本文選題：疫苗　切入點：口服　出處：《沈陽藥科大學》2010年博士論文

【摘要】：與傳統的注射接種相比,疫苗的口服接種具有諸多優(yōu)勢,除了可以有效的誘導機體產生黏膜局部和其它黏膜組織免疫應答外,還可以誘導全身產生體液免疫和細胞免疫應答。另外這一給藥方式不但在很大程度上提高了接種者的順應性,還可以消除注射接種帶來的疾病傳播風險,并節(jié)約注射器材和特殊醫(yī)務人員培訓所需的成本費用,在兒童免疫、地區(qū)疾病的防治方面顯示出突出的優(yōu)勢。因此,研究針對細菌、病毒及寄生蟲等病原體的疫苗口服傳遞系統意義深遠。 然而,盡管口服疫苗傳遞具有許多優(yōu)點,由于腸黏膜表面對抗原的機械清除和抗原吸收細胞的低攝取率,限制了疫苗口服接種的進一步推廣和應用。本論文的主要研究目的,是針對疫苗口服傳遞面臨的主要障礙,嘗試發(fā)展新型脂質載體：棕櫚酰甘露聚糖錨定的膽鹽脂質體(OPM-coated NaDC-Lip)和N-三甲基殼聚糖包覆的多囊脂質體(TMC-coated MVLs),以期利用其獨特的穩(wěn)定性和靶向性提高疫苗口服傳遞效率。 第一章以牛血清白蛋白(BSA)為模型抗原,建立了脂類樣品中蛋白含量的測定方法,即乙醇沉淀-BCA法。該方法主要利用乙醇既能沉淀蛋白又能溶解脂類的特點,在采用BCA法測定蛋白濃度之前,先使用乙醇沉淀蛋白,通過離心的手段將蛋白與脂類分離,消除脂類物質對BCA測定的影響。分析方法結果表明,乙醇沉淀法可有效避免脂類物質對BCA法測定蛋白的干擾,線性關系良好,精密度和回收率符合分析方法要求。 第二章采用逆向蒸發(fā)法制備膽鹽脂質體,優(yōu)化出的最優(yōu)處方為總脂量225 mg,膽固醇與磷脂質量比為0.5,脫氧膽酸鈉與脂相的摩爾比為0.5,此時制備得到的膽鹽脂質體穩(wěn)定性好,抵抗外界膽鹽能力強。制備的膽鹽脂質體結構呈類球形,為大單室脂質體,與普通脂質體相比粒徑減小,小于200 nm。通過濁度實驗、PIN特征光譜實驗及脫氧膽酸鈉在脂質體膜上的分布實驗初步考察了脫氧膽酸鈉與磷脂的相互作用,結果表明,一部分脫氧膽酸鈉插入到脂質體膜上,當脫氧膽酸鈉與脂相的摩爾比為0.5時,有效的脫氧膽酸鈉與脂相摩爾比Re為0.26,分配系數K為0.21 mM-1。 第三章合成了棕櫚�；鶎Ω事毒厶巧狭u基的取代度為0.37%的棕櫚酰甘露聚糖(OPM),并將OPM錨定在膽鹽脂質體上。結果表明,OPM并不破壞膽鹽脂質體的內部結構,當OPM/PC的質量比為1.0時,OPM錨定在膽鹽脂質體的量達到飽和；OPM的加入會使zeta電位的絕對值降低；OPM與膽鹽脂質體的質量比為1.0以上時,可以制備出粒徑均勻的OPM錨定的膽鹽脂質體；載體的制備過程和所用輔料均不會導致BSA的降解；膽鹽脂質體和OPM錨定的膽鹽脂質體在PBS (pH7.4)、pH1.2的HCl溶液、1%的胰液和20 mmol·mL-1膽鹽溶液中均比較穩(wěn)定。 第四章建立了快速、準確測定小鼠體內抗體的分析方法。結果表明,第4周后,皮下注射免疫BSA溶液得到了較高的IgG滴度水平(6.8±0.6),小鼠口服免疫BSA脂質體組、BSA膽鹽脂質體組和OPM包覆的BSA膽鹽脂質體組的IgG滴度水平分別為4.2±0.3、5.7±0.4和6.7±0.5,口服免疫BSA溶液組及OPM包覆的空白膽鹽脂質體組得到的IgG滴度水平比較低(分別為1.9±0.4和2.1±0.4)。在黏膜免疫應答方面,皮下注射BSA溶液組誘導的IgA滴度水平非常低,與BSA脂質體組相比,BSA膽鹽脂質體組和OPM包覆的BSA膽鹽脂質體組均誘導了更強的黏膜免疫應答(p0.01); OPM包覆的BSA膽鹽脂質體組中IgG2a/IgG1比其他組有所提高(p0.05),表明該組處方具有提高細胞免疫應答的能力。 第五章制備牛血清白蛋白多囊脂質體,以粒徑和包封率為指標,通過單因素試驗優(yōu)化多囊脂質體的制備工藝并篩選處方。通過殼聚糖與碘甲烷進行季胺化反應合成TMC,結果表明,所得合成產物TMC的三甲基取代度為70.2%。制備了TMC包覆的牛血清白蛋白多囊脂質體,并對包覆條件及理化性質進行了研究,當TMC的濃度為0.5%以上時,就可以對多囊脂質體有效的包覆,且包覆后的多囊脂質體比較穩(wěn)定,不發(fā)生聚集；多囊脂質體的制備過程和TMC包覆的過程均不會導致BSA降解；與未包覆的多囊脂質體相比,TMC包覆的多囊脂質體在人工胃液中更加穩(wěn)定。免疫學實驗結果表明,小鼠口服TMC包覆的牛血清白蛋白多囊脂質體后,在血液中可以檢測到較高的IgG水平(5.7±0.4),在唾液和腸液中可以檢測到較高的IgA水平(分別為5.2±0.2和5.0±0.3)。 制備的載體棕櫚酰甘露聚糖錨定的牛血清白蛋白膽鹽脂質體和N-三甲基殼聚糖包覆的牛血清白蛋白多囊脂質體可有效的誘導體液免疫應答和黏膜免疫應答,可以作為疫苗口服的有效載體。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：沈陽藥科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 吳志芳，黃汝多，，戴群力，李國賢;啤酒酵母渣甘露聚糖性質的研究[J];安徽大學學報(自然科學版);1994年02期

2 高貴珍,丁黎華,焦慶才,丁一磊,陳雷;鋅試劑分光光度法測定殼聚糖含量[J];分析化學;2003年12期

3 郭穎娜;孫衛(wèi);;蛋白質含量測定方法的比較[J];河北化工;2008年04期

4 周祖釗,朱文雅,彭小玲,朱菊英;BCA法測定微量蛋白質的初步評價[J];臨床檢驗雜志;1992年03期

5 王淡兮;孫秀蘭;;蛋白質定量檢測方法的探討[J];糧食與食品工業(yè);2009年04期

6 李海玲;彭書明;李凜;張雪梅;;4種常用蛋白濃度測定方法的比較[J];中國生化藥物雜志;2008年04期

7 高貴珍,焦慶才,丁一磊,陳雷;以分光光度法測定復方樣品中的殼聚糖含量[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2003年05期

8 胡越凱;張永信;;疫苗與傳染病[J];上海醫(yī)藥;2010年02期

9 肖超菊,齊憲榮,艾尼瓦爾,魏樹禮;順鉑緩釋多囊脂質體的制備和體外釋放性能研究[J];藥學學報;2003年02期

10 吳正紅,平其能,雷曉敏,李建英,蔡鵬,李正榮,李朝軍;殼聚糖及其衍生物包覆的脂質體對胰島素細胞旁路轉運的促進作用[J];中國藥科大學學報;2005年04期

本文編號：1677350