發(fā)布時(shí)間：2018-03-22 05:20

  本文選題：細(xì)粒棘球絳蟲　切入點(diǎn)：丙酮酸脫氫酶　出處：《中國(guó)血吸蟲病防治雜志》2015年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的克隆表達(dá)細(xì)粒棘球絳蟲丙酮酸脫氫酶(EgPDH)基因,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)與分析。方法提取細(xì)粒棘球絳蟲Total-RNA并反轉(zhuǎn)錄成c DNA,以此為模板擴(kuò)增目的基因。將目的基因連接至p ET28b構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)進(jìn)行重組表達(dá)。采用Signal P4.1、TMHMM sever v.2.0和Target P1.1對(duì)EgPDH編碼蛋白序列分別進(jìn)行信號(hào)肽、跨膜區(qū)及亞細(xì)胞定位的預(yù)測(cè)。采用SMART分析EgPDH編碼蛋白結(jié)構(gòu)域,用BLASTP和Gene Doc進(jìn)行EgPDH同源序列比對(duì)及保守位點(diǎn)分析,并采用MEGA6軟件鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果成功克隆并構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET28bEgPDH,目的基因大小約1 080 bp,重組蛋白以可溶性形式表達(dá)。EgPDH為信號(hào)肽的分泌蛋白,并含轉(zhuǎn)酮酶結(jié)構(gòu)域,其高度保守酶活性位點(diǎn)分別為Glu57、Leu72、Ile86、Phe114。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示EgPDH與多房棘球絳蟲PDH親緣關(guān)系最近。結(jié)論成功克隆表達(dá)了細(xì)粒棘球絳蟲EgPDH基因并進(jìn)行了生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析,為進(jìn)一步研究該蛋白功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone and express Echinococcus granulosus pyruvate dehydrogenase EgPDH gene. Methods Echinococcus granulosus Total-RNA was extracted from Echinococcus granulosus and transformed into c DNA, which was used as template to amplify the target gene. The target gene was ligated to p ET28b to construct recombinant plasmid and transformed into Escherichia coli BL21DE3. Signal P4.1TMHMM sever v.2.0 and Target P1.1 were used to signal the sequence of EgPDH encoding protein, respectively. The prediction of transmembrane region and subcellular localization. SMART was used to analyze the EgPDH coding protein domain, and BLASTP and Gene Doc were used to analyze the EgPDH homologous sequence alignment and conserved sites. The phylogenetic tree was constructed by MEGA6 software adjacency method. Results the recombinant plasmid pET28bEgPDHwas successfully cloned and constructed. The target gene size was about 1080bp. the recombinant protein expressed in soluble form was expressed as secretory protein of signal peptide and contained transketozyme domain. The highly conserved enzyme activity loci were Glu57 Leu72Ile86Phe114.The phylogenetic tree analysis showed that EgPDH was closely related to PDH of Echinococcus multilocularis. Conclusion the EgPDH gene of Echinococcus granulosus was cloned and analyzed by bioinformatics. It lays a foundation for further study of the function of the protein.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院;中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲病和絲蟲病合作中心 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81201315) 國(guó)家科技重大專項(xiàng)(2012ZX10004-220) 衛(wèi)生部寄生蟲與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(WSB-KTKT201304)
【分類號(hào)】：R383.3

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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6 曹雋U，

本文編號(hào)：1647240