本文選題：異基因外周血干細(xì)胞移植　切入點(diǎn)：移植物抗宿主病　出處：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】：目的：1)研究應(yīng)用清髓性預(yù)處理和個(gè)體化的按HLA位點(diǎn)不同的差異程度聯(lián)合多少不等的免疫抑制劑進(jìn)行親屬間HLA單倍體相合非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植(PBSCT)治療惡性血液病,通過臨床和實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證適合臨床應(yīng)用的能減少排斥和重度急性移植物抗宿主病(aGVHD)的新移植方案,并對(duì)單倍體移植后免疫功能重建進(jìn)行研究；2)前瞻性對(duì)比研究同期親屬間HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT治療惡性血液病的移植效果,探討HLA單倍體移植是否可以取得與HLA全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT治療惡性血液病相似的植入、移植物抗宿主病(GVHD)發(fā)生率、腫瘤復(fù)發(fā)率及長(zhǎng)期無白血病生存率(LFS)；3)前瞻性的對(duì)比研究同期HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT后兩組患者T、B、NK細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化,探討PBSCT后免疫功能重建的特點(diǎn),并對(duì)發(fā)生主要并發(fā)癥與未發(fā)生患者的免疫功能重建進(jìn)行對(duì)比研究。方法：1)HLA單倍體相合PBSCT治療惡性血液病52例,患者中位數(shù)年齡38(11～47)歲,男32例,女20例,HLA1個(gè)位點(diǎn)不合9例,2～3個(gè)位點(diǎn)不合43例。惡性血液病按移植時(shí)病情分為標(biāo)危型36例,高危型16例。HLA-A、B及DR位點(diǎn)分型均采用微量順序特異引物聚合酶鏈反應(yīng)(微量PCR-SSP)方法進(jìn)行。預(yù)處理方案為清髓性的,主要采用阿糖胞苷(Ara-C)+馬利蘭(Bu)+環(huán)磷酰胺(Cy)方案,預(yù)防GVHD均以環(huán)孢素(CsA)加短程甲氨蝶呤(MTX)為基礎(chǔ)方案,HLA1個(gè)位點(diǎn)不合時(shí)加用霉酚酸酯(MMF),HLA2～3個(gè)位點(diǎn)不合時(shí)在加用MMF基礎(chǔ)上再聯(lián)合抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)及抗CD25單克隆抗體,CsA于-1d開始使用,劑量為2.5mg·kg-1·d-1,能口服時(shí)改為5mg·kg-1·d-1,于+180d后逐漸減量,減到原劑量的2/3,到11個(gè)月后逐漸減量直到停用,MTX靜脈滴注劑量為+1d15mg/m2,+3、+6、+11d劑量為10mg/m2,MMF用量為1g·d-1分2次口服,于-1d開始,如無aGVHD,于+40d減半量,+90～+100d停用；兔抗人ATG2.5mg·kg-1×4d(-4～-1d)；抗CD25單克隆抗體20mg于0天輸注干細(xì)胞前及+4d各靜點(diǎn)1次。使用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)對(duì)供者進(jìn)行PBSC動(dòng)員,劑量為7～10μg·kg-1·d-1,于動(dòng)員后第5及第6天用血液細(xì)胞分離機(jī)(COBE Spectra)進(jìn)行PBSC單采,采集前檢測(cè)供者血常規(guī)(包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血涂片瑞氏染色后白細(xì)胞分類),采集后檢測(cè)PBSC單個(gè)核細(xì)胞數(shù)及CD34+細(xì)胞數(shù)并將PBSC經(jīng)中心靜脈回輸給患者；2)同期111例惡性血液病患者異基因PBSCT (allo-PBSCT),其中單倍體相合移植患者51例,同期全相合移植患者60例。預(yù)處理方案均為清髓性,主要采用改良Bu/Cy方案和Bu/Cy方案。單倍體與全相合移植患者均以經(jīng)典CsA加短程MTX作為基礎(chǔ)方案預(yù)防GVHD,單倍體移植患者另根據(jù)HLA位點(diǎn)不合的程度加用MMF和(或)ATG及抗CD25單克隆抗體。患者在預(yù)處理前行鞘內(nèi)注射MTX10～15mg或口服甲基環(huán)已亞硝脲(Me-CCNU)預(yù)防腦膜白血病的發(fā)生。兩組患者發(fā)生aGVHD后均加用甲潑尼龍(MP)治療,發(fā)生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)后一般給予潑尼松加硫唑嘌呤治療。移植物為經(jīng)G-CSF動(dòng)員的未進(jìn)行體外去除T細(xì)胞的PBSC;3)采用間接免疫熒光法,主要試劑為CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56一抗及二抗,首先制備單個(gè)核細(xì)胞懸液,再進(jìn)行T、B、NK亞群檢測(cè)。對(duì)移植前,移植后1月、3月、6月、12月及18月兩組患者的T(CD3+、CD4+、CD8+)、B(CD19+)、NK(CD16+、CD56+)細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化,并進(jìn)行組間比較。同時(shí)檢測(cè)100名健康人的T、B、NK亞群作為對(duì)照組,與單倍體組和全相合組移植前后各時(shí)間點(diǎn)免疫功能變化進(jìn)行比較。結(jié)果：1)52例患者均獲得完全、持久供者干細(xì)胞植入,單個(gè)核細(xì)胞(MNC)中位數(shù)13.9(8.6～31.0)×108/kg,CD34+細(xì)胞中位數(shù)為10.1(4.16～21.00)×106/kg,中性粒細(xì)胞≥0.5×109/L的中位時(shí)間為14(11～25)d,3d不輸注血小板(BPC)情況下BPC20×109/L的中位時(shí)間為16(9-26)d。26例發(fā)生aGVHD,標(biāo)危組18例,高危組8例,其中Ⅰ度20例,Ⅱ度6例。aGVHD累積發(fā)病率為50%,其中標(biāo)危組累積發(fā)病率為50%,高危組為50%。35例患者發(fā)生cGVHD,標(biāo)危組18例,高危組8例,局限型30例,廣泛型5例,4年累積發(fā)生率為70.4%,其中標(biāo)危組累積發(fā)病率為66.7%,高危組為62.5%。共有23例患者發(fā)生出血性膀胱炎(HC),男性15例,女性8例,其中Ⅰ度5例,Ⅱ度13例,Ⅲ度3例,Ⅳ度1例,均為遲發(fā)性,中位發(fā)病時(shí)間為移植后26(20～45)天,中位持續(xù)時(shí)間為17(7～70)天,累積發(fā)病率為44.2%。單倍體移植52例,中位隨訪時(shí)間為30(3～90)個(gè)月,白血病復(fù)發(fā)7例,有4例患者復(fù)發(fā)后行供者干細(xì)胞細(xì)胞輸注(DSI)治療,其中1例標(biāo)危AML患者DSI后死于重度GVHD,1例標(biāo)危ALL患者經(jīng)DSI治療后再次緩解(CR)仍在繼續(xù)隨訪,3年累積復(fù)發(fā)率為17.6%,其中標(biāo)�；颊呃鄯e復(fù)發(fā)率17%,高�；颊呃鄯e復(fù)發(fā)率18.3%。共死亡11例,3年預(yù)期總LFS為71.8%,其中標(biāo)危組76.4%,高危組60.2%；2)111例患者均獲得完全、持久供者干細(xì)胞植入,51例單倍體患者移植的MNC中位數(shù)14.5(8.6～31.0)×108/kg,CD34+細(xì)胞中位數(shù)為10.9(4.16～21.00)×106/kg；60例全相合患者移植的MNC中位數(shù)10.59(7～19.9)×108/kg,CD34+細(xì)胞中位數(shù)為5.9(2.86～10.2)×106/kg。單倍體移植患者中性粒細(xì)胞≥0.5×109/L的中位時(shí)間為14d,BPC20×109/L的中位時(shí)間為15d,而60例全相合移植患者的中位時(shí)間分別為12d,13d；51例單倍體移植患者25例發(fā)生aGVHD,累積總aGVHD發(fā)病率為49%,標(biāo)危組發(fā)病率為48.6%,高危組發(fā)病率為50%,其中Ⅰ度20例,Ⅱ度5例,無一例發(fā)生重度aGVHD。有33例發(fā)生cGVHD,局限型30例,廣泛型3例,4年累積發(fā)病率為70.4%,標(biāo)危組發(fā)病率為71.4%,高危組發(fā)病率為66.2%,51例單倍體移植患者無白血病存活40例,3年預(yù)期總LFS為74.5%,其中標(biāo)危組77.3%,高危組68.2%。共有7例復(fù)發(fā)(13.7%),標(biāo)危型復(fù)發(fā)5例,高危型復(fù)發(fā)2例,其中AML復(fù)發(fā)3例,ALL復(fù)發(fā)4例,3年預(yù)期總復(fù)發(fā)率為18%,標(biāo)危組為17.7%,高危組為18.3%；60例全相合移植患者中14例發(fā)生aGVHD,其中Ⅰ度10例,Ⅱ度2例,Ⅲ度2例,累積總aGVHD發(fā)病率為23.3%,標(biāo)危組發(fā)病率為24.4%,高危組發(fā)病率為20%。37例患者發(fā)生cGVHD,局限型32例,廣泛型5例,4年累積發(fā)病率為58.1%,標(biāo)危組發(fā)病率為57.8%,高危組發(fā)病率為60%。60例全相合移植患者無白血病存活46例,3年預(yù)期總LFS為72.1%,其中標(biāo)危組77.6%,高危組52.7%。共有10例復(fù)發(fā)(16.7%),標(biāo)危型復(fù)發(fā)7例,高危型復(fù)發(fā)3例,其中AML3例,ALL 6例,CML1例,3年預(yù)期總復(fù)發(fā)率為20.2%,標(biāo)危組為18.3%,高危組為27.5%。單倍體移植后aGVHD發(fā)生率高于全相合移植,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),cGVHD發(fā)生率、復(fù)發(fā)率和LFS差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3)Allo-PBSCT患者與正常對(duì)照組比較,移植前CD4+%,移植后1個(gè)月CD3+%、CD4+%、CD4+/CD8+、3個(gè)月CD4+%、CD4+/CD8+%及6個(gè)月CD4+%均低于正常對(duì)照組(P0.05),移植后3月及6月CD8+%高于正常對(duì)照組(P0.05),余均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；單倍體移植后T細(xì)胞亞群包括CD3+%在移植后+1月明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,移植后+3月開始恢復(fù),移植后+12月基本恢復(fù)至正常對(duì)照水平,CD4+%在移植后+3月下降最明顯,+6月時(shí)開始有所恢復(fù),與移植前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CD8+%在移植后開始升高,+6月時(shí)升高最明顯,+12月又下降,+18月基本恢復(fù)正常對(duì)照水平,CD4+/CD8+移植后開始逐漸下降,+3月時(shí)比值最低,+6月時(shí)開始恢復(fù),+12月基本恢復(fù)正常；兩組CD3+%均在移植后+1月明顯下降,單倍體組下降較全相合組明顯,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,后均逐漸恢復(fù),至移植后+12月時(shí)兩組患者均基本恢復(fù)至正常對(duì)照水平,CD4+%在移植后+1月～+3月均明顯下降,+6月時(shí)全相合組CD4+%已明顯恢復(fù),但單倍體組仍明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩組患者CD8+%移植后均升高,尤以單倍體組明顯,+6月時(shí)單倍體組明顯高于全相合組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CD4+/CD8+移植后均下降,+3月時(shí)兩組均達(dá)到最低,+6月時(shí),全相合組CD4+/CD8+比值恢復(fù),而單倍體組仍低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD19+%移植后升高,在移植后+1月均最明顯,后均有下降。兩組患者CD16+%移植后均升高,尤以+1月時(shí)明顯,+12月單倍體組CD16+%低于全相合組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩組患者CD56+%移植后動(dòng)態(tài)變化與移植前及正常對(duì)照差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；單倍體移植組發(fā)生aGVHD與未發(fā)生aGVHD免疫功能重建比較：CD3+%在移植后+1月時(shí)發(fā)生與未發(fā)生兩組均下降,+3月時(shí)未發(fā)生aGVHD組CD3+%高于發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CD4+%在+3月時(shí)未發(fā)生aGVHD組高于發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；單倍體移植重度感染與未感染患者免疫功能比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,移植后+3月全相合無重度感染者CD3+%、CD8+%低于單倍體無感染組,而CD4+%高于單倍體組；+6月全相合無感染組CD4+%高于單倍體無感染組；發(fā)生cGVHD的兩組患者免疫功能變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,未發(fā)生cGVHD的兩組患者免疫功能變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；8例復(fù)發(fā)患者與未復(fù)發(fā)患者免疫功能無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：1)清髓性預(yù)處理方案和依HLA不合位點(diǎn)差異的程度聯(lián)合多少不等含或不含ATG和抗CD25單克隆抗體免疫抑制劑的預(yù)防GVHD方案,移植物為經(jīng)G-CSF動(dòng)員的非體外去T細(xì)胞的PBSC的HLA單倍體移植方案治療惡性血液病安全可行；2)單倍體非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植造血功能重建快,供者易于接受,可多次采集,而重度aGVHD及廣泛型cGVHD發(fā)生率并不高；3)HLA單倍體與HLA全相合非體外去T細(xì)胞的PBSCT治療惡性血液病時(shí)的植入、cGVHD發(fā)生率、復(fù)發(fā)率及長(zhǎng)期LFS相似。單倍體移植時(shí)aGVHD高于全相合移植,但重度aGVHD發(fā)生率兩組相似；4)單倍體與全相合非體外去T細(xì)胞外周血干細(xì)胞移植造血功能重建快,而重度aGVHD及廣泛型cGVHD發(fā)生率均不高；5)與正常人對(duì)照組對(duì)比,HLA單倍體與全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT后患者免疫功能均于移植1年后同期恢復(fù)正常,組間比較移植后1年免疫功能也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；6)HLA單倍體移植后+6月內(nèi)免疫損傷較HLA全相合明顯,免疫重建遲于HLA全相合移植；7)HLA單倍體與全相合非體外去T細(xì)胞PBSCT后T、B、NK亞群變化以T細(xì)胞最為明顯并最具臨床及實(shí)驗(yàn)室意義。
[Abstract]:Objective: To study application of clear differences in the degree of 1) according to the HLA of different sites of myeloid pretreatment and individualized combined with varying amounts of immunosuppressants related HLA haploidentical T cells in peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT) for the treatment of malignant hematological diseases, through clinical and laboratory test for clinical application can reduce rejection and severe acute graft-versus-host disease (aGVHD) of the new transplant program, and to study the immune reconstitution of haploid after transplantation; 2) transplantation prospective comparative study between HLA and HLA over the same period the relatives of haploid matched non T cells in vitro to PBSCT for treatment of malignant hematological disease, to explore whether HLA can be achieved with haploidentical hematopoietic stem cell transplantation HLA matched T cells without in vitro PBSCT treatment of malignant hematological diseases with similar engraftment, graft-versus-host disease (GVHD) incidence rate, tumor recurrence rate and long-term survival rate of leukemia students (LFS); 3) prospective comparative study of HLA and HLA over the same period of haploid matched without in vitro T cells after PBSCT two groups T, B, dynamic changes of NK cell subsets, explore the characteristics of immune reconstitution after PBSCT, and the major complications occurred and no immune reconstitution in patients with comparative study.: 1) HLA haploidentical PBSCT in 52 patients with malignant hematologic disease treatment, patients with a median age of 38 (11~47) years old, male 32 cases, female 20 cases, 9 cases of HLA1 loci mismatched, 2~3 loci mismatched in 43 cases. Malignant hematological diseases by transplantation was divided into standard risk type in 36 cases, 16 cases of high risk.HLA-A type B and DR genotyping were used to trace sequence specific primers polymerase chain reaction (PCR-SSP trace method). The pretreatment scheme for myeloablative, mainly by cytarabine (Ara-C) + busulfan (Bu) + cyclophosphamide (Cy) scheme, to prevent GVHD cyclosporine (CsA) plus methotrexate (M TX)涓哄熀紜，

本文編號(hào)：1658320