本文選題：Nodal信號(hào)通路　切入點(diǎn)：小鼠胚胎干細(xì)胞　出處：《中國(guó)病理生理雜志》2015年11期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:探討激活Nodal信號(hào)通路在小鼠胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ESC)向定型內(nèi)胚層(definitive endoderm,DE)分化中的作用,尋找小鼠ESC向DE分化的最佳培養(yǎng)體系。方法:根據(jù)培養(yǎng)基的不同,實(shí)驗(yàn)分為3組:胚胎干細(xì)胞組(基礎(chǔ)培養(yǎng)+LIF)、自然分化組(基礎(chǔ)培養(yǎng)基)和activin A組(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+50μg/L activin A)。細(xì)胞培養(yǎng)1~7 d,收集不同作用時(shí)點(diǎn)(1、3、5、7 d)的細(xì)胞及細(xì)胞爬片。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CXCR4陽(yáng)性細(xì)胞的比例;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)CXCR4蛋白的表達(dá);Western blot檢測(cè)OCT4及CXCR4蛋白的表達(dá)。結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果提示,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),CXCR4陽(yáng)性細(xì)胞的比例,胚胎干細(xì)胞組在1~7 d無(wú)明顯變化,自然分化組和activin A組逐漸增高,第5天達(dá)高峰(P0.05),其中activin A組最高(P0.05)。細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示CXCR4陽(yáng)性細(xì)胞呈棕褐色或棕黃色。Western blot的結(jié)果提示,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),胚胎干細(xì)胞組OCT4和CXCR4蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化;自然分化組和activin A組的CXCR4蛋白的表達(dá)逐步增高,OCT4蛋白的表達(dá)逐步下降,第5天達(dá)高峰(P0.05),其中activin A組的表達(dá)最明顯(P0.05)。結(jié)論:在小鼠ESC分化過(guò)程中,在誘導(dǎo)培養(yǎng)的第5天,DE的比例最高。激活Nodal信號(hào)通路可以促進(jìn)小鼠ESC向具有CXCR4分子標(biāo)志的DE分化,有利于獲取更多的DE細(xì)胞。
[Abstract]:Objective: to investigate the role of activating Nodal signaling pathway in the differentiation of mouse embryonic stem cells (ESCs) into stereotyped endoderm cells, and to find out the best culture system for the differentiation of mouse ESC into DE. Methods: according to the different culture medium, The experiment was divided into three groups: embryonic stem cells group (basic culture group, natural differentiation group (basic medium) and activin A group (basic medium 50 渭 g / L activin A). Cell culture time was 1 ~ 7 days, collecting cells and cell climbing slices at different time points. The percentage of CXCR4 positive cells was detected by flow cytometry. The expression of CXCR4 protein was detected by immunocytochemistry and the expression of OCT4 and CXCR4 protein was detected by Western blot. Results: the results of flow cytometry showed that the proportion of CXCR4 positive cells in embryonic stem cells group did not change significantly at 1 and 7 days with the extension of culture time. The natural differentiation group and activin A group increased gradually, and reached the peak of P0.05 on the 5th day. The highest level of P0.05 was found in the activin A group. The results of immunohistochemistry showed that the CXCR4 positive cells were brown or brown. Western blot showed that with the extension of culture time. In embryonic stem cells group, the expression of OCT4 and CXCR4 protein was not significantly changed, and the expression of CXCR4 protein in naturally differentiated group and activin A group was gradually increased, and the expression of OCT4 protein decreased gradually. On the 5th day, the expression of P0.05 was the most obvious in activin A group. Conclusion: during the differentiation of ESC in mice, the proportion of DE was highest on the 5th day after induction and culture. Activation of Nodal signaling pathway could promote the differentiation of ESC into DE with CXCR4 markers. It is helpful to obtain more DE cells.
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：廣東省科技社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(No.2012B031800030)
【分類號(hào)】：R321

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1646701