本文選題：人骨髓間充質干細胞 + 抑制消減雜交　； 參考：《汕頭大學》2008年碩士論文

【摘要】：間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有很強的自我更新能力,并具有很高的可塑性,在組織工程及臨床細胞治療等方面具有廣闊的應用前景,所以間充質干細胞已成為干細胞研究的熱點,如何在體外培養(yǎng)過程中維持MSCs未分化狀態(tài)已成為其中的核心問題之一。而到目前為止對調節(jié)MSCs生長和未分化狀態(tài)的分子機理方面的研究甚少。因此為了進一步了解維持MSCs未分化狀態(tài)的機制,本論文采用自行建立培養(yǎng)的人骨髓間充質干細胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)克隆,應用抑制消減雜交(suppression subtractive hybridization, SSH)結合半定量RT-PCR技術篩選和鑒定hBM-MSCs早期和晚期間差異表達的基因。本研究首先分離培養(yǎng)hBM-MSCs,再分別選取傳代培養(yǎng)至第五代和第二十代的細胞作為實驗方(tester)和驅動方(driver),進行抑制消減雜交,構建cDNA消減雜交文庫。然后將消減雜交后的PCR產物克隆到pGEM-T easy載體中,隨后挑取陽性克隆進行測序,并與GenBank人基因庫中已公布的核酸序列進行同源性比較分析。結果表明挑取的117個克隆分別代表21個已知的人基因,同源性都達到90%以上,這些基因分別具有不同的生物學功能。為進一步確定消減雜交的結果,進行半定量RT-PCR分析,結果發(fā)現21個基因中有6個基因在早期hBM-MSCs中的表達量都是晚期中表達量的2倍以上,它們分別是rab23,ddx21 ,tnfaip3 ,nomo2 ,pabpc3及cnn3,這些基因可能對維持hBM-MSCs的未分化狀態(tài)和調節(jié)早期hBM-MSCs的生長具有重要作用。本研究將為這些基因的進一步功能研究以及闡明維持hBM-MSCs未分化狀態(tài)的機制打下基礎,而且有助于改變和控制hBM-MSCs的生長和分化的研究,進一步推動hBM-MSCs在組織工程上的應用。
[Abstract]:Mesenchymal stem cells (MSCs) have strong self-renewal ability and high plasticity, and have broad application prospects in tissue engineering and clinical cell therapy, so mesenchymal stem cells have become a hot spot in stem cell research. How to maintain the undifferentiated state of MSCs in vitro has become one of the core problems. So far, little has been done on the molecular mechanism of regulating the growth and undifferentiated state of MSCs. Therefore, in order to further understand the mechanism of maintaining the undifferentiated state of MSCs, human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs) clones were isolated from human bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). Suppression subtractive hybridization (SSH) combined with semi-quantitative RT-PCR technique was used to screen and identify differentially expressed genes between early and late hBM-MSCs by suppression subtractive hybridization (SSH). In this study, hBM-MSCs were isolated and cultured, and then the subtractive hybridization (cDNA) library was constructed by subtractive hybridization of cells from the fifth generation and the 20th generation. Then the subtractive PCR products were cloned into the pGEM-T easy vector, then the positive clones were sequenced and compared with the nucleic acid sequences published in the GenBank human gene bank. The results showed that 117 clones represented 21 known human genes with more than 90% homology, and these genes had different biological functions. In order to further determine the results of subtractive hybridization, semi-quantitative RT-PCR analysis showed that 6 of 21 genes expressed more than twice as much in early hBM-MSCs as in late stage. These genes are rab23ddx21 tnfaip3 / nfaip2 / pabpc3 and cnn3 respectively. These genes may play an important role in maintaining the undifferentiated state of hBM-MSCs and regulating the growth of early hBM-MSCs. This study will lay a foundation for the further study of the function of these genes and clarify the mechanism of maintaining the undifferentiated state of hBM-MSCs. It will also be helpful to change and control the growth and differentiation of hBM-MSCs and further promote the application of hBM-MSCs in tissue engineering.
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R329;R346

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