本文選題：人骨髓　切入點(diǎn)：間充質(zhì)干細(xì)胞　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2008年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 第一部分人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增后的生物學(xué)特性及聯(lián)合造血干細(xì)胞移植治療血液病的研究 目的:體外擴(kuò)增源于人骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),鑒定其生物學(xué)特性,及探討其聯(lián)合造血干細(xì)胞移植治療血液病的可行性和安全性。方法:體外擴(kuò)增來(lái)自16例健康供者及4例經(jīng)過(guò)化療的惡性血液病患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞。擴(kuò)增后的細(xì)胞經(jīng)免疫表型檢測(cè)、成骨和成脂肪誘導(dǎo)、染色體分析、衰老相關(guān)性β-半乳糖苷酶染色和與混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),進(jìn)一步鑒定其是否為臨床所需的MSCs。體外擴(kuò)增后的MSCs聯(lián)合造血干細(xì)胞共移植治療血液病患者(自體移植5例、HLA全相合異基因移植15例、HLA半相合親緣供者非去T細(xì)胞移植2例),觀察輸注反應(yīng)和移植后臨床特征。結(jié)果:①?gòu)?5.6±5.1ml骨髓(來(lái)自16例正常供者)樣本中成功擴(kuò)增得約(1.82±0.38)×10~6/kg(受者體重)MSCs,均體外培養(yǎng)3～4代。其免疫表型為CD73、CD90、CD105陽(yáng)性,CD34、CD45、CD38、CD10、CD20、CD33、HLA-DR陰性,純度達(dá)95%以上;具有成骨和成脂肪分化能力,可抑制MLRs中的淋巴細(xì)胞增殖,染色體核型正常,衰老相關(guān)性β-半乳糖苷酶染色絕大多數(shù)細(xì)胞呈陰性、少數(shù)呈弱陽(yáng)性。②從4例化療后的惡性血液病患者(3例NHL,1例ANLL)骨髓中分離培養(yǎng)獲得的MSCs經(jīng)擴(kuò)增3～4代后獲得MSCs為(1.93±0.57)×10~6/kg。其各項(xiàng)生物學(xué)特征與正常供者骨髓來(lái)源的MSCs一致。③5例進(jìn)行自體外周血干細(xì)胞移植的惡性血液病患者無(wú)論是輸注自體的MSCs(4例)還是異體的MSCs(1例,MSCs來(lái)自健康供者),無(wú)輸注不良反應(yīng)。且患者均造血重建迅速,無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥,已隨訪45～70月。④12例HLA全相合同胞供者移植患者輸注來(lái)源于同一供者骨髓的MSCs無(wú)輸注不良反應(yīng)。所有患者造血重建成功,移植后一月均呈100%供者型造血。2例(16.67%)出現(xiàn)Ⅱ～Ⅳ度aGVHD,2例(16.67%)出現(xiàn)廣泛性cGVHD。4例出現(xiàn)CMV感染,均治愈。有7例已隨訪29～57月,5例死亡。⑤3例HLA半相合親緣供者非去T細(xì)胞移植患者輸注來(lái)源于同一供者骨髓的MSCs無(wú)輸注不良反應(yīng)。所有患者造血重建成功,移植后一月均呈100%供者型造血。2例因預(yù)防或治療疾病復(fù)發(fā)予DLI后才發(fā)生Ⅳ度aGVHD和廣泛型cGVHD。另1例僅發(fā)生Ⅰ度急性GVHD和局限性慢性GVHD。2例現(xiàn)已分別隨訪了53月和43月,1例死亡。結(jié)論:體外擴(kuò)增人骨髓中貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞3～4代后經(jīng)免疫分型檢測(cè)和兩系分化誘導(dǎo)符合MSCs,且足夠數(shù)量、純度高、核型正常、幾乎沒(méi)有老化,可應(yīng)用于臨床。在3種造血干細(xì)胞移植模式中,給患者輸注體外擴(kuò)增的BM-MSCs,均是安全可行的。要明確BM-MSCs輸注對(duì)于移植后造血重建、免疫重建、GVHD的影響,還需要更大樣本量和將患者分組統(tǒng)計(jì)分析。 第二部分真性紅細(xì)胞增多癥骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其功能特性的研究 目的:分離、培養(yǎng)真性紅細(xì)胞增多癥(PV)患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),并對(duì)MSCs的功能、特性進(jìn)行研究。方法:采集9例初診PV患者和6例正常個(gè)體的骨髓,應(yīng)用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法獲取MSCs,并傳代、擴(kuò)增。擴(kuò)增至第3代培養(yǎng)細(xì)胞,瑞氏染色觀察細(xì)胞形態(tài),隔天消化細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,電鏡檢測(cè)MSCs的超微結(jié)構(gòu),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSCs免疫表型和細(xì)胞周期,通過(guò)油紅O染色、Von Kossa染色檢測(cè)MSCs向脂肪、骨的分化,常規(guī)核型分析檢測(cè)MSCs染色體,等位基因特異性-聚合酶鏈反應(yīng)(AS-PCR)檢測(cè)其JAK2V617F點(diǎn)突變,RT-PCR檢測(cè)其造血因子在mRNA水平的表達(dá)。結(jié)果:PV和正常個(gè)體來(lái)源的MSCs均呈成纖}諫，

本文編號(hào)：1650896