本文選題：BQ　切入點：細(xì)胞周期　出處：《蘇州大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的:1,4-苯醌(BQ)又稱對苯醌,是一種有刺激性氣味的黃色晶體物質(zhì),是有機(jī)合成工業(yè)的重要原料,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、農(nóng)藥、化工、染料等工業(yè)。研究表明,BQ是苯在體內(nèi)毒性最強(qiáng)的一種代謝物。在許多實驗系統(tǒng)中均可引起遺傳損傷,近年來對其遺傳毒性機(jī)制的研究取得一些進(jìn)展。動物實驗研究證明,苯醌是一類確認(rèn)的致白血病物質(zhì),但其毒作用機(jī)理并不是很清楚。本研究旨在了解BQ的細(xì)胞毒性、周期阻滯和DNA損傷及修復(fù)情況,試圖探討B(tài)Q可能的遺傳損傷機(jī)制和防護(hù)劑,為提出有效保護(hù)苯和BQ職業(yè)暴露人群健康的措施提供依據(jù)。 方法:本研究通過MTT比色法檢測不同濃度的BQ對V79細(xì)胞(中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞)作用后細(xì)胞存活率的變化,了解濃度-毒性效應(yīng)之間的關(guān)系;同時采用碘化丙啶( PI)染色觀察細(xì)胞周期分布狀況;用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)研究不同濃度BQ對V79細(xì)胞的DNA損傷程度及類型,并觀察不同時間段細(xì)胞的自身修復(fù)情況;用DCFH-DA法檢測不同濃度BQ處理V79細(xì)胞2h后活性氧(ROS)的含量并用激光共聚焦進(jìn)行形態(tài)觀察;分別用不同濃度維生素C與BQ共同作用于V79細(xì)胞后,用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)檢測DNA損傷的變化情況,觀察維生素C對BQ所致DNA損傷的拮抗作用。 結(jié)果:在2h處理過程中,當(dāng)BQ終濃度50μmol/L及以上時,各染毒組吸光值與陰性對照組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.01),并且隨著濃度和時間的增加,吸光值逐漸下降,細(xì)胞存活率也呈時間和濃度依賴性降低。25～100μmol /L范圍內(nèi)的BQ作用24 h后,V79細(xì)胞的細(xì)胞周期也發(fā)生了明顯的改變,表現(xiàn)為S期細(xì)胞比例明顯增加,G1期細(xì)胞的比例下降。單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示,在12.5～100μmol/LBQ作用后,彗星細(xì)胞拖尾率隨著濃度的增加而增加,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)。其他分析指標(biāo)彗星尾長、Olive尾矩和彗尾DAN%也明顯高于陰性對照組( P 0.05) ,且隨著BQ濃度的增加,損傷呈上升趨勢。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測,當(dāng)BQ終濃度在50～100μmol/L時細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.01)。BQ致DNA損傷程度的變化與ROS含量變化存在線性相關(guān)(p0.01)。在本研究中,40、200μmol/L維生素C和BQ同時作用使彗星拖尾率、彗星尾長、Olive尾矩和彗尾DAN%明顯低于相應(yīng)BQ劑量組( P 0.01)。而1000μmol/L維生素C則加重了BQ的DNA損傷。 結(jié)論:本研究結(jié)果認(rèn)為,①在體外培養(yǎng)條件下,BQ能明顯抑制V79細(xì)胞的增殖,100μmol/L BQ濃度作用2h,25μmol/L BQ濃度作用24h就對細(xì)胞產(chǎn)生明顯的毒作用,并呈濃度依賴關(guān)系;②流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn),25μmol/L的BQ作用24 h后,可引起V79細(xì)胞周期也發(fā)生明顯的改變,表現(xiàn)為S期細(xì)胞比例明顯增加, G1期細(xì)胞的比例下降;③單細(xì)胞凝膠電泳實驗表明,6.25μmol/L BQ就能引起DNA損傷,主要是單鏈斷裂,這種損傷部分可自身修復(fù);④流式細(xì)胞術(shù)及激光共聚焦技術(shù)檢測結(jié)果顯示,在體外培養(yǎng)條件下,50μmol/L的BQ可引起V79細(xì)胞內(nèi)ROS生成明顯增多;BQ致細(xì)胞DNA損傷與引起ROS生成增多有關(guān);⑤單細(xì)胞凝膠電泳結(jié)果顯示,一定劑量的維生素C對BQ誘導(dǎo)的V79細(xì)胞DNA氧化損傷具有抑制作用。
[Abstract]:Objective : 1,4 - Benzoquinone ( BQ ) is a kind of yellow crystalline substance with pungent odor . It is an important raw material for organic synthesis industry . It has been widely used in medicine , pesticide , chemical industry , dye and so on . It is shown that BQ is one of the most toxic metabolites of benzene in vivo .



Methods : The changes of cell survival rate of V79 cells ( Chinese hamster lung fibroblasts ) were detected by MTT colorimetric method , and the relationship between concentration - toxicity effect was observed . The DNA damage degree and type of V79 cells were observed by single - cell gel electrophoresis .



Results : In the 2h treatment , when the final concentration of BQ was 50 渭mol / L and above , the absorbance of V79 cells was significantly increased compared with the negative control group ( P 0.01 ) . After 24 h of BQ in the range of 25 锝，

本文編號：1714769