本文選題：大鼠胚胎干細胞　切入點：神經(jīng)分化　出處：《浙江理工大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】：神經(jīng)退行性疾病(Neurodegenerative disease)是一類慢性、進行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病,近些年來,隨著社會的老齡化程度加劇,神經(jīng)退行性疾病在所有疾病中占有越來越重要的地位。傳統(tǒng)的觀念認為,神經(jīng)細胞是沒有再生能力的,所以之前的研究基本上都集中在改善神經(jīng)系統(tǒng)疾病的受損癥狀和防止疾病損害加強的治療方法上。上個世紀90年代,隨著神經(jīng)干細胞的發(fā)現(xiàn)人們改變了這種觀念,但是關(guān)于神經(jīng)系統(tǒng)損傷疾病仍然沒有有效的治療方法,因此中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)是人類面臨的巨大挑戰(zhàn)。 隨著胚胎干細胞的分離獲得和成功建系,人們開始將胚胎干細胞用于細胞替代治療的研究。胚胎干細胞是一種全能性干細胞,其向神經(jīng)方向誘導(dǎo)分化成為神經(jīng)細胞移植的一種廣泛的細胞來源,如果移植的神經(jīng)細胞可正常發(fā)揮功能,這將會從根本上治療一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病。現(xiàn)在關(guān)于胚胎干細胞分化為神經(jīng)細胞的方法主要有形成擬胚體、基質(zhì)細胞共培養(yǎng)、細胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)法和遺傳修飾法等方法,但大都存在一些諸如需要基于細胞滋養(yǎng)的培養(yǎng)過去麻煩、分化效率太低或存在安全性等問題。胚胎干細胞分化為神經(jīng)細胞做為細胞替代治療需要研究一種簡單而有效的分化方法。 本論文采用無血清培養(yǎng)基,首先用特定的分化培養(yǎng)液可以高效地將大鼠胚胎干細胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)球干細胞,免疫熒光和RT-PCR的實驗結(jié)果表明,這些細胞可以表達神經(jīng)干細胞相關(guān)的標記,然后通過添加不同的分化細胞生長因子可以將胚胎干細胞定向地誘導(dǎo)分化為為運動能神經(jīng)元和多巴胺能神經(jīng)元,這表明我們誘導(dǎo)的神經(jīng)干細胞具有良好的可塑性,可以分化為不同的神經(jīng)細胞。在體內(nèi)實驗中,我們首先用攜帶紅色熒光蛋白H794的慢病毒感染神經(jīng)球干細胞,篩選純化后將表達紅色熒光蛋白的神經(jīng)球干細胞進行初步分化,然后移植注射到成年大鼠腦黑質(zhì)紋狀體內(nèi),觀察存活及分化情況。注射20d后,取實驗大鼠進行全身固定,取腦組織然后制作冰凍切片,免疫熒光染色后在熒光顯微鏡下可以觀察到注射的紅色熒光蛋白感染的細胞。 本實驗建立了一種簡單、快速、高效的胚胎干細胞分化為神經(jīng)干細胞的方法,并進行進一步分化為特定神經(jīng)細胞,初步嘗試進行了體內(nèi)實驗,胚胎干細胞誘導(dǎo)分化來的神經(jīng)細胞成了神經(jīng)系統(tǒng)疾病重要的細胞來源。通過本實驗,我們得出在無血清條件下,通過單層細胞粘附培養(yǎng)可以獲得神經(jīng)干細胞,本實驗為神經(jīng)干細胞用于神經(jīng)系統(tǒng)性疾病的治療打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Neurodegenerative disease is a kind of chronic and progressive neurological disease. In recent years, with the aggravation of society, neurodegenerative diseases play a more and more important role in all diseases.The conventional view is that nerve cells are not regenerative, so previous studies have focused on improving the symptoms of neurological diseases and strengthening treatments to prevent them.In the 1990s, with the discovery of neural stem cells, people changed this idea, but there is still no effective treatment for nervous system injury diseases, so the repair of central nervous system injury is a great challenge to human beings.With the isolation and successful establishment of embryonic stem cells, embryonic stem cells have been used in cell replacement therapy.Embryonic stem cells are omnipotent stem cells, which are induced to differentiate into a wide range of cell sources for neural transplantation, if the transplanted nerve cells function normally.This will fundamentally cure some neurological diseases.At present, the methods of differentiation of embryonic stem cells into nerve cells mainly include the formation of embryoid body, co-culture of stromal cells, cytokine induction culture and genetic modification, etc.However, most of them have some problems, such as the past troubles of cell-based culture, low differentiation efficiency or safety.The differentiation of embryonic stem cells into neural cells requires a simple and effective method of differentiation.In this paper, serum-free medium was used to induce the differentiation of rat embryonic stem cells into neuronal stem cells. The results of immunofluorescence and RT-PCR showed that rat embryonic stem cells could be induced to differentiate into neural globular stem cells.These cells can express markers associated with neural stem cells, which can then be induced to differentiate into motor and dopaminergic neurons by adding different differentiated cell growth factors.This indicates that the neural stem cells we induce have good plasticity and can differentiate into different nerve cells.In vivo experiments, we first infected neural ball stem cells with lentivirus carrying red fluorescent protein H794. After screening and purification, the neural ball stem cells expressing red fluorescent protein were preliminarily differentiated.Then transplanted into the substantia nigra striatum of adult rats to observe the survival and differentiation.After 20 days of injection, the experimental rats were fixed in the whole body, and then frozen sections were made from the brain tissue. After immunofluorescence staining, the cells infected with red fluorescent protein could be observed under fluorescence microscope.In this study, a simple, rapid and efficient method for differentiation of embryonic stem cells into neural stem cells was established, and further differentiation into specific nerve cells was carried out.Embryonic stem cells induce differentiation of nerve cells into an important source of nervous system diseases.Through this experiment, we concluded that neural stem cells could be obtained by monolayer cell adhesion culture in serum-free condition, which laid a foundation for the treatment of nervous system diseases by neural stem cells.
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329;R741

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本文編號：1727331