發(fā)布時間：2018-04-16 08:00

  本文選題：TGF-β1 + BMSCs�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景：骨髓間充質(zhì)干細胞具有多向分化潛能，可分化為皮膚細胞、成骨細胞、軟骨細胞、成肌細胞[1-2]，干細胞通過分化為血管平滑肌細胞，參與周圍血管的新生修復(fù)與重建[3]，但是干細胞的分化受多種因素調(diào)控，如生長因子、細胞外基質(zhì)以及血管外應(yīng)力環(huán)境，研究發(fā)現(xiàn)生長因子PDGF(Platelet Derived Growth Factor)和bFGF(basic FibroblastGrowth Factor)等均可誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化為血管平滑肌細胞[4]，在諸多的生物化學(xué)因子中，TGF-β1（transforming growth factor-β1）廣泛調(diào)節(jié)細胞生長，分化，遷移等，通過依賴性和非依賴性Smad途徑調(diào)節(jié)干細胞分化時的基因表達，從而調(diào)節(jié)BMSCs中平滑肌細胞標志蛋白的表達。而且TGF-β1可能參與機械張力誘導(dǎo)干細胞分化過程[5-8]。但是TGF-β1誘導(dǎo)干細胞向何種表型分化，目前尚不得而知。血管平滑肌細胞表型包括合成型和收縮型兩種表型[9]，收縮型是較為成熟的類型，分化程度高，增值能力差，含有豐富的肌絲，結(jié)構(gòu)蛋白表達量高，αβγ3種肌動蛋白亞型中，，以α-actin為主。而合成型分裂、增殖活躍,以βγ-actin為主[10-11]。Calponin是一個具有多種功能的蛋白家族，收縮類相關(guān)蛋白，主要分為calponin1、2、3三種。Calponin1主要在收縮型的平滑肌細胞中表達；calponin2在平滑肌細胞和非肌細胞中都有表達，能參與內(nèi)皮細胞增殖，胞質(zhì)分裂；calponin3雖然主要存在于神經(jīng)組織，但在平滑肌細胞中也有表達[12]。有研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1誘導(dǎo)細胞表達calponin1，但是不能表達晚期SMC指標，如肌球蛋白重鏈（Myosin Heavy Chain）和Myocardin蛋白[13-14]。TGF-β1誘導(dǎo)方式將干細胞誘導(dǎo)為何種表型的血管平滑肌細胞，誘導(dǎo)分化中的可能機制目前尚不清楚。 平滑肌細胞在TGF-β1作用下能夠在合成型和收縮型之間發(fā)生表型的轉(zhuǎn)化。本實驗研究運用TGF-β1誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化的標志蛋白表達的差異，模擬血管細胞自然生理狀況，探討在TGF-β1作用下的骨髓間充質(zhì)干細胞分化為平滑肌細胞中的表型差異。 目的：探討TGF-β1對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）誘導(dǎo)分化的血管平滑肌細胞（VSMCs）表型的影響。 方法：原代全骨髓法培養(yǎng)大鼠BMSCs，流式細胞術(shù)鑒定細胞。作成脂，成骨，成平滑肌細胞方向誘導(dǎo)，驗證BMSCs的多向分化潛能。將細胞分為2組：TGF-β1組用含5ng/ml轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；對照組用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)作對照。14d后觀察誘導(dǎo)后的細胞形態(tài)，并作RT-PCR檢測肌動蛋白（α-actin），平滑肌肌球蛋白重鏈（SM-MHC），鈣調(diào)節(jié)蛋白1（calponin1），鈣調(diào)節(jié)蛋白3（calponin3）的mRNA表達水平，免疫印跡觀察細胞內(nèi)α-actin，SM-MHC，calponin1，calponin3蛋白表達水平。 結(jié)果：經(jīng)流式細胞術(shù)鑒定，所培養(yǎng)細胞為BMSCs，并且經(jīng)過成脂、成骨、成平滑肌細胞的誘導(dǎo)，表明BMSCs存在多向分化的潛能。誘導(dǎo)14d后，TGF-β1組的平滑肌標志蛋白均較對照組有明顯升高，以SM-MHC，calponin3增加為主，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。TGF-β1組中calponin3的mRNA表達量比對照組低，而calponin1蛋白表達量和mRNA表達量能同步增高。 結(jié)論：TGF-β1能夠誘導(dǎo)BMSCs分化為血管平滑肌細胞，其表型主要為收縮型。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2

【共引文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 高翔;“補腎生髓成肝”關(guān)鍵蛋白質(zhì)相互作用的機制研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2012年

本文編號：1757977