本研究從基因突變的角度出發(fā),選擇華北地區(qū)具有致GBS特性的三株空腸彎曲菌菌株,對其LOS合成相關(guān)的galE及Cj1136、Cj1138、Cj1139基因序列進行測定,以了解華北地區(qū)致軸索型GBS的空彎菌株核酸序列特征,并同GenBank中的空彎菌株相應(yīng)序列進行對比分析,尋找基因突變和變異與致病性的關(guān)系,及菌株的基因地域特點并分析其遺傳進化關(guān)系。 方法:細菌培養(yǎng)選取分離自華北地區(qū)AMAN型GBS病人的C.jejuni菌株。血清分型為pennerO:19型,pennerO:2型,pennerO:5型。取C.jejuni專用CM0739培養(yǎng)基(Oxid公司英國),按說明書制備固體培養(yǎng)基。將菌株接種于CM0739固體培養(yǎng)基,置于厭氧培養(yǎng)箱中,在37℃微需氧條件下培養(yǎng),傳代48-72 h收菌。 基因DNA組提取應(yīng)用promega公司的Wizard基因提取試劑盒,按照試劑盒說明提取C.jejuni基因組DNA。 序列測定將細菌基因組DNA送至Analytical Genetics Technology Centre, University Health Network,Toronto Princess Margaret Hospital及深圳華大基因研究院測序。 序列對比和進化分析以NCTC11168為對照尋找存在的突變并應(yīng)用Mega version 4軟件,將3株C.jejuni的galE、Cj1136、Cj1138、Cj1139基因序列同BLAST獲得序列的的相應(yīng)位點及進行多序列對比,尋找變異堿基,計算序列間的遺傳距離并以Neighbor -Joining(NJ)法構(gòu)建進化樹。 結(jié)果:三株C. jejuni菌株的galE基因由987個堿基構(gòu)成;Cj1136基因由1173個堿基構(gòu)成;Cj1138基因由1170個堿基構(gòu)成;Cj1139基因由912個堿基構(gòu)成,與NCTC11168的galE及Cj1136、Cj1138、Cj1139基因序列相比,此3株致GBS C. jejuni中g(shù)alE基因核苷酸序列有4個相同堿基突變并導(dǎo)致了4個對應(yīng)的相同氨基酸突變。遺傳距離計算,qiaoyuntao株、zhanxing株及l(fā)ulei株的galE基因序列分別與CF93-6、CF93-6及HB93-13株的相似程度最高,遺傳距離分別為0.1%、0.2%,0.6%。zhanxing株與qiaoyuntao株距離為1.5%,zhanxing株與lulei株距離為1.6%,qiaoyuntao株與lulei株距離為0.5%。此3株致GBS C. jejuni中Cj1138存在2個相同的堿基突變并導(dǎo)致了2個對應(yīng)的相同氨基酸突變。遺傳距離計算,3株致GBS C. jejuni的Cj1138基因之間最大遺傳距離為2.1%。 結(jié)論:與NCTC11168相比GBS相關(guān)C. jejuni中g(shù)alE及Cj1138基因序列存在相同堿基突變,這些堿基突變可能與C. jejuni致GBS能力的改變相關(guān)。該3株致GBS C. jejuni的galE、Cj1136、Cj1138、Cj1139基因遺傳距離較小,反映河北地區(qū)致GBS的C. jejuni在進化上存在聚類現(xiàn)象,具有一定的區(qū)域特征。
[Abstract]:Objective: Campylobacter jejuni (C. jejuni) is one of the major pathogenic bacteria causing bacterial diarrhea worldwide, and partial Green Barre syndrome (Guillain-Barre syndrome, GBS) is a peripheral nerve disease occurring after C. jejuni infection. According to different neurophysiological and pathological characteristics, GBS is divided into acute disease. Inflammatory demyelinating polyneuropathy (AIDP), acute motor axonal neuropathy (AMAN), and Miller-Fisher syndrome (MFS), and other subtypes of Miller-Fisher syndrome (MFS). Since the completion of the whole gene sequence of C.jejuni NCTC11168 in 2000, a total of 5 C.jejuni genome sequences have been published in GeneBank. Molecular simulation between oligosaccharide (LOS) components and gangliosides of peripheral nerve leads to immune damage as the main pathogenesis of GBS after empty bending infection,.GalE and Cj1136, and a variety of proteins encoded by Cj1138 and Cj1139 genes participate in the biosynthesis of the bacterial surface LOS.
In this study, three strains of Campylobacter jejuni with GBS characteristics in North China were selected from the angle of gene mutation to determine the sequence of galE, Cj1136, Cj1138 and Cj1139 genes related to its LOS synthesis, in order to understand the sequence characteristics of the nucleic acid of the axonal GBS in North China, and to sequence with the empty bending strain in GenBank. Comparative analysis was conducted to find out the relationship between gene mutation and mutation and pathogenicity, as well as the regional characteristics of the strains and analyze their genetic evolution relationship.
Methods: bacterial culture was used to select C.jejuni strains isolated from AMAN type GBS patients in North China. The serotypes were classified into pennerO:19, pennerO:2, pennerO:5 type, and C.jejuni special CM0739 medium (Oxid UK). The solid medium was prepared according to the instructions. The strains were inoculated to CM0739 solid medium and placed in the anaerobic incubator, at 37 degrees centigrade. Under the oxygen condition, the bacteria were collected at 48-72 h.
Gene DNA group was extracted from Promega gene Wizard extraction kit, and C.jejuni genomic DNA. was extracted according to the kit instructions.
Sequencing of bacterial genome DNA was sent to Analytical Genetics Technology Centre, University Health Network, Toronto Princess Margaret Hospital and the Shenzhen Huada gene Institute for sequencing.
Sequence contrast and evolutionary analysis search for existing mutations with NCTC11168 as control and use Mega version 4 software to compare the sequences of galE, Cj1136, Cj1138, Cj1139 gene of 3 strains of C.jejuni with BLAST sequence and perform multiple sequence comparison, find variant bases, calculate the genetic distance between sequences, and construct a Neighbor -Joining (NJ) method. Build a tree of evolution.
Results: the galE gene of three strains of C. jejuni was composed of 987 bases, and the Cj1136 gene was composed of 1173 bases, and the Cj1138 gene was composed of 1170 bases, and the Cj1139 gene was composed of 912 bases. The nucleotide sequences of the 3 strains of galE and Cj1136, Cj1138 and Cj1139 were 4 of the same base sequences. The mutation resulted in 4 corresponding amino acid mutations. The genetic distance was calculated. The galE gene sequences of qiaoyuntao, Zhanxing and Lulei strains were similar to CF93-6, CF93-6 and HB93-13, respectively, with the genetic distance of 0.1%, 0.2%, 0.6%.zhanxing and qiaoyuntao 1.5%, Zhanxing and Lulei 1.6%, Qi, and Qi. The distance between the aoyuntao strain and the Lulei strain was 0.5%. of the 3 strains of GBS C. jejuni and Cj1138 existed 2 same base mutations and resulted in 2 corresponding amino acid mutations. The genetic distance was calculated, and the maximum genetic distance between the 3 GBS C. jejuni Cj1138 genes was 2.1%..
Conclusion: there is the same base mutation in the galE and Cj1138 gene sequences in GBS related C. jejuni compared with NCTC11168. These base mutations may be related to the change of GBS ability caused by C. jejuni. The 3 strains of GBS C. jejuni have smaller genetic distance. The image has certain regional characteristics.

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R378

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本文編號：1805368