本文選題：去細胞 + 光氧化反應　； 參考：《中南大學》2010年博士論文

【摘要】：第一部分去細胞光氧化反應對兔頸動脈性能的影響 目的：采用去細胞結合染料介導的光氧化法處理同種異體小動脈,尋找比較理想的脫細胞方案；評價光氧化反應這一交聯(lián)方法對去細胞小動脈性能的影響,了解此種制備方法的可行性。 方法： 1、體外性能研究：(1)將130根新鮮的兔頸動脈分成新鮮對照組及不同脫細胞方案處理組(Ⅰ-ⅩⅢ)等共計13組(n=10)。通過對血管的大體形態(tài)、脫細胞的完整程度、膠原彈力纖維保存的完整性等方面進行綜合評價,獲得去細胞的最佳方案。(2)將40根兔頸動脈隨機分成新鮮對照組(F組)和去細胞光氧化組(DP),去細胞光氧化組又分為三個亞組,分別進行光氧化處理2小時(DP2)、4小時(DP4)及6小時(DP6),共計4組(n=10),通過熱皺縮溫度、組織含水量、最大抗張強度和最大拉伸距離及體外酶降解實驗評價光氧化的最理想時間。 2、體內性能研究：得到最佳的去細胞光氧化方案后,先將60根兔頸動脈血管片隨機分成新鮮對照組(F組)、深低溫組(CP)、戊二醛交聯(lián)組(GA)、去細胞結合光氧化處理組(DP)共4組(n=15),通過熱皺縮溫度、最大抗張強度和最大拉伸距離評價各血管物理性能。然后建立大鼠皮下包埋模型,12周后獲取組織標本,通過HE染色,比較各組血管片的形態(tài)結構變化及炎性反應情況；原子吸收光譜法測定組織鈣含量,Von-Kossa鈣鹽染色評價組織鈣化情況,評價光氧化反應處理對去細胞小動脈的體內生物穩(wěn)定性及抗鈣化性能影響。 結果： 1.采用多步驟去垢劑—酶聯(lián)消化法處理兔頸動脈,能夠有效去除血管細胞成分的同時保存完整的膠原纖維。第Ⅷ組脫細胞處理后的兔頸動脈比較理想,組織大體形態(tài)和新鮮兔頸動脈相似,光鏡觀察結果顯示：細胞成分去除徹底,未見明顯細胞殘留成分,膠原彈力纖維保存較完整,組織結構無明顯疏松。 2.光鏡結果顯示,經光氧化反應進一步交聯(lián)后,去細胞兔頸動脈的組織結構將變緊湊,4小時可達最佳效果。機械性能檢測顯示,光氧化交聯(lián)去細胞后的血管,其機械性能將逐漸恢復,至光氧化4小時后去細胞兔頸動脈的機械性能與新鮮組比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)；體外抗酶降解實驗結果表明,去細胞光氧化處理后的兔頸動脈抗酶解能力相比新鮮的兔頸動脈有所提高,光氧化處理4小時后的抗酶解能力要優(yōu)于2小時,與光氧化處理6小時的效果無明顯差異(P0.05) 3.體內性能研究結果顯示,大鼠皮下包埋實驗中,新鮮對照組的兔頸動脈發(fā)生了比較嚴重、廣泛的炎性反應,并出現(xiàn)了一定程度的溶解；其次為深低溫組,去細胞光氧化組的炎性反應是所有組別中最輕的。鈣含量測定結果顯示去細胞光氧化組鈣化程度最低,與其它三組有統(tǒng)計學差異(P0.05)；去細胞光氧化組的生物穩(wěn)定性要優(yōu)于深低溫組及戊二醛組,血管片無明顯降解,炎性細胞浸潤少且范圍局限,組織結構保存較好并有新生血管形成。戊二醛處理組可見明顯大片團聚鈣化區(qū)域,鈣含量測定結果與其它三組比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05) 結論： 1.采用多步驟去垢劑一酶消化法(0.25%曲那通Ⅹ-100 6h,0.025%胰蛋白酶和0.02%EDTA10min,20u/m1DNase-Ⅰ和0.2mg/mlRNase-h 6h)是適合兔頸動脈的較佳脫細胞方案,能夠有效去除其細胞成分,同時完整保存膠原纖維及彈力纖維。 2.光氧化反應對去細胞兔頸動脈的交聯(lián)作用呈時間依賴性,至光氧化反應4小時性能表現(xiàn)最佳。 3.相比深低溫處理的兔頸動脈,去細胞光氧化反應交聯(lián)的兔頸動脈免疫原性低,生物耐受程度好。而相對戊二醛處理的兔頸動脈則具有更好的抗鈣化性能。 4.去細胞結合光氧化處理有可能成為前景廣泛、適合于處理直徑6mm的同種異體小動脈的新型處理方法。 第二部分不同處理方案的異體小血管在體性能評價 目的：模擬冠狀動脈旁路搭橋建立兔異體頸動脈旁路移植模型,對去細胞結合光氧化交聯(lián)處理的兔頸動脈進行體內研究,評價其作為冠狀動脈旁路搭橋術中異體血管來源的可行性。 方法： 比較去細胞光氧化反應處理的異體兔頸動脈(n=18)及深低溫處理的異體兔頸動脈(n=18)在體性能,通過建立兔頸動脈移植模型模型,對移植血管及實驗兔做大體觀察；實驗動物分別飼養(yǎng)觀察1周、2周和4周后,通過超聲觀察移植血管的血流動力學及通暢情況；組織學及掃描電鏡觀察血管的重塑情況；HE染色、免疫組化及圖像分析系統(tǒng)觀察移植血管的內膜增生情況。 結果： 兩組實驗動物術后均無死亡。經超聲檢查發(fā)現(xiàn),術后4周時去細胞光氧化組的累計通暢率要顯著高于深低溫組(P0.05)。HE染色顯示深低溫組術后內皮細胞有不同程度的脫落并增生,管腔血栓形成,免疫反應表現(xiàn)比較嚴重。去細胞光氧化組術后內皮細胞生長良好,管腔血栓形成少,炎性細胞浸潤少。免疫組化檢測及圖像分析顯示,術后1周深低溫組及去細胞光氧化組PCNA陽性細胞的表達無明顯區(qū)別(P0.05),但術后2周及4周去細胞光氧化組PCNA陽性細胞表達均要明顯低于深低溫組(P0.05)。去細胞光氧化組及深低溫組兩組血管移植后1周血管內膜/中膜比無明顯差異(P0.05),術后2周及4周內膜兩組血管內膜/中膜比有顯著性差異(P0.05)。術后電鏡檢測發(fā)現(xiàn),去細胞結合光氧化組移植血管內皮細胞生長逐步變密集。而深低溫處理組移植血管內皮細胞生長則比較紊亂,膠原變性、溶解,排列稀疏。術后4周深低溫處理組Ⅷ因子染色顯示內皮細胞有不同程度的破壞,分布紊亂；而去細胞結合光氧化組Ⅷ因子染色陽性,內皮生長良好。 結論： 1.去細胞結合光氧化反應處理的異體兔頸動脈植入體內后無不良反應,生物穩(wěn)定性好。 2.去細胞結合光氧化反應處理的異體兔頸動脈生物穩(wěn)定性、抗血栓性及內膜增生情況均要優(yōu)于深低溫處理的異體兔頸動脈。 3.去細胞結合光氧化反應處理的異體小血管可望作為一種新的血管移植材料用于臨床。 第三部分纖維蛋白膠聯(lián)合替米沙坦預防異體小動脈早期再狹窄研究 目的：探討血管外膜應用生物蛋白膠及替米沙坦對去細胞結合光氧化處理的異體小動脈有無保護作用。 方法：36只SPF級純種兔隨機分為空白組(n=12)、支架組(n=12)及支架藥物組(n=12)。建立兔頸動脈旁路移植模型,空白組移植以去細胞光氧化處理的異體兔頸動脈,支架組在植入去細胞光氧化處理的異體兔頸動脈后給予纖維蛋白膠作為外支架,支架藥物組則給予纖維蛋白膠和替米沙坦混合物。術后8周取出移植血管,進行組織病理分析,免疫組織化學分析及Western blot檢測。 結果：術后8周空白組有2例橋血管阻塞,纖維蛋白膠支架組有2例橋血管阻塞,支架藥物組1例。與空白組及支架組相比,支架藥物組移植動脈管壁炎性細胞侵潤相對要少。免疫組織化學結果顯示,支架組及支架藥物組PCNA的表達要明顯低于空白組(P0.05),但兩組之間PCNA的表達并沒有明顯差異(P0.05)。支架及支架藥物組平滑肌細胞染色可見平滑肌細胞有向外膜遷移的趨勢。支架藥物組PPAR-γ的表達要明顯高于空白組及支架組,有顯著性差異(P0.05),而空白組PPAR-γ的表達與支架組沒有明顯區(qū)別。 結論： 1.纖維蛋白膠外支架能給予兔異體移植動脈外支撐的作用,具有抑制內膜和中膜增生的效果。 2.纖維蛋白膠可用于構建藥物緩釋系統(tǒng)從而對移植血管進行保護。 3.纖維蛋白膠外支架聯(lián)合替米沙坦具有抑制移植血管炎性反應的效果,但對于移植血管的遠期保護作用如何有待于進一步研究。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

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本文編號：1743635