本文選題：一氧化碳　切入點：缺血/再灌注損傷　出處：《河北醫(yī)科大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 肢體缺血再灌注(IR)損傷主要發(fā)生于肢體擠壓傷患者的病理轉(zhuǎn)歸過程中。因傷者得不到及時有效的復蘇治療,在延遲復蘇中將出現(xiàn)嚴重的IR損傷。肢體被擠壓的時間越長,IR損傷表現(xiàn)越重。最嚴重者可引發(fā)多器官功能衰竭而危及患者生命。在多器官中,腎臟是最易累及的靶器官。為此,防治腎臟損傷是救治此類患者的關鍵環(huán)節(jié)。在對一氧化碳(CO)的研究中發(fā)現(xiàn),在機體遭遇器官IR損傷的病理條件下,CO具有細胞保護效應。本課題組前期的研究證實,使肢體缺血(4 h)再灌注(6 h)大鼠吸入低濃度的CO(體積分數(shù)為0.05%),可顯著減輕肢體IR引發(fā)的腎等多臟器損傷。但CO具有舒張阻力血管的生物效應,吸入CO對肢體嚴重擠壓傷的患者有何影響,尚不得而知。 目的:本實驗擬通過夾閉股動脈8 h再開放的方法復制肢體嚴重IR損傷模型,使模型動物吸入含CO的醫(yī)用空氣后,觀測腎功能及腎組織病理學指標的變化,以探討吸入CO對肢體嚴重缺血再灌注所致腎臟損傷的效應,為最終將吸入CO的辦法應用于防治肢體創(chuàng)傷型“多衰”提供實驗依據(jù)。 方法:(1)動物分組:健康雄性SD大鼠56只,隨機分為IR組(24只)、IR +CO(RC)組(24只)、假手術(shù)(S)組(8只)。在IR、RC組中,8只用于10 d存活率的觀測;8只于再灌注6 h時取材,另8只于再灌注12 h時取材,用于腎功能指標及病理學觀測。S組中,4只與再灌注6 h組對比觀測,另4只與再灌注12 h組對比觀測。(2)模型復制:本實驗采用無創(chuàng)血管夾夾閉雙側(cè)股動脈,并用橡皮筋綁扎后肢根部,以此造成雙側(cè)后肢缺血。根據(jù)文獻提示,并經(jīng)本實驗證實,缺血達8 h以上者再灌注后血壓下降,呈現(xiàn)休克表現(xiàn)。據(jù)此,本實驗將缺血時間確定為8 h,以此建立肢體嚴重IR動物模型。S組動物模擬手術(shù)過程,但不造成肢體缺血。(3)吸入CO的方法:RC組動物吸入CO,把動物置于特制的器皿中,通入含有低濃度CO的醫(yī)用空氣,CO的體積分數(shù)為0.075%。于再灌注前2 h時開始持續(xù)吸入含有CO的醫(yī)用空氣,直至再灌注后4 h,共計吸入6 h。S、IR組暴露于空氣中,自由呼吸。(4)10 d存活率觀測:IR、RC組各取8只大鼠,于再灌注過程中,觀測尾動脈收縮壓的變化和10 d存活率。(5)腎功能指標的測定:IR、RC組,分別于再灌注6 h、12 h時,S組于對應的手術(shù)后時間點,在深度麻醉下經(jīng)右心房采血各5mL,靜置,離心,取上清液送全自動生化分析儀檢測血鉀(K+)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)等腎功能指標。(6)濕干重比(W/D)測定:上述動物經(jīng)心房采血后,開腹取出左側(cè)腎臟,用電子分析天平測量其濕重,在60℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中干燥7天,待腎臟水分完全析出后測其干重,算得W/D。(7)病理學觀察:取上述動物右側(cè)腎臟,先對其顏色、質(zhì)地、腫脹程度、滲出情況及壞死粘連程度,進行大體觀察。其后,將腎臟切開進行固定,石蠟包埋、切片,HE染色,光鏡觀察腎組織病理學變化。 結(jié)果:(1)10 d存活率:IR組,再灌注后大鼠尾動脈收縮壓開始降低,其下降過程可區(qū)分為四個時相:第一時相,再灌注0-2 h,為血壓快速下降期,至2 h前后,尾動脈平均收縮壓為8.6708±0.5992 kpa;第二時相,再灌注2-4 h,下降幅度較小,為血壓相對穩(wěn)定期;第三時相,再灌注4-8 h,為血壓緩慢下降期,至再灌注8 h時尾動脈平均收縮壓為5.3259±0.3832 kpa;第四時相,再灌注8 h-死亡,為持續(xù)低血壓期,尾動脈收縮壓波動在5 kpa上下,動物處于持續(xù)休克狀態(tài),再灌注13-14 h間有6只大鼠死亡,另外2只于再灌注至20 h前后死亡,10 d存活率為0。RC組,尾動脈收縮壓的下降速率較慢、下降幅度較小,與IR組的四個時相比照:第一時相,血壓也快速下降,但下降幅度顯著變小,再灌注至2 h前后,尾動脈平均收縮壓為10.3843±1.3111 kpa;第三時相,血壓下降的速率和幅度均明顯降低,至再灌注8 h時尾動脈平均收縮壓為8.3300±0.4224 kpa;第四時相,血壓未出現(xiàn)下降且穩(wěn)中有升,至再灌注13 h時尾動脈平均收縮壓為9.4157±0.3305 kpa,8只大鼠中1只在再灌注至20 h前后死亡,其余7只再灌注10 d后仍存活,且狀態(tài)良好,10 d存活率為7/8。(2)腎功能指標的變化:S組血清k+、CRE和BUN值最低,處于基礎水平,在正常參照范圍之內(nèi);IR組血清k+、CRE和BUN值最高;RC組血清k+、CRE和BUN值居中。S、IR、RC三組間比較,均有統(tǒng)計學差異(P0.05)。(3)W/D:S組 RC組 IR組。IR組和S組、RC組相比,均有統(tǒng)計學差異(P0.05),RC組與S組相比,無統(tǒng)計學差異(P0.05)。(4)病理學大體觀察結(jié)果:S組,腎臟顏色暗紅,形態(tài)正常,彈性好,無出血及滲出物;IR組,腎臟明顯腫脹,色澤深暗,被膜下可見大量血色滲出液,再灌注12 h者較6 h者腎臟病變更為明顯;RC組,腎臟腫脹程度較IR組明顯減輕,顏色較IR組淺,被膜下血色滲出液明顯減少,再灌注12 h者較6 h者改善明顯。(5)腎組織病理學觀察結(jié)果:S組,腎小管上皮、腎血管內(nèi)皮細胞形態(tài)正常,胞漿均勻、紅染,胞核無變形,核仁清晰,無炎性細胞浸潤。IR組,腎小管上皮胞體增大,部分細胞變性、壞死,或溶解、破壞,或空泡狀,腎小管管腔變窄,腔內(nèi)可見大量嗜酸性管型;腎小球充血,嗜酸性增強,嵌頓細胞數(shù)明顯增多,內(nèi)皮細胞腫脹明顯,毛細血管管腔狹窄,腎小球血管內(nèi)有大量已破壞的紅細胞;腎小球內(nèi)、腎小管間有大量中性粒細胞浸潤,并廣泛出血;再灌注12 h者病理改變較6 h者更為嚴重,部分腎小球明顯縮小。RC組,與IR組比較,腎組織病理學表現(xiàn)明顯改善,但仍可見部分腎小管上皮細胞變性、空泡化,腎小管間有少量單核細胞浸潤,出血減輕,再灌注12 h者較6 h者改善明顯。? 結(jié)論:(1)大鼠肢體缺血8 h者,再灌注過程中血壓明顯下降,出現(xiàn)休克表現(xiàn),10 d存活率為0,以此可復制肢體嚴重IR模型。(2)及早給予外源性低濃度CO,可穩(wěn)定動物血壓,防止休克發(fā)生,顯著提高肢體嚴重IR損傷大鼠的生存率。(3)及早給予外源性低濃度CO,可顯著減輕肢體嚴重IR所引發(fā)的腎臟損傷,改善腎功能。(4)本研究結(jié)果提示,經(jīng)氣道給予低濃度(安全范圍內(nèi))的CO,對肢體擠壓傷、斷肢再植術(shù)等引發(fā)的腎等多器官損傷可能有切實的防治效應,且成本低廉、操作簡便。
[Abstract]:Limb ischemia reperfusion (IR) injury occurs mainly in crush injury patients pathological outcome process. Because they can not get timely and effective recovery treatment in delayed resuscitation in severe IR damage. The limbs are extruded longer, IR injury worse. The most serious person can cause multiple organ dysfunction failure and endanger the lives of patients. In multi organs, the kidney is the most frequently involved target organ. Therefore, kidney injury prevention and treatment is the key link in such patients. The carbon monoxide (CO) found in the study, the body organ pathological conditions suffered IR damage, CO has cytoprotective effect. This research the group confirmed that the limb ischemia reperfusion (4 h) (6 h) in rats exposed to low concentrations of CO (0.05% volume fraction), can significantly reduce the limb IR caused by kidney and other organ injury. But CO has the biological effect of resistance vessel dilation, inhalation It is not known about the impact of CO on patients with severe extremities.
Objective: This study intends to replicate the severe limb IR injury model by occlusion of the femoral artery for 8 h and then open, the animal model of medical air inhalation after CO, observing the changes of renal function and renal pathology index, to explore the effect of inhalation of CO severe limb ischemia reperfusion induced kidney damage, as the application way will eventually inhaled CO in prevention and treatment of limb trauma "to provide experimental basis for more time."
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本文編號：1595452