本文選題：去細(xì)胞 + 光氧化反應(yīng)　； 參考：《中南大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】：第一部分去細(xì)胞光氧化反應(yīng)對(duì)兔頸動(dòng)脈性能的影響 目的：采用去細(xì)胞結(jié)合染料介導(dǎo)的光氧化法處理同種異體小動(dòng)脈,尋找比較理想的脫細(xì)胞方案；評(píng)價(jià)光氧化反應(yīng)這一交聯(lián)方法對(duì)去細(xì)胞小動(dòng)脈性能的影響,了解此種制備方法的可行性。 方法： 1、體外性能研究：(1)將130根新鮮的兔頸動(dòng)脈分成新鮮對(duì)照組及不同脫細(xì)胞方案處理組(Ⅰ-ⅩⅢ)等共計(jì)13組(n=10)。通過對(duì)血管的大體形態(tài)、脫細(xì)胞的完整程度、膠原彈力纖維保存的完整性等方面進(jìn)行綜合評(píng)價(jià),獲得去細(xì)胞的最佳方案。(2)將40根兔頸動(dòng)脈隨機(jī)分成新鮮對(duì)照組(F組)和去細(xì)胞光氧化組(DP),去細(xì)胞光氧化組又分為三個(gè)亞組,分別進(jìn)行光氧化處理2小時(shí)(DP2)、4小時(shí)(DP4)及6小時(shí)(DP6),共計(jì)4組(n=10),通過熱皺縮溫度、組織含水量、最大抗張強(qiáng)度和最大拉伸距離及體外酶降解實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)光氧化的最理想時(shí)間。 2、體內(nèi)性能研究：得到最佳的去細(xì)胞光氧化方案后,先將60根兔頸動(dòng)脈血管片隨機(jī)分成新鮮對(duì)照組(F組)、深低溫組(CP)、戊二醛交聯(lián)組(GA)、去細(xì)胞結(jié)合光氧化處理組(DP)共4組(n=15),通過熱皺縮溫度、最大抗張強(qiáng)度和最大拉伸距離評(píng)價(jià)各血管物理性能。然后建立大鼠皮下包埋模型,12周后獲取組織標(biāo)本,通過HE染色,比較各組血管片的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化及炎性反應(yīng)情況；原子吸收光譜法測(cè)定組織鈣含量,Von-Kossa鈣鹽染色評(píng)價(jià)組織鈣化情況,評(píng)價(jià)光氧化反應(yīng)處理對(duì)去細(xì)胞小動(dòng)脈的體內(nèi)生物穩(wěn)定性及抗鈣化性能影響。 結(jié)果： 1.采用多步驟去垢劑—酶聯(lián)消化法處理兔頸動(dòng)脈,能夠有效去除血管細(xì)胞成分的同時(shí)保存完整的膠原纖維。第Ⅷ組脫細(xì)胞處理后的兔頸動(dòng)脈比較理想,組織大體形態(tài)和新鮮兔頸動(dòng)脈相似,光鏡觀察結(jié)果顯示：細(xì)胞成分去除徹底,未見明顯細(xì)胞殘留成分,膠原彈力纖維保存較完整,組織結(jié)構(gòu)無明顯疏松。 2.光鏡結(jié)果顯示,經(jīng)光氧化反應(yīng)進(jìn)一步交聯(lián)后,去細(xì)胞兔頸動(dòng)脈的組織結(jié)構(gòu)將變緊湊,4小時(shí)可達(dá)最佳效果。機(jī)械性能檢測(cè)顯示,光氧化交聯(lián)去細(xì)胞后的血管,其機(jī)械性能將逐漸恢復(fù),至光氧化4小時(shí)后去細(xì)胞兔頸動(dòng)脈的機(jī)械性能與新鮮組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；體外抗酶降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,去細(xì)胞光氧化處理后的兔頸動(dòng)脈抗酶解能力相比新鮮的兔頸動(dòng)脈有所提高,光氧化處理4小時(shí)后的抗酶解能力要優(yōu)于2小時(shí),與光氧化處理6小時(shí)的效果無明顯差異(P0.05) 3.體內(nèi)性能研究結(jié)果顯示,大鼠皮下包埋實(shí)驗(yàn)中,新鮮對(duì)照組的兔頸動(dòng)脈發(fā)生了比較嚴(yán)重、廣泛的炎性反應(yīng),并出現(xiàn)了一定程度的溶解；其次為深低溫組,去細(xì)胞光氧化組的炎性反應(yīng)是所有組別中最輕的。鈣含量測(cè)定結(jié)果顯示去細(xì)胞光氧化組鈣化程度最低,與其它三組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；去細(xì)胞光氧化組的生物穩(wěn)定性要優(yōu)于深低溫組及戊二醛組,血管片無明顯降解,炎性細(xì)胞浸潤少且范圍局限,組織結(jié)構(gòu)保存較好并有新生血管形成。戊二醛處理組可見明顯大片團(tuán)聚鈣化區(qū)域,鈣含量測(cè)定結(jié)果與其它三組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05) 結(jié)論： 1.采用多步驟去垢劑一酶消化法(0.25%曲那通Ⅹ-100 6h,0.025%胰蛋白酶和0.02%EDTA10min,20u/m1DNase-Ⅰ和0.2mg/mlRNase-h 6h)是適合兔頸動(dòng)脈的較佳脫細(xì)胞方案,能夠有效去除其細(xì)胞成分,同時(shí)完整保存膠原纖維及彈力纖維。 2.光氧化反應(yīng)對(duì)去細(xì)胞兔頸動(dòng)脈的交聯(lián)作用呈時(shí)間依賴性,至光氧化反應(yīng)4小時(shí)性能表現(xiàn)最佳。 3.相比深低溫處理的兔頸動(dòng)脈,去細(xì)胞光氧化反應(yīng)交聯(lián)的兔頸動(dòng)脈免疫原性低,生物耐受程度好。而相對(duì)戊二醛處理的兔頸動(dòng)脈則具有更好的抗鈣化性能。 4.去細(xì)胞結(jié)合光氧化處理有可能成為前景廣泛、適合于處理直徑6mm的同種異體小動(dòng)脈的新型處理方法。 第二部分不同處理方案的異體小血管在體性能評(píng)價(jià) 目的：模擬冠狀動(dòng)脈旁路搭橋建立兔異體頸動(dòng)脈旁路移植模型,對(duì)去細(xì)胞結(jié)合光氧化交聯(lián)處理的兔頸動(dòng)脈進(jìn)行體內(nèi)研究,評(píng)價(jià)其作為冠狀動(dòng)脈旁路搭橋術(shù)中異體血管來源的可行性。 方法： 比較去細(xì)胞光氧化反應(yīng)處理的異體兔頸動(dòng)脈(n=18)及深低溫處理的異體兔頸動(dòng)脈(n=18)在體性能,通過建立兔頸動(dòng)脈移植模型模型,對(duì)移植血管及實(shí)驗(yàn)兔做大體觀察；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別飼養(yǎng)觀察1周、2周和4周后,通過超聲觀察移植血管的血流動(dòng)力學(xué)及通暢情況；組織學(xué)及掃描電鏡觀察血管的重塑情況；HE染色、免疫組化及圖像分析系統(tǒng)觀察移植血管的內(nèi)膜增生情況。 結(jié)果： 兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后均無死亡。經(jīng)超聲檢查發(fā)現(xiàn),術(shù)后4周時(shí)去細(xì)胞光氧化組的累計(jì)通暢率要顯著高于深低溫組(P0.05)。HE染色顯示深低溫組術(shù)后內(nèi)皮細(xì)胞有不同程度的脫落并增生,管腔血栓形成,免疫反應(yīng)表現(xiàn)比較嚴(yán)重。去細(xì)胞光氧化組術(shù)后內(nèi)皮細(xì)胞生長良好,管腔血栓形成少,炎性細(xì)胞浸潤少。免疫組化檢測(cè)及圖像分析顯示,術(shù)后1周深低溫組及去細(xì)胞光氧化組PCNA陽性細(xì)胞的表達(dá)無明顯區(qū)別(P0.05),但術(shù)后2周及4周去細(xì)胞光氧化組PCNA陽性細(xì)胞表達(dá)均要明顯低于深低溫組(P0.05)。去細(xì)胞光氧化組及深低溫組兩組血管移植后1周血管內(nèi)膜/中膜比無明顯差異(P0.05),術(shù)后2周及4周內(nèi)膜兩組血管內(nèi)膜/中膜比有顯著性差異(P0.05)。術(shù)后電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn),去細(xì)胞結(jié)合光氧化組移植血管內(nèi)皮細(xì)胞生長逐步變密集。而深低溫處理組移植血管內(nèi)皮細(xì)胞生長則比較紊亂,膠原變性、溶解,排列稀疏。術(shù)后4周深低溫處理組Ⅷ因子染色顯示內(nèi)皮細(xì)胞有不同程度的破壞,分布紊亂；而去細(xì)胞結(jié)合光氧化組Ⅷ因子染色陽性,內(nèi)皮生長良好。 結(jié)論： 1.去細(xì)胞結(jié)合光氧化反應(yīng)處理的異體兔頸動(dòng)脈植入體內(nèi)后無不良反應(yīng),生物穩(wěn)定性好。 2.去細(xì)胞結(jié)合光氧化反應(yīng)處理的異體兔頸動(dòng)脈生物穩(wěn)定性、抗血栓性及內(nèi)膜增生情況均要優(yōu)于深低溫處理的異體兔頸動(dòng)脈。 3.去細(xì)胞結(jié)合光氧化反應(yīng)處理的異體小血管可望作為一種新的血管移植材料用于臨床。 第三部分纖維蛋白膠聯(lián)合替米沙坦預(yù)防異體小動(dòng)脈早期再狹窄研究 目的：探討血管外膜應(yīng)用生物蛋白膠及替米沙坦對(duì)去細(xì)胞結(jié)合光氧化處理的異體小動(dòng)脈有無保護(hù)作用。 方法：36只SPF級(jí)純種兔隨機(jī)分為空白組(n=12)、支架組(n=12)及支架藥物組(n=12)。建立兔頸動(dòng)脈旁路移植模型,空白組移植以去細(xì)胞光氧化處理的異體兔頸動(dòng)脈,支架組在植入去細(xì)胞光氧化處理的異體兔頸動(dòng)脈后給予纖維蛋白膠作為外支架,支架藥物組則給予纖維蛋白膠和替米沙坦混合物。術(shù)后8周取出移植血管,進(jìn)行組織病理分析,免疫組織化學(xué)分析及Western blot檢測(cè)。 結(jié)果：術(shù)后8周空白組有2例橋血管阻塞,纖維蛋白膠支架組有2例橋血管阻塞,支架藥物組1例。與空白組及支架組相比,支架藥物組移植動(dòng)脈管壁炎性細(xì)胞侵潤相對(duì)要少。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,支架組及支架藥物組PCNA的表達(dá)要明顯低于空白組(P0.05),但兩組之間PCNA的表達(dá)并沒有明顯差異(P0.05)。支架及支架藥物組平滑肌細(xì)胞染色可見平滑肌細(xì)胞有向外膜遷移的趨勢(shì)。支架藥物組PPAR-γ的表達(dá)要明顯高于空白組及支架組,有顯著性差異(P0.05),而空白組PPAR-γ的表達(dá)與支架組沒有明顯區(qū)別。 結(jié)論： 1.纖維蛋白膠外支架能給予兔異體移植動(dòng)脈外支撐的作用,具有抑制內(nèi)膜和中膜增生的效果。 2.纖維蛋白膠可用于構(gòu)建藥物緩釋系統(tǒng)從而對(duì)移植血管進(jìn)行保護(hù)。 3.纖維蛋白膠外支架聯(lián)合替米沙坦具有抑制移植血管炎性反應(yīng)的效果,但對(duì)于移植血管的遠(yuǎn)期保護(hù)作用如何有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1743635