本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞　切入點(diǎn)：心肌樣細(xì)胞　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文

【摘要】： 目的：通過(guò)密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離,純化,擴(kuò)增兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。完成骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)向心肌樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化,并比較在三種不同誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化中的分化率,篩選最佳誘導(dǎo)方案。 方法：采用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)擴(kuò)增,通過(guò)倒置顯微鏡觀察培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)形狀。取第4代培養(yǎng)后所得細(xì)胞分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四組,再將Ⅱ,Ⅲ組分成A B C三個(gè)亞組(ⅡA、ⅡB、ⅡC、ⅢA、ⅢB、ⅢC)。Ⅰ組用10μmol/L 5-氮雜胞苷誘導(dǎo)；Ⅱ組(ⅡA組用0.02μmol/L血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo),ⅡB組用0.2μmol/L血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo),ⅡC組用2 u mol/L血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo))；Ⅲ組(ⅢA組用1μg/L骨形態(tài)發(fā)生蛋白－2誘導(dǎo),ⅢB組用10μg/L骨形態(tài)發(fā)生蛋白－2誘導(dǎo),ⅢC組用100μg/L骨形態(tài)發(fā)生蛋白－2誘導(dǎo))；Ⅳ組為對(duì)照組,常規(guī)換液。每一組用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)24小時(shí),誘導(dǎo)后洗凈,換完全培養(yǎng)液培養(yǎng)28天。28天后行心肌特異性蛋白免疫組化染色,顯色。 結(jié)果：(1)密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,增殖速度較快,細(xì)胞呈梭形。(2)細(xì)胞誘導(dǎo)后行免疫組化檢測(cè),誘導(dǎo)組心肌肌鈣cTnT和心肌連接蛋白Cx－43表達(dá)均呈陽(yáng)性。對(duì)照組未見(jiàn)表達(dá)。(3)Ⅱ、Ⅲ組內(nèi),心肌特異性蛋白的表達(dá)量隨誘導(dǎo)劑濃度的增加而增加。ⅡC組(0.2975±0.0249)高于Ⅰ組(0.2625±0.0306),兩組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。Ⅰ組高于ⅢC組(0.2088±0.0300)。兩組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：(1)應(yīng)用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法,兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以有效的進(jìn)行分離,培養(yǎng)和傳代擴(kuò)增。(2)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)5-氮雜胞苷,血管緊張素Ⅱ,骨形態(tài)發(fā)生蛋白－2誘導(dǎo)后可分化為心肌樣細(xì)胞。(3)血管緊張素II誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化率優(yōu)于5-氮雜胞苷,5－氮雜胞苷優(yōu)于骨形態(tài)發(fā)生蛋白－2。
[Abstract]:Objective: to isolate and purify rabbit bone marrow mesenchymal stem cells by density gradient centrifugation combined with adherent culture. The differentiation rate of bone marrow mesenchymal stem cells into cardiomyocyte-like cells induced by three different inducers was compared. Methods: rabbit bone marrow mesenchymal stem cells were cultured by density gradient centrifugation and adherent culture. The biological shape of cultured cells was observed by inverted microscope. 鈪，

本文編號(hào)：1660233