本文選題：細(xì)菌生物膜 + 模型　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 第一部分: 【目的】模擬體內(nèi)環(huán)境,體外建立細(xì)菌生物被膜模型,為進(jìn)一步深入研究細(xì)菌生物被膜生物學(xué)特點提供基礎(chǔ)。 【方法】將粘附載體置于氣溶膠法和搖床法模擬體內(nèi)細(xì)菌生物被膜形成的微環(huán)境中,將銅綠假單胞菌株培養(yǎng)3天后,取出標(biāo)本分別進(jìn)行通過FITC-ConA染色及SYTO9?PI染色,然后分別進(jìn)行熒光顯微鏡檢測及激光共聚焦檢測,觀察細(xì)菌生物被膜的形成情況;進(jìn)行電子顯微鏡掃描觀察形成的細(xì)菌生物被膜的形態(tài)特點。 【結(jié)果】在氣溶膠的微環(huán)境下,FITC-ConA染色后在熒光顯微鏡觀察到明亮成片狀的細(xì)菌生物被膜;SYTO9?PI染色后在激光共聚焦檢測,觀察到片狀,層疊如積云狀,棉絮樣的細(xì)菌生物被膜;在電子顯微鏡掃描觀察到大量細(xì)菌成團(tuán)聚集,團(tuán)狀叢生突出表面,具有立體結(jié)構(gòu)的細(xì)菌生物被膜。在搖床法的微環(huán)境下,用三種檢測方法都觀察到成流線狀的細(xì)菌生物被膜。 【結(jié)論】運用氣溶膠法搖床法可成功建立分別模擬體內(nèi)呼吸系統(tǒng)及循環(huán)、泌尿系統(tǒng)的微環(huán)境下生物被膜形成模型。 第二部分: 【目的】探討納米銀離子對細(xì)菌生物被膜(Biofilm,BF)的細(xì)菌死亡率和其空間結(jié)構(gòu)的影響。 【方法】采用搖床法,以納米銀離子含量不同的乙烯-醋酸乙烯酯(Ethylene-Vinyl acetate, EVA)塑料為細(xì)菌粘附載體,模擬體內(nèi)銅綠假單胞菌(P.aeruginosa,PA)BF形成的微環(huán)境,建立體外BF模型;將培養(yǎng)3d的空白標(biāo)本分別在掃描電子顯微鏡(scanning electron microscopy, SEM)下及用FITC-ConA染色后熒光顯微鏡下觀察不含納米銀EVA中BF的形成情況;將生長0.5、1、2、3、5d的BF模型行SYTO9?PI染色,激光共聚焦掃描電鏡(confocal laser scanning microscopy, CLSM)下攝取不同層面的圖像,然后應(yīng)用Image Pro Plus 6.0分析軟件分析不同干預(yù)條件下PAO1菌株BF的細(xì)菌的死亡率和應(yīng)用ISA分析軟件獲得PAO1菌株BF的相關(guān)空間結(jié)構(gòu)參數(shù)定量化數(shù)據(jù)。 【結(jié)果】①運用SEM及熒光顯微鏡的方法,在以不含納米銀EVA塑料為細(xì)菌粘附載體上培養(yǎng)3d的標(biāo)本中均觀察到流線狀的BF形成。②Image Pro Plus 6.0分析軟件定量化分析顯示,納米銀離子含量、作用時間對PAO1菌株BF的細(xì)菌死亡率均有明顯影響(F = 84.62,85.67, p0.0001);不同時間組含有納米銀離子材料的PAO1菌株BF的細(xì)菌死亡率均顯著高于空白對照組(P0.05);納米銀離子含量不同的2種材料上PAO1菌株BF的細(xì)菌死亡率無明顯影響(P0.05);納米銀離子含量不同的(0、0.05%、0.1%)材料上PAO1菌株的BF,其第1、2、3天細(xì)菌死亡率均分別顯著高于第0.5、5d的細(xì)菌死亡率(P0.05);含納米銀離子0.1%的材料上BF在作用的第2天其細(xì)菌死亡率最高(88.53±1.88)%。③ISA軟件定量化分析顯示,銀離子含量、作用時間對BF空間結(jié)構(gòu)均有明顯影響,不同時間組含有納米銀離子材料上BF的區(qū)域孔率(Areal Porosity, AP)、平均擴(kuò)散距離(Average Diffusion Distance, ADD)及結(jié)構(gòu)熵(Textural Entropy, TE)影響的均顯著高于空白對照組(P0.05),但2種納米銀離子材料上BF的AP、ADD及TE的影響無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。隨著培養(yǎng)時間的延長,各含納米銀離子材料組PAO1菌株BF的AP值、ADD值無明顯的變化趨勢,同一時間組的含有納米銀離子材料組PAO1菌株BF的AP值都高于空白對照組的AP值;同一時間組的含有納米銀離子材料組PAO1菌株BF的ADD值都低于空白對照組的ADD值。各含納米銀離子材料組PAO1菌株BF的TE值隨著時間的延長,都呈先升高后降低的趨勢,2d組都為最高值;同一時間組的TE值隨著含納米銀離子的增加都呈降低趨勢。④隨著時間的延長,各含納米銀離子材料組PAO1菌株BF的平均厚度都呈先升高后降低的趨勢,3d組都達(dá)最高值;納米銀離子的含量對BF厚度的影響無統(tǒng)計學(xué)差異(F值=2.11 , p0.1),作用時間對BF厚度的影響有統(tǒng)計學(xué)差異(F值=985.81 ,p0.001)。 【結(jié)論】①運用搖床法成功建立了體外PAO1菌株BF模型;②納米銀離子對PAO1菌株BF內(nèi)的細(xì)菌有明顯殺滅作用,對PAO1菌株BF空間結(jié)構(gòu)有顯著的影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R378.991

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本文編號：1740207