本文選題：疫苗　切入點(diǎn)：口服　出處：《沈陽(yáng)藥科大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】：與傳統(tǒng)的注射接種相比,疫苗的口服接種具有諸多優(yōu)勢(shì),除了可以有效的誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生黏膜局部和其它黏膜組織免疫應(yīng)答外,還可以誘導(dǎo)全身產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。另外這一給藥方式不但在很大程度上提高了接種者的順應(yīng)性,還可以消除注射接種帶來(lái)的疾病傳播風(fēng)險(xiǎn),并節(jié)約注射器材和特殊醫(yī)務(wù)人員培訓(xùn)所需的成本費(fèi)用,在兒童免疫、地區(qū)疾病的防治方面顯示出突出的優(yōu)勢(shì)。因此,研究針對(duì)細(xì)菌、病毒及寄生蟲(chóng)等病原體的疫苗口服傳遞系統(tǒng)意義深遠(yuǎn)。 然而,盡管口服疫苗傳遞具有許多優(yōu)點(diǎn),由于腸黏膜表面對(duì)抗原的機(jī)械清除和抗原吸收細(xì)胞的低攝取率,限制了疫苗口服接種的進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。本論文的主要研究目的,是針對(duì)疫苗口服傳遞面臨的主要障礙,嘗試發(fā)展新型脂質(zhì)載體：棕櫚酰甘露聚糖錨定的膽鹽脂質(zhì)體(OPM-coated NaDC-Lip)和N-三甲基殼聚糖包覆的多囊脂質(zhì)體(TMC-coated MVLs),以期利用其獨(dú)特的穩(wěn)定性和靶向性提高疫苗口服傳遞效率。 第一章以牛血清白蛋白(BSA)為模型抗原,建立了脂類(lèi)樣品中蛋白含量的測(cè)定方法,即乙醇沉淀-BCA法。該方法主要利用乙醇既能沉淀蛋白又能溶解脂類(lèi)的特點(diǎn),在采用BCA法測(cè)定蛋白濃度之前,先使用乙醇沉淀蛋白,通過(guò)離心的手段將蛋白與脂類(lèi)分離,消除脂類(lèi)物質(zhì)對(duì)BCA測(cè)定的影響。分析方法結(jié)果表明,乙醇沉淀法可有效避免脂類(lèi)物質(zhì)對(duì)BCA法測(cè)定蛋白的干擾,線性關(guān)系良好,精密度和回收率符合分析方法要求。 第二章采用逆向蒸發(fā)法制備膽鹽脂質(zhì)體,優(yōu)化出的最優(yōu)處方為總脂量225 mg,膽固醇與磷脂質(zhì)量比為0.5,脫氧膽酸鈉與脂相的摩爾比為0.5,此時(shí)制備得到的膽鹽脂質(zhì)體穩(wěn)定性好,抵抗外界膽鹽能力強(qiáng)。制備的膽鹽脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)呈類(lèi)球形,為大單室脂質(zhì)體,與普通脂質(zhì)體相比粒徑減小,小于200 nm。通過(guò)濁度實(shí)驗(yàn)、PIN特征光譜實(shí)驗(yàn)及脫氧膽酸鈉在脂質(zhì)體膜上的分布實(shí)驗(yàn)初步考察了脫氧膽酸鈉與磷脂的相互作用,結(jié)果表明,一部分脫氧膽酸鈉插入到脂質(zhì)體膜上,當(dāng)脫氧膽酸鈉與脂相的摩爾比為0.5時(shí),有效的脫氧膽酸鈉與脂相摩爾比Re為0.26,分配系數(shù)K為0.21 mM-1。 第三章合成了棕櫚�；鶎�(duì)甘露聚糖上羥基的取代度為0.37%的棕櫚酰甘露聚糖(OPM),并將OPM錨定在膽鹽脂質(zhì)體上。結(jié)果表明,OPM并不破壞膽鹽脂質(zhì)體的內(nèi)部結(jié)構(gòu),當(dāng)OPM/PC的質(zhì)量比為1.0時(shí),OPM錨定在膽鹽脂質(zhì)體的量達(dá)到飽和；OPM的加入會(huì)使zeta電位的絕對(duì)值降低；OPM與膽鹽脂質(zhì)體的質(zhì)量比為1.0以上時(shí),可以制備出粒徑均勻的OPM錨定的膽鹽脂質(zhì)體；載體的制備過(guò)程和所用輔料均不會(huì)導(dǎo)致BSA的降解；膽鹽脂質(zhì)體和OPM錨定的膽鹽脂質(zhì)體在PBS (pH7.4)、pH1.2的HCl溶液、1%的胰液和20 mmol·mL-1膽鹽溶液中均比較穩(wěn)定。 第四章建立了快速、準(zhǔn)確測(cè)定小鼠體內(nèi)抗體的分析方法。結(jié)果表明,第4周后,皮下注射免疫BSA溶液得到了較高的IgG滴度水平(6.8±0.6),小鼠口服免疫BSA脂質(zhì)體組、BSA膽鹽脂質(zhì)體組和OPM包覆的BSA膽鹽脂質(zhì)體組的IgG滴度水平分別為4.2±0.3、5.7±0.4和6.7±0.5,口服免疫BSA溶液組及OPM包覆的空白膽鹽脂質(zhì)體組得到的IgG滴度水平比較低(分別為1.9±0.4和2.1±0.4)。在黏膜免疫應(yīng)答方面,皮下注射BSA溶液組誘導(dǎo)的IgA滴度水平非常低,與BSA脂質(zhì)體組相比,BSA膽鹽脂質(zhì)體組和OPM包覆的BSA膽鹽脂質(zhì)體組均誘導(dǎo)了更強(qiáng)的黏膜免疫應(yīng)答(p0.01); OPM包覆的BSA膽鹽脂質(zhì)體組中IgG2a/IgG1比其他組有所提高(p0.05),表明該組處方具有提高細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力。 第五章制備牛血清白蛋白多囊脂質(zhì)體,以粒徑和包封率為指標(biāo),通過(guò)單因素試驗(yàn)優(yōu)化多囊脂質(zhì)體的制備工藝并篩選處方。通過(guò)殼聚糖與碘甲烷進(jìn)行季胺化反應(yīng)合成TMC,結(jié)果表明,所得合成產(chǎn)物TMC的三甲基取代度為70.2%。制備了TMC包覆的牛血清白蛋白多囊脂質(zhì)體,并對(duì)包覆條件及理化性質(zhì)進(jìn)行了研究,當(dāng)TMC的濃度為0.5%以上時(shí),就可以對(duì)多囊脂質(zhì)體有效的包覆,且包覆后的多囊脂質(zhì)體比較穩(wěn)定,不發(fā)生聚集；多囊脂質(zhì)體的制備過(guò)程和TMC包覆的過(guò)程均不會(huì)導(dǎo)致BSA降解；與未包覆的多囊脂質(zhì)體相比,TMC包覆的多囊脂質(zhì)體在人工胃液中更加穩(wěn)定。免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠口服TMC包覆的牛血清白蛋白多囊脂質(zhì)體后,在血液中可以檢測(cè)到較高的IgG水平(5.7±0.4),在唾液和腸液中可以檢測(cè)到較高的IgA水平(分別為5.2±0.2和5.0±0.3)。 制備的載體棕櫚酰甘露聚糖錨定的牛血清白蛋白膽鹽脂質(zhì)體和N-三甲基殼聚糖包覆的牛血清白蛋白多囊脂質(zhì)體可有效的誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和黏膜免疫應(yīng)答,可以作為疫苗口服的有效載體。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1677350