本文選題：硫氧還蛋白　切入點(diǎn)：氧化應(yīng)激　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)研究表明心血管疾病與氧化應(yīng)激損傷密切相關(guān),而氧化應(yīng)激被認(rèn)為是在眾多心血管疾病中誘發(fā)凋亡的主要因素,那么干預(yù)氧化應(yīng)激可能成為心血管疾病治療的新靶點(diǎn)。既往研究發(fā)現(xiàn)雌激素具有一定的抗氧化作用,且對(duì)心臟有保護(hù)作用,但具體通過(guò)何種信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)保護(hù)作用研究得不太清楚；而硫氧還蛋白(Trx)作為維持細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)還原狀態(tài)的重要的二硫鍵還原酶,在對(duì)抗細(xì)胞的氧化應(yīng)激中也起著重要的作用。另外,硫氧還蛋白與雌激素在保護(hù)心肌細(xì)胞作用中的相互關(guān)系鮮見(jiàn)報(bào)道。硫氧還蛋白(thioredoxin,Trx)系統(tǒng)是一個(gè)控制細(xì)胞還原/氧化狀態(tài)和細(xì)胞增殖/生存的廣泛表達(dá)的氧化還原系統(tǒng),尤其在多種心血管病變的組織中有較高的表達(dá),對(duì)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展具有廣泛的影響。 目的本研究旨在探索硫氧還蛋白-1(Trx-1)是否參與了雌激素(E2)對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的凋亡心肌細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)及相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 方法(1)用MTT法觀察E2和H2O2對(duì)H9c2細(xì)胞活性的影響；(2)采用反轉(zhuǎn)錄PCR及Western blot分別檢測(cè)不同濃度E2處理H9c2細(xì)胞后,胞內(nèi)Trx-1基因mRNA和蛋白的表達(dá)；(3)采用DHE染色及Hochest33342染色來(lái)觀察單獨(dú)H2O2刺激和E2預(yù)處理對(duì)H9c2細(xì)胞的胞內(nèi)活性氧(ROS)和凋亡水平的影響；(4)用Western blot法檢測(cè)在E2對(duì)凋亡心肌細(xì)胞的保護(hù)作用中Trx-1的蛋白表達(dá)以及相關(guān)的促凋亡和抗凋亡信號(hào)通路中主要的信號(hào)分子Akt、P-Akt、P38、P-P38、JNK、P-JNK、Bcl-2、Bax、caspase-3的表達(dá)水平。 結(jié)果(1)MTT法分析顯示H202可呈濃度依賴性降低H9c2細(xì)胞的活性(P0.05),選擇100uM H2O2處理12小時(shí)作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的誘導(dǎo)條件；僅用不同濃度的E2(1nM、10nM、100nM)處理H9c2細(xì)胞,對(duì)其活性均無(wú)明顯影響(P0.05)；用不同濃度的E2預(yù)處理H9c2細(xì)胞24小時(shí)后,E2呈濃度依賴性明顯減輕H202對(duì)H9c2細(xì)胞活性的損傷,10nM、100nM處理時(shí)無(wú)差異,所以選擇10nM E2預(yù)處理24小時(shí)作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干預(yù)條件。(2)雌激素呈劑量依賴的提高Trx-1mRNA和蛋白的表達(dá),在濃度達(dá)10n M時(shí)最為明顯。(3)外源性H202引起氧化應(yīng)激能夠增加細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,損傷H9c2細(xì)胞活性,引發(fā)凋亡,而雌激素預(yù)處理能減輕H202造成的心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激和凋亡。(4)雌激素能減少p38磷酸化、caspase3活化以及減少Bax激活,促進(jìn)Akt活化,從而達(dá)到保護(hù)心肌的效應(yīng)。 結(jié)論(1)外源性H202能模擬自然界氧化應(yīng)激,刺激細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生。(2)雌激素能呈劑量依賴的提高Trx-1的表達(dá)從而通過(guò)促進(jìn)抗凋亡信號(hào)通路PI3K/Akt的激活,抑制促凋亡信號(hào)通路JNK/P38的激活,以及抑制依賴線粒體的caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)H202誘導(dǎo)的凋亡心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。
[Abstract]:A large number of experimental studies at home and abroad show that cardiovascular disease is closely related to oxidative stress injury, and oxidative stress is considered to be the main factor that induces apoptosis in many cardiovascular diseases. Intervention in oxidative stress may become a new target for the treatment of cardiovascular disease. Previous studies have found that estrogen has a certain antioxidant effect and has a protective effect on the heart. However, it is not clear what kind of signaling pathway is used to protect the cells. Thioredoxin (TRX) is an important disulfide bond reductase to maintain the reduction state of protein in cells. It also plays an important role in combating oxidative stress in cells. The relationship between thioredoxin and estrogen in the protection of cardiomyocytes is rarely reported. Thioredoxin Trx) system is a widely expressed redox system that controls cell reduction / oxidation state and cell proliferation / survival. Especially in a variety of cardiovascular disease tissue has a high expression, cardiovascular disease has a wide range of influence on the development. Objective to investigate whether thioredoxin-1 (TRX-1) is involved in the protective effect of estrogen E2) on the apoptosis of cardiomyocytes induced by H 2O 2 (H 2O 2) and its related signal transduction pathway. Methods 1) the effect of E _ 2 and H _ 2O _ 2 on the activity of H9c2 cells was observed by MTT assay. Reverse transcription PCR and Western blot were used to detect the effects of E _ 2 and H _ 2O _ 2 on the activity of H9c2 cells. Expression of mRNA and protein of intracellular Trx-1 gene: DHE staining and Hochest33342 staining were used to observe the effects of H2O2 alone and E2 pretreatment on intracellular reactive oxygen species (Ros) and apoptosis level in H9c2 cells.) Western blot assay was used to detect the effect of E2 on apoptotic cardiomyocytes. The protein expression of Trx-1 and the expression of caspase-3 in the main signal molecule Aktnk, P-AktP38, P-P38, JNKK P-JNK-2Bcl-2Bax-2in the apoptotic and anti-apoptotic signaling pathway. Results MTT assay showed that H202 could decrease the activity of H9c2 cells in a dose-dependent manner, and treated H9c2 cells with 100UM H2O2 for 12 hours. There was no significant effect on the activity of H9c2 cells after pretreatment with different concentrations of E2 for 24 hours in a concentration-dependent manner, and no difference was found in the treatment of H9c2 cells with 10nMN 100nM treated with H202 in a concentration-dependent manner, and no significant difference was found in the treatment of H9c2 cells with different concentrations of E2 in a concentration-dependent manner. Therefore, 10nM E2 preconditioning for 24 hours was chosen as the intervention condition in the follow-up experiment. (2) estrogen increased the expression of Trx-1mRNA and protein in a dose-dependent manner. When the concentration reached 10 nm, the expression of Trx-1mRNA and protein was the most obvious, and the oxidative stress induced by exogenous H202 could increase the production of ROS in the cells. Estrogen pretreatment can reduce oxidative stress and apoptosis of cardiomyocytes induced by H202) estrogen can reduce the activation of p38 phosphorylated caspase3 and Bax, and promote Akt activation. In order to achieve the effect of myocardial protection. Conclusion exogenous H202 can mimic natural oxidative stress and stimulate the production of ROS in cells. Estrogen can increase the expression of Trx-1 in a dose-dependent manner and inhibit the activation of JNK/P38 by promoting the activation of PI3K/Akt signaling pathway. And inhibiting the mitochondrial dependent caspase cascade to protect the apoptosis cardiomyocytes induced by H 202.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1609895