本文選題：福氏2a志賀氏菌　切入點：ArgT蛋白　出處：《沈陽藥科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 志賀氏菌屬(Shigella spp.)細菌俗稱痢疾桿菌,是一類不形成芽孢的革蘭氏陰性桿菌,能夠通過侵襲腸上皮細胞,引起以發(fā)熱、腹痛、腹瀉為特征的典型痢疾癥狀。據(jù)WHO統(tǒng)計,每年約有1.647億人感染痢疾,110萬人死亡,大多數(shù)為5歲以下的兒童。福氏志賀氏菌是發(fā)展中國家主要的感染菌株,2a血清是主要的血清型。在我國,每年大約有2000萬人次感染痢疾,感染或大流行的痢疾桿菌中50-70%是由福氏2a志賀氏菌引起,因此,志賀氏菌的基礎(chǔ)研究對我國衛(wèi)生防疫工作尤為重要。 有研究表明,福氏2a志賀氏菌在37℃時發(fā)揮完整的細胞侵襲力,而在30℃時卻不能侵襲上皮細胞。本實驗室對福氏2a志賀氏菌2457T不同培養(yǎng)溫度下全菌蛋白的比較蛋白質(zhì)組研究發(fā)現(xiàn):在37℃培養(yǎng)至穩(wěn)定期時,ArgT蛋白豐度很低,而在30℃時卻明顯提高。ArgT蛋白又稱賴氨酸、鳥氨酸和精氨酸轉(zhuǎn)運蛋白,定位于細胞周質(zhì)間隙內(nèi),行使著將細胞外氨基酸轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)的功能。為進一步研究ArgT蛋白在志賀氏菌毒力發(fā)揮中的作用,本研究采用改進的λ-Red重組系統(tǒng)成功構(gòu)建了argT缺失突變株,利用定點突變的方法成功構(gòu)建了ArgT過表達突變株,并對所得突變株進行了一系列的研究。結(jié)果表明:ArgT對菌體的生長及代謝影響不大;對野生株和突變株進行競爭性侵襲HeLa細胞的毒力評價模型及小鼠肺部侵襲發(fā)現(xiàn),argT缺失對毒力無影響,而過表達卻使毒力明顯下降,這些實驗推測argT是福氏志賀氏菌中一個新的抗毒力基因;利用雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)對野生株和突變株進行37℃全菌蛋白的比較蛋白組學(xué)研究,檢測到10個蛋白差異點,代表9種蛋白,其中ArgT過表達突變體中外膜蛋白OmpA表達下調(diào),說明ArgT影響細菌的通透性;熱休克蛋白HtrA在ArgT不同的表達體中的差異表達引起了我們的注意。利用GST-pulldown技術(shù)篩選與ArgT相互作用的蛋白,經(jīng)質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)外膜蛋白調(diào)節(jié)子OmpR蛋白與之發(fā)生相互作用,并進行了WestemBlotting體外驗證,結(jié)果表明兩者存在相互作用。OmpR是雙組分滲透壓感知調(diào)節(jié)系統(tǒng)(OmpR/EnvZ)的一部分,是一個毒力相關(guān)因子,可以調(diào)節(jié)vir基因和OmpF/C的表達。 所以本研究得出:ArgT對福氏志賀氏菌的代謝影響不大,但過表達會造成毒力的下降,并使膜的通透性改變,影響物質(zhì)的轉(zhuǎn)運。
[Abstract]:Shigella spp.bacteria, commonly known as Shigella spp.., are a class of gram-negative bacilli that do not form spores and can cause typical dysentery symptoms characterized by fever, abdominal pain and diarrhoea by invading intestinal epithelial cells. According to WHO statistics, About 164.7 million people are infected with dysentery every year, 1.1 million people die, most of them are children under the age of five. Shigella flexneri is the main infection strain of Shigella flexneri in developing countries, serotype 2a is the main serotype. In our country, about 20 million people are infected with dysentery every year. Shigella flexneri 2a is responsible for 50-70% of the infected or endemic Shigella dysenteriae. Therefore, the basic research of Shigella is particularly important to the health and epidemic prevention work in China. Studies have shown that Shigella flexneri 2a exerts complete cell invasiveness at 37 鈩，

本文編號：1646373