發(fā)布時間：2018-03-18 21:14

  本文選題：胰腺干細(xì)胞　切入點：飼養(yǎng)層　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的：優(yōu)化并穩(wěn)定胰腺干細(xì)胞體外培養(yǎng)條件；比較不同成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層對胰腺干細(xì)胞擴增培養(yǎng)的效果,探索建立一種能夠獲得數(shù)量較多、富集度較高的胰腺干細(xì)胞的體外擴增培養(yǎng)方法；進行昆明小鼠體內(nèi)移植實驗,檢測胰腺干細(xì)胞體內(nèi)存活情況。 方法：取新生SPF級昆明小鼠的胰腺組織,使用Ⅳ型膠原酶消化,細(xì)胞懸液培養(yǎng)和組織塊培養(yǎng),前兩天用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液,以后改換無血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)；倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)學(xué)特征及生長特性,通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色等技術(shù)和方法,檢測胰腺干細(xì)胞特異性標(biāo)志-Nestin,對胰腺干細(xì)胞進行初步鑒定。采用原位傳代擴增培養(yǎng)的方法獲得富集度高的胰腺干細(xì)胞。將擴增的第二代胰腺干細(xì)胞行DAPI和Brdu標(biāo)記后注入昆明小鼠腿部肌肉及側(cè)腦室,于不同時間點通過免疫組織化學(xué)的方法觀察其自然存活情況。 結(jié)果：體外培養(yǎng)24h,出現(xiàn)典型的成纖維細(xì)胞,其密度不斷增大,組織塊培養(yǎng)1w,細(xì)胞懸液培養(yǎng)3-4d后胰腺成纖維細(xì)胞密度達(dá)到70%～80%時,此時胰腺干細(xì)胞逐漸出現(xiàn),具有活躍的分裂增殖能力,表達(dá)特異性標(biāo)志-巢蛋白(Nestin)。胰腺干細(xì)胞可進行多次原位傳代擴增培養(yǎng),富集度提高、保持未分化狀態(tài)和旺盛的分裂增殖能力。對擴增后的第二代胰腺干細(xì)胞行DAPI標(biāo)記后注入昆明小鼠腿部肌肉,一周后未檢測到存活的胰腺干細(xì)胞,Brdu標(biāo)記后的胰腺干細(xì)胞注入小鼠側(cè)腦室后3d,檢測到存活的胰腺干細(xì)胞,1w時逐漸減少,2w時未檢測到標(biāo)記后的胰腺干細(xì)胞。 結(jié)論：(1)原位傳代擴增培養(yǎng)方法可獲得富集度較高的胰腺干細(xì)胞。 (2)胰腺干細(xì)胞可在側(cè)腦室內(nèi)存活一周。
[Abstract]:Objective: to optimize and stabilize the culture conditions of pancreatic stem cells in vitro, to compare the effects of different fibroblast feeder layers on the proliferation and culture of pancreatic stem cells, and to explore the establishment of a kind of pancreatic stem cells that can be obtained in a large number. The in vitro amplification and culture of pancreatic stem cells with high enrichment were carried out in Kunming mice to detect the survival of pancreatic stem cells in vivo. Methods: the pancreatic tissues of newborn SPF mice were digested with type 鈪，

本文編號：1631333