本文選題：Nodal信號通路　切入點：小鼠胚胎干細胞　出處：《中國病理生理雜志》2015年11期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探討激活Nodal信號通路在小鼠胚胎干細胞(embryonic stem cells,ESC)向定型內(nèi)胚層(definitive endoderm,DE)分化中的作用,尋找小鼠ESC向DE分化的最佳培養(yǎng)體系。方法:根據(jù)培養(yǎng)基的不同,實驗分為3組:胚胎干細胞組(基礎培養(yǎng)+LIF)、自然分化組(基礎培養(yǎng)基)和activin A組(基礎培養(yǎng)基+50μg/L activin A)。細胞培養(yǎng)1~7 d,收集不同作用時點(1、3、5、7 d)的細胞及細胞爬片。用流式細胞術檢測CXCR4陽性細胞的比例;免疫細胞化學法檢測CXCR4蛋白的表達;Western blot檢測OCT4及CXCR4蛋白的表達。結果:流式細胞術檢測結果提示,隨著培養(yǎng)時間的延長,CXCR4陽性細胞的比例,胚胎干細胞組在1~7 d無明顯變化,自然分化組和activin A組逐漸增高,第5天達高峰(P0.05),其中activin A組最高(P0.05)。細胞免疫組化結果顯示CXCR4陽性細胞呈棕褐色或棕黃色。Western blot的結果提示,隨著培養(yǎng)時間的延長,胚胎干細胞組OCT4和CXCR4蛋白表達無明顯變化;自然分化組和activin A組的CXCR4蛋白的表達逐步增高,OCT4蛋白的表達逐步下降,第5天達高峰(P0.05),其中activin A組的表達最明顯(P0.05)。結論:在小鼠ESC分化過程中,在誘導培養(yǎng)的第5天,DE的比例最高。激活Nodal信號通路可以促進小鼠ESC向具有CXCR4分子標志的DE分化,有利于獲取更多的DE細胞。
[Abstract]:Objective: to investigate the role of activating Nodal signaling pathway in the differentiation of mouse embryonic stem cells (ESCs) into stereotyped endoderm cells, and to find out the best culture system for the differentiation of mouse ESC into DE. Methods: according to the different culture medium, The experiment was divided into three groups: embryonic stem cells group (basic culture group, natural differentiation group (basic medium) and activin A group (basic medium 50 渭 g / L activin A). Cell culture time was 1 ~ 7 days, collecting cells and cell climbing slices at different time points. The percentage of CXCR4 positive cells was detected by flow cytometry. The expression of CXCR4 protein was detected by immunocytochemistry and the expression of OCT4 and CXCR4 protein was detected by Western blot. Results: the results of flow cytometry showed that the proportion of CXCR4 positive cells in embryonic stem cells group did not change significantly at 1 and 7 days with the extension of culture time. The natural differentiation group and activin A group increased gradually, and reached the peak of P0.05 on the 5th day. The highest level of P0.05 was found in the activin A group. The results of immunohistochemistry showed that the CXCR4 positive cells were brown or brown. Western blot showed that with the extension of culture time. In embryonic stem cells group, the expression of OCT4 and CXCR4 protein was not significantly changed, and the expression of CXCR4 protein in naturally differentiated group and activin A group was gradually increased, and the expression of OCT4 protein decreased gradually. On the 5th day, the expression of P0.05 was the most obvious in activin A group. Conclusion: during the differentiation of ESC in mice, the proportion of DE was highest on the 5th day after induction and culture. Activation of Nodal signaling pathway could promote the differentiation of ESC into DE with CXCR4 markers. It is helpful to obtain more DE cells.
【作者單位】： 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：廣東省科技社會發(fā)展項目(No.2012B031800030)
【分類號】：R321

【參考文獻】

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1 程婷婷;孫瑩璞;;Nodal信號通路在人胚胎干細胞中的作用機制[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2014年02期

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5 李松,竇忠英,宋文剛,苗增民,高佩安,江新泉;培養(yǎng)方式對自原始生殖細胞分離克隆小鼠胚胎干細胞的影響[J];濟寧醫(yī)學院學報;2005年01期

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4 孫瑩璞;孔慧娟;耿嘉暄;;小鼠胚胎干細胞系的建立及影響因素探討[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

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9 高嬌;要暉宇;毛寧;;抑制PGE2 Cox1合成途徑可促進小鼠胚胎干細胞來源血液血管干細胞的產(chǎn)生[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

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10 秦茂林;小鼠胚胎干細胞的分離、鑒定和神經(jīng)定向誘導分化[D];第三軍醫(yī)大學;2001年

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本文編號：1646701