本文選題：奇異變形菌　切入點(diǎn)：自殺質(zhì)粒　出處：《中華醫(yī)院感染學(xué)雜志》2015年05期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建奇異變形菌(PMI)聚磷酸鹽激酶1(polyphosphate kinase 1,PPK1)基因缺失株,為研究ppk1基因在PMI致尿路感染中的作用及其機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法通過(guò)融合PCR將目的基因上游及下游同源臂連接成一個(gè)片段,并克隆入自殺質(zhì)粒pCVD442,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌SM10λpir中,再與PMI受體菌進(jìn)行接合試驗(yàn),通過(guò)氨芐西林、蔗糖篩選得到ppk1基因缺失株(△pk1),進(jìn)行PCR和DNA測(cè)序鑒定;體外比較野生株和缺失株在低營(yíng)養(yǎng)條件下的生存能力。結(jié)果利用融合PCR將目的基因上、下游片段連接成一個(gè)重組片段,并連接至pCVD442自殺質(zhì)粒;重組自殺質(zhì)粒進(jìn)入PMI后出現(xiàn)了同源重組事件,同源片段發(fā)生替換,ppk1基因被敲除,通過(guò)PCR及測(cè)序分析證實(shí)基因組目的基因已缺失;經(jīng)體外測(cè)定MOPS培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線(xiàn),發(fā)現(xiàn)敲除株與野生株相比,在低營(yíng)養(yǎng)環(huán)境中生存能力明顯降低。結(jié)論自殺質(zhì)粒同源重組方法可用于PMI基因敲除株的構(gòu)建,是研究PMI基因功能的重要手段,ppk1基因與PMI在低營(yíng)養(yǎng)環(huán)境中的生存能力有關(guān)。
[Abstract]:Objective to construct a polyphosphate kinase 1 polyphosphate kinase 1 (PPK1) gene deletion strain of Proteus mirabilis. To study the role and mechanism of ppk1 gene in urinary tract infection induced by PMI. Methods the upstream and downstream homologous arms of the target gene were linked into a fragment by fusion of PCR. The recombinant plasmid pCVD442 was cloned into Escherichia coli SM10 位 pir and then conjugated with PMI receptor bacteria. The ppk1 gene deletion strain (pk1G) was screened by ampicillin and sucrose, and identified by PCR and DNA sequencing. Results the fusion PCR was used to link the target gene and downstream fragment into a recombinant fragment and ligated to the suicide plasmid of pCVD442. After the recombinant suicide plasmid entered into PMI, the homologous recombination event occurred, the homologous fragment was knockout, the genomic target gene was found missing by PCR and sequencing, and the growth curve of MOPS medium was determined in vitro. It was found that the survival ability of the knockout strain was significantly lower than that of the wild strain. Conclusion the suicide plasmid homologous recombination method can be used to construct the PMI gene knockout plant. It is an important tool to study the function of PMI gene. It is related to the survivability of PMI in low nutrition environment.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81200505)
【分類(lèi)號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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