本文選題：白假絲酵母菌 + 耐藥性　； 參考：《蘭州大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 白假絲酵母菌是一種最常見的條件致病性真菌,由于抗真菌藥物的廣泛應(yīng)用,導(dǎo)致臨床耐藥菌株增加,關(guān)于白假絲酵母菌的耐藥機(jī)制仍不完全清楚�？骨韬粑且环N不受氰化物抑制的呼吸,普遍存在于許多植物和一些真菌、海藻中,在逆境脅迫下,植物的抗氰呼吸會增強(qiáng)。抗真菌藥物作為白假絲酵母菌的一個逆境脅迫,是否會引起抗氰呼吸增強(qiáng),目前國內(nèi)外報道甚少。因此本實驗通過選用蘭州市區(qū)不同菌株的白假絲酵母菌測定其耐藥情況、RAPD分型及抗氰呼吸,探討白假絲酵母菌耐藥情況及其與抗氰呼吸的相關(guān)性,為揭示白假絲酵母菌的耐藥機(jī)制提供實驗依據(jù),對臨床的治療、診斷以及新藥研制有一定的啟示作用。 從臨床收集的37株白假絲酵母菌經(jīng)過分離和鑒定證實為白假絲酵母菌。①用真菌藥敏測定試劑盒測定37株白假絲酵母菌的耐藥性,通過觀察測定板上每孔顏色的變化判斷結(jié)果；②隨機(jī)引物PCR (RAPD-PCR)擴(kuò)增20株白假絲酵母菌的DNA,GIS2010凝膠圖像處理系統(tǒng)記錄,分析RAPD帶型與耐藥性的相關(guān)性；③從中選出5株耐藥菌株和5株敏感菌株,運(yùn)用Clark型氧電極在30℃下測定抗氰呼吸；④用分光光度計測定氰化鉀濃度為0、0.5mM、1.0 mM、2.0mM時對白假絲酵母菌生長的影響。 實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,耐藥組和敏感組菌株抗氰呼吸間的顯著性差異采用了t檢驗, P0.05被認(rèn)為有顯著性差異。實驗結(jié)果如下： 1.白假絲酵母菌藥敏檢測結(jié)果 蘭州市區(qū)白假絲酵母菌對益康唑的耐藥率最高,達(dá)54.1%,對伊曲康唑的耐藥率較低,為5.4%,對咪康唑和氟康唑的耐藥率均為2.7%,其它3種藥物無耐藥,對3種抗真菌藥物同時耐藥的耐藥率為5.4%。 2. RAPD-PCR 2種引物KIT A3和KIT A9對20株抗真菌藥物耐藥性不同的白假絲酵母菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得的RAPD帶型穩(wěn)定性好。引物KIT A3對20株白假絲酵母菌擴(kuò)增出的RAPD帶型共有5種,引物KIT A9擴(kuò)增出的RAPD帶型共有8種。耐藥菌株和敏感菌株均顯示出基因型的多態(tài)性,耐藥性不同的白假絲酵母菌之間RAPD帶型未見差異,說明白假絲酵母菌的耐藥性與基因型之間無相關(guān)性。 3.白假絲酵母菌的抗氰呼吸速率 耐藥白假絲酵母菌的抗氰呼吸速率均值為17.56±6.75nmol／min/OD620.,敏感白假絲酵母菌的抗氰呼吸速率均值為7.99±5.80nmol／min/O620,耐藥白假絲酵母菌的抗氰呼吸速率明顯升高；且耐藥菌株抗氰呼吸速率占總呼吸的比例明顯高于敏感菌株(P0.05)；具有統(tǒng)計學(xué)意義。 4.氰化鉀對白假絲酵母菌的生長和耐藥性的影響 加入低濃度和中濃度氰化鉀時,對白假絲酵母菌的生長影響不大,與不加氰化鉀時相比較生長稍緩慢,對數(shù)期和平臺期生長高峰略低；加入高濃度氰化鉀時明顯妨礙了白假絲酵母菌的生長,但菌的生長沒有完全停滯,只是對數(shù)生長期延遲,生長高峰降低。1mM氰化鉀存在時,耐藥菌株和敏感菌株的耐藥性均有增加,耐藥變化率分別為60%和80%,但耐藥組和敏感組耐藥性的變化無統(tǒng)計學(xué)差異。 實驗結(jié)果表明：蘭州市區(qū)分離的37株白假絲酵母菌,對益康唑耐藥率最高,達(dá)54.1%,為蘭州地區(qū)預(yù)防和控制耐藥提供初步依據(jù)。白假絲酵母菌的DNA多態(tài)性較豐富,基因分型明確,且證實耐藥性與RAPD帶型之間沒有相關(guān)性,說明耐藥性的產(chǎn)生可能并非遺傳所致。白假絲酵母菌耐藥菌株的抗氰呼吸高于敏感菌株,且抗氰呼吸的誘導(dǎo)能夠改變白假絲酵母菌的耐藥性,說明白假絲酵母菌的耐藥與抗氰呼吸途徑相關(guān),抗氰呼吸可能是白假絲酵母菌耐藥的另一個新的機(jī)制。
[Abstract]:Candida albicans is one of the most common conditions for pathogenic fungi . Because of the wide application of antifungal drugs , the mechanism of drug resistance of Candida albicans is not completely clear .



37 strains of Candida albicans were isolated and identified as Candida albicans .
( 2 ) RAPD - PCR was used to amplify the DNA of 20 strains of Candida albicans , and the correlation between RAPD band type and drug resistance was analyzed .
( 3 ) 5 strains of resistant strains and 5 susceptible strains were selected from them , and the cyanide - type oxygen electrode was used to measure the cyanide - resistant respiration at 30 鈩，

本文編號：1791036