本文選題：調(diào)節(jié)性T細胞　切入點：γδT細胞　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 第一部分小鼠調(diào)節(jié)性γ6T細胞的初步研究 調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory T cells, Tregs)是T細胞的一個亞群,能通過影響其它免疫細胞的活性來發(fā)揮抑制免疫應答的功能。近年來,調(diào)節(jié)性T細胞成為免疫學領域的一個研究熱點：經(jīng)典的CD4+CD25+TCRαβTreg的功能已經(jīng)基本明了,CD4+CD25- T細胞在體外經(jīng)過anti-TCR/CD3e的刺激和TGF-β的誘導可以轉(zhuǎn)變?yōu)镃D4+CD25+Treg,并且高表達Treg的特異性標記物Foxp3。γδT細胞雖然只占總T細胞的一小部分,但其獨特的抗原識別模式使得γδT細胞在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用。近年來,許多研究結(jié)果表明γδT細胞具有免疫調(diào)節(jié)功能。我們感興趣的是小鼠的γδT細胞是否也具有免疫調(diào)節(jié)表型的亞群,以及是否可以在體外經(jīng)過anti-TCR的刺激和TGF-p的誘導而產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)功能的γδT細胞。我們以小鼠脾臟的T細胞為研究體系,利用流式染色和RT-PCR方法檢測γδT細胞Foxp3的表達情況。結(jié)果顯示,新鮮分離的小鼠脾臟γδT細胞并不表達Foxp3。然而,當脾臟T細胞在固相化anti-TCRγδ抗體刺激下培養(yǎng),并添加TGF-β(濃度為5ng/ml)誘導5-8天后,Realtime PCR和免疫熒光染色結(jié)果顯示,TGF-p誘導組的γδT細胞出現(xiàn)Foxp3的表達,與CD25表達相一致,而未誘導組的γδT細胞基本無Foxp3的表達。此外,相對于誘導組的TCRγδ+CD25-T細胞,誘導組的TCRγδ+CD25+T細胞不僅表達Foxp3,還高表達免疫調(diào)節(jié)相關分子TGF-p和GITR。隨后,我們通過體外功能實驗證明誘導組的γδT細胞能夠明顯抑制anti-CD3抗體對初始T細胞的活化和增殖作用。綜上所述,小鼠γδT細胞在經(jīng)過固相化anti-TCRγδ刺激和TGF-p誘導后可以產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)表型和功能的細胞。 第二部分腫瘤過繼免疫治療中γδT細胞趨化機理的初步研究 γδT細胞是一類不同于αβT細胞的特殊細胞。近年的研究表明,無論是體內(nèi)還是體外,活化的γδT細胞都具有很強的殺傷各種實體腫瘤和血液腫瘤的活性。因此γδT細胞被認為是用于腫瘤過繼免疫治療很有前景的細胞。然而γδT細胞在體內(nèi)是否能夠有效分布于腫瘤組織是其發(fā)揮抗腫瘤作用的前提。本實驗室建立了一套固相化anti-TCRγδ抗體體外擴增培養(yǎng)γδT細胞的方法,所獲γδT細胞制劑在體外具有很強的殺傷腫瘤細胞的活性。為了考察γδT細胞制劑在體內(nèi),特別是腫瘤組織的分布規(guī)律,我們首先分析了培養(yǎng)后γδT細胞表面趨化因子受體的表達情況,隨后以結(jié)直腸癌為研究對象,分析了結(jié)直腸癌細胞系和結(jié)直腸癌組織標本中趨化因子的表達情況,最后利用趨化實驗和趨化封閉實驗考察了結(jié)直腸癌組織對γδT細胞的趨化作用。 γδT細胞制劑制備于固相化抗體體外擴增的人外周血單個核細胞,γδT細胞在擴增前后趨化因子受體的表達情況采用免疫熒光染色和流式細胞術進行分析。結(jié)果顯示CCR5和CXCR3是體外擴增的Vδ1T細胞和Vδ2T細胞表面主要的趨化因子受體。用RT-PCR法檢測4種人結(jié)直腸癌細胞系和10例人結(jié)直腸癌組織標本(每例均包括腫瘤組織和瘤旁組織)趨化因子的表達情況。結(jié)果表明,不同的人結(jié)直腸癌細胞系能夠表達不同的趨化因子；人結(jié)直腸癌組織標本中腫瘤組織和瘤旁組織也存在多種趨化因子的表達,其中均包括CCR5和CXCR3的配體分子。因此,我們以兩種結(jié)腸癌細胞系(HT-29和HR8348)為代表,進行了腫瘤細胞對γδT細胞的趨化實驗,并利用CCR5和CXCR3封閉抗體考察了兩種趨化因子受體在γδT細胞趨化作用中的貢獻。結(jié)果顯示經(jīng)過體外擴增后的γδT細胞具有向腫瘤細胞遷移的能力,且趨化作用可以部分被CCR5和CXCR3抗體封閉。我們的研究結(jié)果表明,體外擴增的γδT細胞具有分布于結(jié)直腸癌組織的能力,該能力為其進一步在腫瘤局部發(fā)揮殺傷作用奠定了基礎。
[Abstract]:Preliminary study on regulatory gamma 6T cells in the first part of mice
Regulatory T cells (Regulatory T cells, Tregs) is a subgroup of T cells, can play the function of suppressing the immune response by affecting the activity of other immune cells. In recent years, regulatory T cells become a hot research topic in the field of immunology: classic CD4+CD25+TCR alpha beta Treg function has been basically clear. CD4+CD25- T cells in vitro induced by anti-TCR/CD3e stimulation and TGF- beta can be changed into CD4+CD25+Treg, and high expression of cell specific markers Foxp3. gamma delta T Treg account for only a small part of the total T cells, but its unique antigen recognition pattern makes gammadelta T cells play an important role in the immune system in recent years, many research results show that gamma delta T cells have immune regulatory function. We are interested in murine gammadelta T cells also have immunomodulatory phenotype subsets, and whether you can in vitro by By anti-TCR stimulation and TGF-p and have the immunoregulatory function of gamma delta T cells. We use mouse spleen T cells as the research system, expressed by flow cytometry staining and RT-PCR Foxp3 method for the detection of gamma delta T cells. The results showed that freshly isolated spleen cells did not express T gamma delta Foxp3. however, when the T cells in the spleen of anti-TCR gammadelta antibody stimulation in solid culture, and add the TGF- beta (concentration of 5ng/ml) after 5-8 days of induction, Realtime PCR and immunofluorescence staining showed that TGF-p induced group of gamma delta T cells Foxp3 expression, consistent with the expression of CD25, expression and non induced group gamma delta T cells is essentially free of Foxp3. In addition, compared with the TCR gamma delta +CD25-T cell group, induction group TCR gamma delta +CD25+T cells not only express Foxp3, but also the high expression of immune related molecules TGF-p and GITR. then we can pass the test body The induction of gamma delta T cells in the induction group can significantly inhibit the activation and proliferation of anti-CD3 antibody on the initial T cells. In conclusion, the gamma delta T cells can produce immunoregulatory phenotype and function cells after solid anti-TCR anti-TCR delta stimulation and TGF-p induction.
Preliminary study on the chemotactic mechanism of gamma delta T cells in the second part of the tumor adoptive immunotherapy
Gamma delta T cells were different from alpha beta T cells specific cells. Recent studies have shown that either in vivo or in vitro, activation of gamma delta T cells have strong killing a variety of solid tumors and hematological tumor activity. Therefore gamma delta T cells were considered for tumor adoptive immunotherapy is promising cells. However, gamma delta T cells in vivo is effectively distributed in tumor tissue is the prerequisite for the antitumor effect. The laboratory has established a set of immobilized anti-TCR antibody in vitro culture method of gamma delta gamma delta T cells, the gamma delta T cell preparation has strong killing tumor cells the activity in vitro. In order to investigate the preparation of gamma Delta T cells in vivo, especially the distribution of tumor tissue, we first analyzed the expression of chemokine receptors on the surface of T cells after incubation, followed by colorectal cancer as the research object, analysis The expression of chemokines in colorectal cancer cell lines and colorectal cancer tissues was detected. Finally, chemotaxis and chemotactic blocking experiments were used to investigate the chemotactic effect of colorectal cancer tissues on T cells.
Gamma delta T cells in preparation of immobilized antibody in vitro amplification of human peripheral blood mononuclear cells, T cells in the amplification and expression of chemokine receptors was analyzed by immunofluorescence staining and flow cytometry. The results showed that CCR5 and CXCR3 are amplified in vitro V Delta 1T cells and surface V the main Delta 2T cell chemokine receptor. The detection of 4 human colorectal cancer cell lines and 10 cases of human colorectal carcinoma tissues by RT-PCR method (each case including tumor tissues and adjacent tissues) expression of chemokines. The results showed that different human colorectal cancer cell lines expressed different chemotaxis factor; human colorectal cancer tissues in tumor tissues and adjacent tissues of various chemokine ligand molecules, which are including CCR5 and CXCR3. Therefore, we use two kinds of colon cancer cell lines (HT-29 and HR8348) as the representative of swelling The trend of tumor cells of gamma delta T cells, and the use of CCR5 and CXCR3 blocking antibodies examined two chemokine receptors in chemotaxis contribution in gamma delta T cells. The results showed that after in vitro expansion of gamma delta T cells have the ability to migrate to tumor cells, and chemotaxis can be part of CCR5 and CXCR3 antibodies closed. Our results showed that in vitro amplification of gamma delta T cells have the ability of distribution in colorectal cancer tissues, the ability for further play in local tumor killing effect of the foundation.

【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陳將南;呂秋瓊;湯佳良;陶葉海;;CD4~+、CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞與急性乙型肝炎轉(zhuǎn)歸的探討[J];上海預防醫(yī)學;2011年06期

2 李大金;;母-胎界面免疫耐受微環(huán)境的分子信息傳導機制[J];醫(yī)學研究雜志;2011年07期

3 孫強中;任麗娟;趙攀;;結(jié)核病的免疫治療[J];臨床肺科雜志;2011年10期

4 羅莉;羅德梅;劉盼盼;董旭南;;調(diào)節(jié)性T細胞和轉(zhuǎn)化生長因子β與初發(fā)類風濕性關節(jié)炎相關性研究[J];中華實用診斷與治療雜志;2011年07期

5 林群;朱玲;;CD_4~+T細胞在哮喘中的作用[J];醫(yī)學綜述;2011年12期

6 劉子平;白鈺;張朕杰;;產(chǎn)生IL-10的調(diào)節(jié)性B細胞在免疫調(diào)節(jié)中的作用[J];中國醫(yī)藥指南;2011年21期

7 傅艷紅;孫耕耘;;CD_4~+CD_(25)~+調(diào)節(jié)性T細胞與肺癌的研究進展[J];臨床肺科雜志;2011年09期

8 馮靜;費瑜;孟曉萍;;CD4~+和CD8~+ T淋巴細胞與動脈粥樣硬化相關性研究進展[J];中國動脈硬化雜志;2011年08期

9 李丹;梁華;邵一鳴;;Treg和Th17失衡與HIV感染的相關性研究進展[J];青島大學醫(yī)學院學報;2011年04期

10 宋梅;張梅;李海燕;周曉麗;白燕;黃黎;;全反式維甲酸對人骨髓基質(zhì)細胞分泌GM-CSF的影響[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2011年09期

相關會議論文 前10條

1 葉菲;閻淑;劉楠;王纓;熊思東;儲以微;;低劑量ConA誘導的Tr1調(diào)節(jié)性T細胞在肝免疫耐受中的作用及其意義[A];第六屆全國免疫學學術大會論文集[C];2008年

2 李曉;;卵巢癌細胞分泌的TGF-β誘導CD4~+CD25~-T細胞轉(zhuǎn)變?yōu)镃D4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學術論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學學術年會論文匯編[C];2006年

3 姚詠明;;提高對調(diào)節(jié)性樹突狀細胞在膿毒癥免疫效應中意義的認識[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2010年

4 付蓉;陳瑾;王紅蕾;王君;李麗娟;劉惠;王一浩;任悅;邵宗鴻;;骨髓Coombs實驗(+)血細胞減少患者調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量及功能研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

5 許利軍;吳南屏;陳亮;范薇薇;;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞和CD38的表達在HIV感染者中的關系[A];2006年浙江省感染病、肝病學術會議論文匯編[C];2006年

6 張愛軍;冀學斌;王琳;張曉琳;彭軍;侯明;;靛玉紅對小鼠CD4~+CD25~(high)調(diào)節(jié)性T細胞的影響[A];第十一屆全國血栓與止血學術會議暨血栓栓塞性疾�。ㄑㄅc止血）基礎與臨床研究進展學習班論文摘要匯編及學習班講義[C];2007年

7 申潔;劉健航;費燁;陳洪;陳向東;;PV患者CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量及Foxp3基因表達的研究[A];中華醫(yī)學會第14次全國皮膚性病學術年會論文匯編[C];2008年

8 畢美;周瑾;李玉姝;單忠艷;滕衛(wèi)平;;Graves病小鼠模型發(fā)病中調(diào)節(jié)性B細胞的表達變化[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

9 陳偉;李向培;陶金輝;翟志敏;李慶;;初發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者CD4~+ CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞與IL-4、IFN-γ細胞因子的關聯(lián)性研究[A];全國自身免疫性疾病專題研討會暨第十一次全國風濕病學學術年會論文匯編[C];2006年

10 周家國;劉玉潔;湯勇波;龐瑞萍;丘欽英;關永源;;Simvastatin抑制腦血管平滑肌細胞增殖與容積調(diào)節(jié)性氯通道的關系[A];第七屆海峽兩岸心血管科學研討會論文集[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 中國人民大學人口研究所教授 鄔滄萍;人口老齡化能調(diào)節(jié)性別比嗎[N];中國老年報;2001年

2 記者 于麗珊邋通訊員 黃顯斌;肝癌發(fā)病機制研究獲進展[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

3 胡德榮 黃歡;調(diào)節(jié)性T細胞有望阻斷脂肪肝惡化進程[N];中國醫(yī)藥報;2007年

4 黃顯斌;我國肝癌發(fā)病機制研究獲重大進展[N];大眾科技報;2007年

5 黃顯斌;肝癌發(fā)病機制研究獲重大進展[N];健康報;2007年

6 黃顯斌;我國肝癌發(fā)病機制研究取得進展[N];中國醫(yī)藥報;2007年

7 記者 唐先武邋通訊員 黃顯斌;我科學家在肝癌發(fā)病機制研究中獲新進展[N];科技日報;2007年

8 記者 施嘉奇邋通訊員 黃歡;調(diào)節(jié)性T細胞有望阻止脂肪肝惡化[N];文匯報;2007年

9 黃顯斌邋唐明山;我科學家在肝癌發(fā)病機制研究中取得重大進展[N];光明日報;2007年

10 記者　江卉、實習生 吳星、通訊員　朱思標;8萬課改生參加武漢“新中考”[N];湖北日報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 姚韻靚;Qa-1限制性CD8調(diào)節(jié)性T細胞對小鼠炎癥性腸病的治療及其機制研究[D];浙江大學;2012年

2 陳康杰;調(diào)節(jié)性T細胞與肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展關系的研究[D];浙江大學;2012年

3 王臻;暴發(fā)性1型糖尿病患者外周血調(diào)節(jié)性T細胞的研究[D];中南大學;2012年

4 趙小峰;人類上皮性卵巢癌細胞培養(yǎng)上清誘導CD4+CD25-CD45RA+初始T細胞向調(diào)節(jié)性T細胞轉(zhuǎn)化的研究[D];浙江大學;2010年

5 曾波;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞在乙肝免疫耐受中的作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

6 奚煒煒;kit基因和CD4~+細胞在新生血管形成中的作用[D];浙江大學;2010年

7 李姝;OTUB1和OTUB2對細胞抗病毒信號轉(zhuǎn)導的調(diào)控機制[D];武漢大學;2010年

8 李小燕;人類調(diào)節(jié)性γδT細胞的體外誘導、表型鑒定、免疫調(diào)節(jié)活性及與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

9 林星光;調(diào)節(jié)性T細胞在母胎耐受中的作用機制及對H-Y皮膚移植影響的研究[D];華中科技大學;2010年

10 邱甬鄞;調(diào)節(jié)性B細胞與腎移植免疫狀態(tài)關系及其機制的研究[D];復旦大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 王大偉;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞α7煙堿型乙酰膽堿受體的表達及其在T淋巴細胞免疫抑制功能中地位的研究[D];山西醫(yī)科大學;2010年

2 蒙菁菁;香煙暴露大鼠中CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞與CD4+IL-17+T細胞的變化及意義[D];廣西醫(yī)科大學;2011年

3 陳云龍;卡介苗/結(jié)核菌純蛋白衍化物對兒童哮喘T細胞亞群及CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2010年

4 陳玉梅;雙歧桿菌完整肽聚糖治療食物過敏小鼠及對調(diào)節(jié)性T細胞影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

5 童琳琳;過敏性紫癜患兒外周血CD4~+CD25~+CD127~-調(diào)節(jié)性T細胞的表達及臨床意義[D];山西醫(yī)科大學;2011年

6 姜山;Ⅰ型變態(tài)反應性疾病CD4～+CD25～+調(diào)節(jié)性T細胞的研究及意義[D];安徽醫(yī)科大學;2004年

7 林琳;手術切除對胰腺癌患者CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細胞的影響及臨床意義[D];中國醫(yī)科大學;2010年

8 湯龍;調(diào)節(jié)性γδT細胞的體外誘導及體外擴增的γδT細胞趨化機理的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2010年

9 宋紅利;不同強度運動對小鼠CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞及核酸疫苗免疫效果影響的研究[D];河南大學;2010年

10 楊軼;食管癌患者CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細胞的表達及其臨床意義[D];鄭州大學;2010年

，

本文編號：1639546