本文選題：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + 抑制消減雜交��； 參考：《汕頭大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有很強(qiáng)的自我更新能力,并具有很高的可塑性,在組織工程及臨床細(xì)胞治療等方面具有廣闊的應(yīng)用前景,所以間充質(zhì)干細(xì)胞已成為干細(xì)胞研究的熱點(diǎn),如何在體外培養(yǎng)過程中維持MSCs未分化狀態(tài)已成為其中的核心問題之一。而到目前為止對(duì)調(diào)節(jié)MSCs生長(zhǎng)和未分化狀態(tài)的分子機(jī)理方面的研究甚少。因此為了進(jìn)一步了解維持MSCs未分化狀態(tài)的機(jī)制,本論文采用自行建立培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)克隆,應(yīng)用抑制消減雜交(suppression subtractive hybridization, SSH)結(jié)合半定量RT-PCR技術(shù)篩選和鑒定hBM-MSCs早期和晚期間差異表達(dá)的基因。本研究首先分離培養(yǎng)hBM-MSCs,再分別選取傳代培養(yǎng)至第五代和第二十代的細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)方(tester)和驅(qū)動(dòng)方(driver),進(jìn)行抑制消減雜交,構(gòu)建cDNA消減雜交文庫(kù)。然后將消減雜交后的PCR產(chǎn)物克隆到pGEM-T easy載體中,隨后挑取陽性克隆進(jìn)行測(cè)序,并與GenBank人基因庫(kù)中已公布的核酸序列進(jìn)行同源性比較分析。結(jié)果表明挑取的117個(gè)克隆分別代表21個(gè)已知的人基因,同源性都達(dá)到90%以上,這些基因分別具有不同的生物學(xué)功能。為進(jìn)一步確定消減雜交的結(jié)果,進(jìn)行半定量RT-PCR分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)21個(gè)基因中有6個(gè)基因在早期hBM-MSCs中的表達(dá)量都是晚期中表達(dá)量的2倍以上,它們分別是rab23,ddx21 ,tnfaip3 ,nomo2 ,pabpc3及cnn3,這些基因可能對(duì)維持hBM-MSCs的未分化狀態(tài)和調(diào)節(jié)早期hBM-MSCs的生長(zhǎng)具有重要作用。本研究將為這些基因的進(jìn)一步功能研究以及闡明維持hBM-MSCs未分化狀態(tài)的機(jī)制打下基礎(chǔ),而且有助于改變和控制hBM-MSCs的生長(zhǎng)和分化的研究,進(jìn)一步推動(dòng)hBM-MSCs在組織工程上的應(yīng)用。
[Abstract]:Mesenchymal stem cells (MSCs) have strong self-renewal ability and high plasticity, and have broad application prospects in tissue engineering and clinical cell therapy, so mesenchymal stem cells have become a hot spot in stem cell research. How to maintain the undifferentiated state of MSCs in vitro has become one of the core problems. So far, little has been done on the molecular mechanism of regulating the growth and undifferentiated state of MSCs. Therefore, in order to further understand the mechanism of maintaining the undifferentiated state of MSCs, human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs) clones were isolated from human bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). Suppression subtractive hybridization (SSH) combined with semi-quantitative RT-PCR technique was used to screen and identify differentially expressed genes between early and late hBM-MSCs by suppression subtractive hybridization (SSH). In this study, hBM-MSCs were isolated and cultured, and then the subtractive hybridization (cDNA) library was constructed by subtractive hybridization of cells from the fifth generation and the 20th generation. Then the subtractive PCR products were cloned into the pGEM-T easy vector, then the positive clones were sequenced and compared with the nucleic acid sequences published in the GenBank human gene bank. The results showed that 117 clones represented 21 known human genes with more than 90% homology, and these genes had different biological functions. In order to further determine the results of subtractive hybridization, semi-quantitative RT-PCR analysis showed that 6 of 21 genes expressed more than twice as much in early hBM-MSCs as in late stage. These genes are rab23ddx21 tnfaip3 / nfaip2 / pabpc3 and cnn3 respectively. These genes may play an important role in maintaining the undifferentiated state of hBM-MSCs and regulating the growth of early hBM-MSCs. This study will lay a foundation for the further study of the function of these genes and clarify the mechanism of maintaining the undifferentiated state of hBM-MSCs. It will also be helpful to change and control the growth and differentiation of hBM-MSCs and further promote the application of hBM-MSCs in tissue engineering.
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329;R346

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本文編號(hào)：1800676