本文選題：-硝基酪氨酸　切入點：單克隆抗體　出處：《免疫學(xué)雜志》2015年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的制備抗3-硝基酪氨酸(3-NT)單克隆抗體并鑒定其免疫學(xué)特性。方法用化學(xué)合成方法將3-NT與OVA用戊二醛偶聯(lián)合成的人工抗原3硝基酪氨酸-戊二醛-雞卵白蛋白(3NT-G-OVA)作為免疫原,皮下注射免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,用間接ELISA法篩選陽性雜交瘤細(xì)胞株,擴(kuò)大培養(yǎng)并對抗體進(jìn)行免疫學(xué)鑒定與分析。結(jié)果獲得1株穩(wěn)定分泌抗3-硝基酪氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,所分泌的單抗亞型為Ig G2a;純化后的抗體效價為1∶(6.14×106);單抗親和力常數(shù)為7.81×107(L·mol-1);Western blot檢測證明該單抗與含有3-硝基酪氨酸的蛋白能特異地結(jié)合。結(jié)論制備了1株具有較高免疫學(xué)活性和特異性的抗3-NT單克隆抗體,并可用于Western blot檢測病人樣本中的蛋白硝基化水平。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody against 3-nitrotyrosine tyrosine and identify its immunological properties. Methods 3NT-G-OVA, an artificial antigen synthesized by coupling 3-NT with OVA with glutaraldehyde, was used as immunogen. Balb/c mice were immunized subcutaneously. Spleen cells of immunized mice were fused with SP2/0 myeloma cells. Positive hybridoma cell lines were screened by indirect ELISA method. Results A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against 3-nitrotyrosine was obtained. The monoclonal antibody secreted was Ig G2a, the titer of purified antibody was 1: 10 4 脳 10 6, and the affinity constant of the monoclonal antibody was 7.81 脳 10 7 L 路mol -1 blot. It was proved that the monoclonal antibody could specifically bind to the protein containing 3-nitrotyrosine. Conclusion A strain with high immunogenicity was prepared. Bioactive and specific monoclonal antibodies against 3-NT, It can be used to detect the nitration level of protein in patient samples by Western blot.
【作者單位】： 重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院;重慶市墊江縣中醫(yī)院檢驗科;北歐生物科技(北京)有限公司;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30571714,60873103) 重慶市科委自然基金(2008BB5331,2009BB7231) 重慶市衛(wèi)生局科研項目(2012-2-383)
【分類號】：R392.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1632804