本文選題：幽門螺桿菌　切入點：基因多態(tài)性　出處：《河北師范大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H. pylori)是迄今為止科學(xué)家所知道的唯一寄生在人類胃粘膜組織的細菌,一般人群普遍易感。自1984年Marshall與Warren發(fā)表論文報告他們成功地在胃炎患者胃粘膜組織培養(yǎng)出H. pylori之后,H. pylori很快就被證明是引起胃腸道疾病的重要病原,而且具有高度致癌性。1994年世界衛(wèi)生組織(WHO)癌癥中心宣布H. pylori感染可以增加胃癌的發(fā)病率與死亡率,因此將H. pylori歸入一類致癌因子,H. pylori是目前已知的第一個可致癌的原核生物。同年美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)提出常見的胃部疾病治療過程中應(yīng)加入針對H. pylori的抗生素。 H. pylori感染是引起胃炎、胃潰瘍、胃癌等胃腸道疾病的重要病原,但是盡管有50%的人群感染H. pylori,但是僅有少數(shù)人發(fā)展成胃癌。H. pylori感染引發(fā)疾病的臨床結(jié)局與患者自身的遺傳易感性、H. pylori菌株類型及其與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用密切相關(guān)�；诖宋覀冋{(diào)查研究了河北健康成年人群中H.pylori的感染情況以及感染人群中H. pylori的主要流行亞型,在此基礎(chǔ)上對H. pylori感染后宿主體內(nèi)細胞免疫系統(tǒng)表現(xiàn)的極化狀態(tài)以及在細胞免疫反應(yīng)中與免疫逃避機制有關(guān)的兩個基因的基因多態(tài)性進行了分析。 目的調(diào)查研究河北省健康成年人中H. pylori的感染情況及H. pylori的主要流行亞型,分析H. pylori感染的危險因素以及細菌感染對宿主細胞免疫系統(tǒng)的影響及其感染后成功逃避宿主免疫清除的機制,同時探討宿主細胞免疫狀態(tài)與基因易感性與H. pylori感染及臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系,為了解不同遺傳背景的個體對H. pylori感染易感性的差異以及不同基因型在人群中的分布特征,為從基因水平闡明個體感染H. pylori后的發(fā)病風(fēng)險以及尋找新的免疫治療的作用靶點提供依據(jù)。 方法1、采用統(tǒng)一調(diào)查表,對2007年至2009年在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院接受常規(guī)體檢的健康人進行了流行病學(xué)調(diào)查,對進行胃鏡檢測的H. pylori感染患者留取胃粘膜標本并進行H. pylori培養(yǎng),根據(jù)文獻選擇并設(shè)計了9對引物對河北地區(qū)H. pylori的流行菌株及其基因亞型進行測定和分析。除調(diào)查表之外留取患者血清標本用于H. pyloriIgG抗體以及其他血清學(xué)指標的檢測。2、利用免疫組化和流式細胞術(shù)檢測H. pylori感染和未感染的胃炎、胃潰瘍、胃癌等患者胃粘膜組織和外周血的細胞免疫反應(yīng)的表達狀態(tài)。以IL-2代表Thl型免疫反應(yīng),IL-10代表Th2型免疫反應(yīng)測定H. pylori感染和未感染患者在胃粘膜局部和外周血中的T淋巴細胞反應(yīng)的極化方向,同時測量患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細胞的數(shù)量以及CD4+/CD8+細胞的比例,分析H. pylori感染對患者胃黏膜局部以及整體細胞免疫反應(yīng)的影響以及這些影響與患者臨床病程的關(guān)系。3、根據(jù)NCBI中CD27和CD70的DNA序列以及SNP信息,查找CD27和CD70基因轉(zhuǎn)錄起點上游的SNP位點,用DNASIS v2.5 Demo查找限制性內(nèi)切酶,并利用在線工具TFSEARCH查詢得到與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合有關(guān)的SNP位點,最后篩查得到6個SNP位點：rs2532507、rs60982224、rs3087273、rs3136550、rs7253697和rs1808398,運用Primer Premier 5.0設(shè)計4對引物,運用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析對所得到的6個SNP位點進行基因型測量和分析。 結(jié)果1、流行病學(xué)調(diào)查和樣本分析結(jié)果顯示：河北成年人群H.pylori的感染率為54.5%,不同性別和年齡中感染率不同,男性感染率高于女性,隨年齡增長H.pylori的感染率總體表現(xiàn)為上升趨勢。河北省H. pylori感染類型以VacA陽性菌株為主,VacA菌株陽性率在胃炎人群中為80.00%,在潰瘍?nèi)巳褐袆t達到100%。其次是CagA陽性菌株,CagA菌株陽性率在胃炎人群最高,為66.67%。VacA基因亞型s信號區(qū)域以VacA-s1a為主,中間m區(qū)域以VacA-m2為主。成年人VacA最常見的基因型為VacA-s1a-m2,其次為VacA-s1b-m2。H. pylori感染與頸動脈粥樣硬化、高血脂、高血糖相關(guān)。2、免疫組化和流式細胞術(shù)檢測結(jié)果表明：胃炎、潰瘍、胃癌患者在胃粘膜局部存在免疫功能紊亂,以IL-2為代表的Th1型細胞免疫反應(yīng)降低,患者粘膜組織IL-2表達與對照組相比明顯降低；外周血中,各組患者IL-2濃度表達也有差異,其中潰瘍組和胃癌組與正常對照相比,濃度表達顯著降低。在H. pylori感染患者中胃癌患者組IL-2表達水平明顯低于胃炎患者。流式細胞檢測結(jié)果顯示胃癌患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD+/CD8+表達結(jié)果明顯低于正常對照組,而其他各個實驗組與正常對照相比無明顯差異。3、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析表明：在測量的CD27 4個SNP位點：rs3087273、rs3136550、rs 2532570rs、6098224,CD70 2個SNP位點：rs 11808398和rs 7253697中,病例組中rs 2532570 GG基因型、rs3087273 AG基因型、rs3136550 CC基因型和rs11808398 CC基因型的表達低于對照組,這些基因型可能與H. pylori感染有關(guān)。 結(jié)論河北健康成年人中H. pylori的感染率為54.5%,感染類型以VacA陽性菌株為主,H. pylori感染最常見的基因型為VacA-s1a-m2。H. pylori感染影響患者局部和整體的細胞免疫反應(yīng)狀態(tài)并可能打破了宿主自身的免疫平衡狀態(tài),其表現(xiàn)為胃癌患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達結(jié)果明顯低于正常對照組,同時以IL-2為代表的Th1型免疫反應(yīng)顯著降低,這可能有助于H. pylori在宿主體內(nèi)的長期寄居。宿主的基因多態(tài)性與H. pylori感染后機體發(fā)生免疫反應(yīng)的類型以及炎癥反應(yīng)的程度和結(jié)局密切相關(guān),我們的結(jié)果表明H. pylori感染的病例組中rs 2532570 GG基因型、rs3087273 AG基因型、rs3136550 CC基因型和rs 11808398 CC基因型的表達低于對照組,這些SNP位點的基因多態(tài)性可能與H. pylori感染后疾病的發(fā)生或轉(zhuǎn)歸有關(guān)。宿主對H. pylori感染的個體易感性和H. pylori感染引發(fā)胃腸道炎癥及癌變的機制以及其感染后成功避免宿主免疫系統(tǒng)免疫識別和免疫殺傷作用的免疫逃避機制仍需要進一步的研究。
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【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【參考文獻】

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本文編號：1596438