本文選題：高致病性人禽流感H5N1疫苗　切入點(diǎn)：滴鼻免疫　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 高致病性人禽流感自1997年首例出現(xiàn)以來,已經(jīng)波及全球14個國家,截止到2008年4月30日人禽流感確診病例382人,死亡241人,死亡率高達(dá)63%,對人類健康的危害日益嚴(yán)重,因此WHO要求世界各國做好應(yīng)對流感大流行的防控準(zhǔn)備。自古以來,疫苗在控制感染病方面發(fā)揮著重要作用。當(dāng)前高致病性人禽流感H5N1疫苗(大流行流感疫苗)主要集中在滅活全病毒疫苗、裂解疫苗、減毒疫苗等方面的研究進(jìn)展迅速。滅活全病毒疫苗和裂解病毒疫苗已完成Ⅰ、Ⅱ期臨床研究,證明其安全、有效和穩(wěn)定。但近來研究發(fā)現(xiàn),高致病性人禽流感病毒H5N1的變異、兒童和老人免疫效果不十分滿意以及疫苗接種方式繁瑣,對其疫苗的研制帶來了挑戰(zhàn)。因此,當(dāng)前迫切需要一種具有較好交叉保護(hù)、接種簡單,且適用于不同年齡人群的大流行疫苗。 滴鼻疫苗模擬自然感染誘發(fā)的呼吸道粘膜免疫具有刺激機(jī)體產(chǎn)生系統(tǒng)和黏膜局部免疫應(yīng)答反應(yīng),且較注射疫苗誘發(fā)的系統(tǒng)免疫有更好的交叉免疫保護(hù)效果以及具有安全性好、接種簡便等優(yōu)勢,而成為當(dāng)今疫苗研究發(fā)展的重要方向。本研究選用WHO推薦的H5N1疫苗株(A/Vietnam/H5N1-PR8/CDC-RG、A/Anhui/1/2005(H5N1)-RG5、A/Indo/05/2005(H5N1)-RG2)制備抗原,并以MF59為黏膜佐劑,制備滴鼻大流行流感疫苗劑型,免疫Balb/c小鼠,觀察其所誘導(dǎo)的系統(tǒng)和粘膜局部免疫應(yīng)答規(guī)律;進(jìn)一步以不同滅活疫苗安徽株(A/Anhui/1/2005(H5N1)-RG5)、印尼株(A/Indo/05/2005(H5N1)-RG2)、越南株(A/Vietnam/H5N1-PR8/CDC-RG)滴鼻免疫,觀察不同毒株間免疫應(yīng)答差異與規(guī)律,為噴鼻大流行流感疫苗的深入研究提供理論依據(jù)。 本研究分為三部分: 1、制備滴鼻大流行流感疫苗:首先選用WHO推薦的H5N1疫苗株(A/Vietnam/H5N1-PR8/CDC-RG、A/Anhui/1/2005(H5N1)-RG5、A/Indo/05/2005(H5N1)-RG2)進(jìn)行病毒接種、毒種批的建立與鑒定;然后制備純化滅活全病毒抗原、測定抗原HA含量;最后以制備的MF59為粘膜佐劑,與抗原混合吸附,制成大流行流感滴鼻疫苗,符合WHO對大流行流感疫苗制備要求。 2、首先對制備的大流行流感疫苗越南株(A/Vietnam/H5N1-PR8/CDC-RG)的滴鼻免疫,觀察其應(yīng)答效果。通過0、14天兩次滴鼻免疫,于不同時間點(diǎn)(7、14、21、28天)采集小鼠血清、肺鼻灌洗液、脾淋巴細(xì)胞,檢測血清抗體IgG、IgM動態(tài)變化、血凝抑制抗體、血清中和抗體、鼻、肺灌洗液特異性IgG、IgA抗體、血清IgG抗體亞型以及脾特異性IgA抗體分泌細(xì)胞、特異性(NF-γ和IL-4分泌細(xì)胞生成動態(tài)變化來評價其粘膜免疫效果。結(jié)果顯示,大流行流感越南株疫苗可以激發(fā)機(jī)體血液中產(chǎn)生較強(qiáng)保護(hù)性抗體的免疫反應(yīng),并可以維持相當(dāng)一段時間,至二免二周后血抑效價達(dá)到1:113±1.5,血清中和抗體效價為1:221±82,抗體亞型的分布以IgG1與IgG2b為主,肺鼻灌洗液中,均可檢測到特異性IgA、IgG。特異性sIgA效價略高于IgG,說明該滴鼻疫苗可以激發(fā)黏膜局部產(chǎn)生特異性sIgA免疫應(yīng)答;脾特異性IgA抗體分泌細(xì)胞在兩次免疫后14天達(dá)到維持較高水平,并同時檢測到一定水平的與細(xì)胞免疫應(yīng)答相關(guān)的特異性INF-γ和IL-4分泌細(xì)胞。 3、在上述單價疫苗免疫評價的基礎(chǔ)上,選用WHO新近推薦的疫苗株印尼株(A/Indo/05/2005(H5N1)-RG2)、安徽株(A/Anhui/1/2005(H5N1)-RG5)與越南株(A/Vietnam/H5N1-PR8/CDC-RG)三價滴鼻免疫評價其應(yīng)答效果。通過0、14天兩次滴鼻免疫,于不同時間點(diǎn)(7、14、21、28天)采集小鼠血清、肺鼻灌洗液、脾淋巴細(xì)胞,檢測血清抗體IgG、IgM動態(tài)變化、血凝抑制抗體、血清中和抗體、鼻、肺灌洗液特異性sIgA、IgG抗體、血清IgG抗體亞型以及脾特異性IgA抗體分泌細(xì)胞、特異性INF-γ和IL-4分泌細(xì)胞生成動態(tài)變化來評價其免疫效果。結(jié)果表明,單價和三價大流行流感滴鼻疫苗在加強(qiáng)免疫后兩周均會刺激產(chǎn)生較高的血清IgG抗體效價、血抑效價和中和抗體效價;三株單獨(dú)免疫除產(chǎn)生較高的針對自身抗原的血抑抗體外,還可以產(chǎn)生一定量的H1、H3、B型血抑效價,提示大流行流感疫苗滴鼻免疫對于自身抗原和同型不同株以及不同型別的抗原具有一定的交叉保護(hù)效果;三株聯(lián)合滴鼻免疫二免二周后,較單價滴鼻疫苗免疫保護(hù)效果強(qiáng),從而可以彌補(bǔ)單獨(dú)安徽株、印尼株對于越南株交叉免疫性低的缺點(diǎn)。此外三價疫苗對于不同型別的抗原H1、H3、B的血抑效價也相對較高,因此在相同免疫應(yīng)答效果下,三價滴鼻疫苗所需抗原量低、交叉免疫保護(hù)效果好。 結(jié)論:本實(shí)驗制備的粘膜佐劑MF59具有較好粘膜佐劑效果,對滴鼻免疫抗原有較好的免疫應(yīng)答輔助作用;所制備的大流行流感滴鼻疫苗,有較好的免疫原性,可以刺激機(jī)體產(chǎn)生系統(tǒng)免疫應(yīng)答和粘膜局部免疫應(yīng)答,且具有一定的交叉保護(hù)效果。其中三價大流行流感滴鼻疫苗所需抗原量低、交叉免疫保護(hù)效果好,在應(yīng)對禽流感病毒變異、擴(kuò)大免疫接種人群以及簡便接種等方面占有優(yōu)勢,為噴鼻禽流感疫苗的深入研究提供理論依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 石穎;噴鼻流感三價裂解疫苗的制備和免疫效果的初步研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

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本文編號：1607691